X-染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1通过自噬途径调控Caspase 1介导的胃肠道间质瘤细胞焦亡

目的:探究X-染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(XAF1)对人胃肠道间质瘤(GIST)细胞中半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase 1)介导的细胞焦亡的影响及机制。方法:实时荧光定量PCR和Western blot检测人正常胃黏膜上皮细胞系(RGM-1)和GIST细胞系(GIST-T1、GIST-430、GIST-882)中XAF1的表达水平;采用脂质体介导转染法将pcDNA3.1-XAF1重组质粒染进GIST-882细胞,以构建高表达XAF1的GIST-882细胞。GIST-882细胞分为对照组、pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1空载体质粒)、pcDNA3.1-XAF1组(转染pcDNA3.1-XAF1重组质粒)、pcDNA3.1-XAF1+Rap组(转染pcDNA3.1-XAF1重组质粒并给予自噬激活剂雷帕霉素处理),免疫荧光染色检测各组细胞内微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达情况,Western blot检测各组细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值与Beclin1蛋白表达水平,ELISA法检测各组细胞上清中白细胞介素,IL-1β、IL-18含量,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测各组细胞LDH释放率,Western blot检测各组细胞中Caspase-1及其活化形式cleaved-Caspase-1、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、消皮素D(GSDMD)蛋白表达水平。结果:与RGM-1细胞比较,GIST-T1、GIST-430、GIST-882细胞中XAF1 mRNA和蛋白相对表达量显著减少(P<0.05);细胞转染后,pcDNA3.1-XAF1组GIST-882细胞中XAF1 mRNA和蛋白相对表达量均显著高于pcDNA3.1组、对照组(P<0.05)。与对照组比较,pcDNA3.1-XAF1组GIST-882细胞内LC3荧光强度明显减弱,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin1蛋白相对表达量显著减少(P<0.05),细胞上清液IL-1β、IL-18含量及LDH释放率显著升高(P<0.05),Caspase-1、cleaved-Caspase-1、NLRP3、GSDMD蛋白相对表达量也显著增加(P<0.05);与pcDNA3.1-XAF1组比较,pcDNA3.1-XAF1+Rap组GIST-882细胞内LC3荧光强度明显增强,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin1蛋白相对表达量显著增加(P<0.05),同时,细胞上清液IL-1β、IL-18含量及LDH释放率显著下降(P<0.05),Caspase-1、cleaved-Caspase-1、NLRP3、GSDMD蛋白相对表达量也显著减少(P<0.05)。结论:XAF1在GIST细胞中表达下降,提高XAF1表达能通过抑制自噬从而促进Caspase 1介导的GIST细胞焦亡,发挥抗肿瘤作用。

X-染色体连锁的凋亡抑制蛋白对新生小鼠脑缺氧缺血后细胞色素C释放的影响

目的探讨X-染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)对未成熟脑缺氧缺血(HI)后细胞色素C从线粒体释放的影响。方法新生9日龄转基因XIAP过度表达C57BL/6小鼠(XIAP组)及同期野生型9日龄C57BL/6小鼠(野生组)在HI后不同时间点处死取脑,部分脑组织进行手工匀浆后差速离心分离胞浆和线粒体成分进行Western蛋白印迹,部分脑组织进行细胞色素C免疫组化染色。结果Western蛋白印迹显示,HI后24h缺血侧脑组织线粒体中细胞色素C的含量较对侧减少,而胞浆中细胞色素C的含量较对侧增加(细胞色素C从线粒体释放);XIAP组脑组织线粒体中细胞色素C释放量明显少于野生组。免疫组化结果显示HI后3h、24h,XIAP组大脑皮层和海马CA1区细胞色素C阳性细胞数明显低于野生组。结论XIAP过度表达可抑制HI后细胞色素C从线粒体向胞浆的释放。

X-性染色体连锁凋亡抑制蛋白与口腔鳞癌细胞Tca8113化疗耐药的关系

目的研究X-性染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在口腔鳞癌细胞Tca8113中的表达水平,并探讨XIAP表达与Tca8113细胞对化疗药物耐药性之间的关系。方法用平阳霉素(PYM)间歇性加药,逐步递增剂量,采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测药物处理前后细胞对PYM的敏感性,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测XIAP在药物处理前后的各Tca8113细胞组中的表达变化,并探讨XIAP与细胞耐药性的关系。结果Tca8113细胞在PYM间断作用下产生耐受,Tca8113-1-10组、Tca8113-10-10组耐药细胞对PYM的半数有效浓度(IC50)分别为(12.758±0.030)、(18.986±0.150)μg·mL-1。Tca8113-1-20、Tca8113-10-20组耐药细胞对PYM的IC50分别为(26.302±0.072)、(35.294±0.115)μg·mL-1。XAIP的表达水平与细胞对PYM的耐药有相关性(P<0.01)。结论XIAP在口腔鳞癌中的表达水平升高,可能与鳞癌的化疗耐药性有关,这可作为口腔鳞癌基因治疗的一个新靶点。

X染色体连锁凋亡抑制基因小分子抑制剂Embelin对宫颈癌细胞株HeLa细胞凋亡的影响及分子机制

目的:研究X染色体连锁凋亡抑制基因(XIAP)小分子抑制剂Embelin在体外对宫颈癌细胞株He La生长的影响,并探讨其作用机制。方法:应用CCK-8检测不同浓度Embelin对宫颈癌细胞株He La增殖的影响;利用流式细胞仪检测Embelin对He La细胞凋亡的影响;Western blot方法检测Embelin作用后细胞XIAP、Caspase-3、Caspase-9表达的变化。结果:Embelin对宫颈癌细胞株He La增殖具有显著抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05);经不同浓度Embelin处理后,He La凋亡率明显增高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);经Embelin作用24 h后,He La细胞Caspase-9,Caspase-3,PARP被激活,表达增加。结论:Embelin在体外可显著抑制He La细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是通过拮抗XIAP的作用,激活Caspase依赖性的细胞凋亡途径。

杏仁核注射红藻氨酸诱导大鼠边缘叶癫痫发作时海马中Smac和XIAP蛋白的表达

应用红藻氨酸(kainic acid,KA)诱导的大鼠边缘叶癫痫发作模型,检测第二个线粒体源的半胱天冬蛋白酶激活物/直接与凋亡抑制蛋白结合的低等电点蛋白(second mitochondrial activator of caspases/direct inhibitor of apoptosis protein-binding protein oflow isoelectric point[PI],Smac/DIABLO)和X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(X-chromosome-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)在癫痫大鼠海马神经元表达。单侧杏仁核内注射KA诱导癫痫发作,1 h后用安定终止发作,然后分别用TUNEL染色和cresvl violet染色观察海马神经元存活和凋亡的变化,用免疫荧光和Western blot检测海马Smac/DIABLO、XIAP和半胱天冬蛋白酶-9(caspase-9)的表达。结果表明,发作终止2 h时KA注射同侧海马CA3区细胞浆内Smac/DIABLO蛋白表达增加,4h时caspase-9出现裂解片断,8 h时出现TUNEL阳性细胞,24 h时达高峰。脑室内注射caspase-9抑制剂z-LEHD-fluoromethylketone(z-LEHD-fmk)可减少TUNEL阳性细胞,增加存活神经元。发作后KA注射同侧海马CA3区神经元caspase-9免疫反应性增强,Smac/DIABLO和XIAP弥散于整个神经元内。对侧海马未检测到TUNEL阳性细胞及Smac/DIABLO和XIAP蛋白的上述变化。以上结果提示,癫痫发作可诱导Smac/DIABLO蛋白从?

XIAP过度表达对新生小鼠缺氧缺血后脑组织硝基酪氨酸和4-羟基壬烯醛表达的影响

目的探讨X-染色体连锁的凋亡抑制剂(XIAP)过度表达对正常凋亡相关蛋白的影响,以及XIAP对未成熟脑在缺氧缺血(HI)后硝基酪氨酸和4-羟基壬烯醛(4-HNE)形成的影响。方法新生9日龄转基因XIAP过度表达及同期野生型C57BL/6小鼠在HI(结扎左颈总动脉加10%氧气吸入55min)后3、24、72h处死,取脑组织进行硝基酪氨酸和4-HNE免疫组化染色;部分未进行HI的动物取脑组织进行匀浆用于Western蛋白印迹。结果West鄄ern蛋白印迹显示雌性转基因动物XIAP蛋白表达量高于雄性,XIAP过度表达组和野生组脑组织中细胞色素C、凋亡诱导因子、半胱天冬酶-9、半胱天冬酶-3、诱导型一氧化氮合酶、神经元型一氧化氮合酶含量差异均无显著性。免疫组化显示HI后24hXIAP过度表达组大脑皮层和海马CA1区硝基酪氨酸和4-HNE阳性细胞数明显低于野生组(P均<0.01)。结论XIAP过度表达对正常情况下凋亡相关蛋白表达无影响,其对缺氧缺血性脑损伤的保护作用可能与减轻氧化应激损伤有关。

PTEN、TIMP-1及XIAP在老年喉癌癌前病变中的表达及临床意义

目的探讨第10同源染色体丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)及X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在老年人喉癌癌前病变中的表达及临床意义。方法收集2018年4月—2020年4月接受手术治疗的97例喉癌新鲜手术切除癌组织,同时选取上述患者距肿瘤3 cm的癌旁正常组织。比较不同组织、生存与死亡患者PTEN、TIMP-1及XIAP表达情况,分析PTEN、TIMP-1及XIAP联合检测对老年人喉癌癌前病变的预测效能。结果喉癌组织中PTEN、TIMP-1阴性表达率高于癌旁组织,XIAP阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05)。97例喉癌随访期间病死率为29.90%。死亡组PTEN、TIMP-1阴性表达率高于生存组,XIAP阳性表达率高于生存组(P<0.05)。淋巴结转移、浆膜浸润、分化程度、PTEN阴性、TIMP-1阴性、XIAP阳性为喉癌患者死亡的独立危险因素(P<0.05,P<0.01)。PTEN、TIMP-1、XIAP三者联合检测敏感度、特异度高于PTEN、TIMP-1、XIAP单一检测(P<0.05)。结论PTEN、TIMP-1及XIAP联合检测有助于老年人喉癌癌前病变的早期诊断。

XIAP过度表达对未成熟脑急性放射损伤后脑组织硝基酪氨酸和4-羟基壬烯醛表达的影响

目的探讨急性放射损伤对未成熟脑高增殖细胞的影响以及X-染色体连锁的凋亡抑制剂(XIAP)过度表达对放射后氧化应激产物硝基酪氨酸(NT)和4-羟基壬烯醛(4-HNE)形成的影响。方法新生10日龄XIAP过度表达转基因C57BL/6小鼠(XIAP组)及同期野生型10日龄C57BL/6小鼠在8Gy单一剂量放射线照射后6h或7d处死取脑,进行脑组织硝基酪氨酸和4-羟基壬烯醛免疫组化染色,以及海马齿状回、侧脑室下区面积测量。结果照射后7d海马齿状回、侧脑室下区面积较对照组明显下降,照射后脑组织硝基酪氨酸和4-羟基壬烯醛免疫活性明显增加,照射后6hXIAP过度表达组大脑海马齿状回、侧脑室下区硝基酪氨酸和4-HNE的阳性细胞数明显低于野生组(P<0.05,P<0.001)。结论放射线照射可导致活性氧、活性氮基团过度表达,进而引起高增殖细胞损伤;XIAP过度表达可能抑制照射后硝基酪氨酸和4-HNE的形成。

XIAP及PCNA表达水平与非小细胞肺癌患者临床分期及预后的关系

目的探讨X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)及增殖细胞核抗原(PCNA)表达与非小细胞肺癌患者临床分期及预后的关系。方法以本院2012年1月至2016年12月收治的260例非小细胞肺癌患者为研究对象,分析患者血清中XIAP及PCNA表达水平与非小细胞肺癌患者临床分期及预后的关系。结果 XIAP、cyclin D1、Smac、PCNA、E-cadherin、Ki67、CD34、VEGF及EGFR表达水平与非小细胞肺癌临床分期密切相关,且随着临床分期增高,上述蛋白表达水平升高(P<0.05);XIAP及PCNA表达水平与非小细胞肺癌患者预后呈负相关,即非小细胞肺癌患者XIAP及PCNA表达水平越高,预后越差(P<0.05)。结论 XIAP及PCNA蛋白与非小细胞肺癌患者临床分期及预后有关。

灯盏花素对谷氨酸诱导大鼠海马神经细胞毒性的保护作用

选用培养的海马神经细胞研究灯盏花素(breviscapine,Bre)对谷氨酸(glutamate,Glu)诱导神经细胞毒性的保护作用及其机制。新生大鼠海马神经细胞体外培养8 d后,用L-谷氨酸(0.1,0.5及1.0 mmol.L-1)处理30min;灯盏花素处理组在加入L-谷氨酸的同时给予不同剂量的灯盏花素(10,20及40μmol.L-1);继续正常培养24h后,用Annexin V联合流式细胞仪检测细胞的凋亡和坏死率;RT-PCR分析凋亡蛋白抑制剂XIAP mRNA的表达。结果表明,L-谷氨酸浓度依赖性地诱导神经细胞发生凋亡和坏死,并使细胞XIAP mRNA表达发生浓度依赖性的双向变化:0.1 mmol.L-1L-谷氨酸使神经细胞XIAP mRNA表达增强,而较高浓度使XIAP mRNA表达下调。灯盏花素(20和40μmol.L-1)可有效抑制谷氨酸诱导的神经细胞死亡,分别使细胞凋亡率下降30.4%和40.1%,坏死率下降32.5%和38.8%;并上调XIAP mRNA表达45.1%和54.9%。激光共聚焦显微技术联合Fluo-3荧光标记检测表明,L-谷氨酸处理过程中海马神经细胞内Ca2+水平显著升高,而灯盏花素可抑制谷氨酸引起的细胞内Ca2+超载(P<0.01)。以上结果提示,灯盏花素可能通过抑制细胞Ca2+超载,调节凋亡抑制因子XIAP的表达而有效保护谷氨酸对神经细胞的兴奋性毒性作用。

XAF1简介及其与肿瘤关系的研究现状

XIAP相关因子1(XAF1)是一个新近发现的通过与XIAP直接结合拮抗其抗凋亡作用的蛋白因子。XAF1在多种肿瘤细胞和组织中存在低表达或表达缺失。XAF1的基因沉默与其启动子高甲基化明显相关。XAF1过度表达可诱导凋亡,抑制肿瘤生长。因此,XAF1是一个新的肿瘤抑制基因,有可能成为肿瘤治疗的新靶向基因。

紫杉醇联合奥沙利铂对非小细胞肺癌模型小鼠的治疗作用

目的观察紫杉醇联合奥沙利铂对荷瘤裸鼠非小细胞肺癌治疗效果以及对PDCD5和XIAP表达的影响。方法制备裸鼠肺癌荷瘤模型,将荷瘤小鼠随机分为空白组、0.9%氯化钠溶液组、奥沙利铂组、紫杉醇组和紫杉醇联合奥沙利铂组;q-PCR检测各组PDCD5和XIAP基因表达水平;Western bolt分析各组PDCD5和XIAP蛋白表达情况;对比分析各组肿瘤组织重量。结果紫杉醇联合奥沙利铂组PDCD5 mRNA表达水平最高(P<0.01),XIAP mRNA表达水平最低(P<0.01);紫杉醇联合奥沙利铂组PDCD5蛋白表达最高(P<0.01),XIAP蛋白表达最低(P<0.01);对比各分组肿瘤组织重量,紫杉醇联合奥沙利铂组肿瘤质量最小(P<0.01)。结论紫杉醇联合奥沙利铂化疗能显著增加PDCD5表达和降低XIAP表达,能使已发生的非小细胞肺癌组织质量显著减少。

甲基莲心碱抑制腺样囊性癌生长的机制研究

目的研究甲基莲心碱对腺样囊性癌生长的作用及其作用机制。方法涎腺腺样囊性癌细胞SACC-83随机分为对照组、甲基莲心碱低剂量组、甲基莲心碱中剂量组、甲基莲心碱高剂量组。甲基莲心碱低、中、高剂量组分别用10,20,40μmol·L^(-1)甲基莲心碱处理细胞,对照组细胞用等量的培养基处理。以噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖情况;以流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;以Transwell检测细胞迁移;以蛋白质印迹(Western Blot)法检测高温需求因子A2(Omi/HtrA2)、X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)表达水平以及增殖、凋亡、迁移相关蛋白表达水平。结果对照组和甲基莲心碱低、中、高剂量组细胞凋亡率分别为(3.31±0.68)%,(13.43±1.76)%,(24.71±2.43)%和(42.37±2.95)%,迁移细胞数分别为134.18±8.28,94.86±6.90,68.81±6.43和50.24±5.27。对照组细胞中Omi/HtrA2蛋白、XIAP蛋白、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、切割型胱天蛋白酶-3(cleaved caspase-3)蛋白和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达水平分别为0.91±0.08,0.73±0.03,0.78±0.09,0.22±0.04和0.93±0.07,不同剂量甲基莲心碱作用后Omi/HtrA2蛋白、XIAP蛋白、CyclinD1蛋白和MMP-9蛋白的表达水平明显降低,cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05),且甲基莲心碱对SACC-83细胞的作用具有剂量依赖性。结论甲基莲心碱可以通过调控Omi/HtrA2和XIAP蛋白对腺样囊性癌细胞的生长起到抑制作用。

XIAP反义寡核苷酸对肾癌细胞的作用及对其化疗敏感性的影响

X染色体连锁的凋亡抑制蛋白（XI-AP）是新近发现的强有力的凋亡抑制因子，在人类肿瘤中过度表达，这使其成为恶性肿瘤诊断和治疗的新靶点。我们合成靶向XIAP的反义寡核苷酸（ASODN），将其转染肾癌细胞株786-0，观察其对786-0细胞增殖和凋亡的影响及对化疗药物的作用。

应用XIAP siRNA逆转卵巢癌顺铂耐药性的研究

目的本研究旨在探讨应用siRNA下调XIAP在卵巢癌耐药细胞中的表达而逆转其对顺铂的耐药性。方法应用Western Blot、Hoechst 33258等检测卵巢癌顺铂敏感细胞株COC1和耐药株COC1/DDP中XIAP表达和卵巢癌细胞的凋亡率,并将XIAPsiRNA导入耐药细胞,比较转染前、后耐药细胞对顺铂耐药性的改变。结果卵巢癌耐药细胞COC1/DDP中XIAP蛋白表达明显比敏感细胞COC1中高(P<0.05)。XIAP siRNA可下调耐药细胞COC1/DDP中XIAP的表达,并显著增加对顺铂敏感性(P<0.05)。结论XIAP si RNA可在一定程度上逆转卵巢癌顺铂耐药。

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠XIAP、Caspase-12的表达及参附注射液对其影响

研究新生大鼠脑缺氧缺血后X-染色体连锁的细胞凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-12(Caspase-12)在脑海马神经元细胞中的动态变化及参附注射液对其影响。新生7 d SD大鼠随机分为3组:假手术组(S组)、脑缺氧缺血(HI)+生理盐水对照组(C组)、HI+参附治疗组(SF组),每一组按照观测的时间点不同分为3 h,6 h,12 h,24 h,3 d,7 d 6个亚组,每组8只,用Rice法制备新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型,在每个时间点将大鼠断头取右侧海马脑组织匀浆,用RT-PCR的方法检测脑海马组织Caspase-12mRNA、XIAPmRNA的表达,用TUNEL染色法检测相应时间点光镜下脑海马组织的凋亡。脑缺氧缺血后3 h XIAP mRNA表达明显上调并达到峰值,持续高表达至3 d(P<0.01或0.05),7 d与假手术组比较无统计学意义(P>0.05);参附组XIAP mRNA表达在3,6,12,24 h较生理盐水对照组比较明显上调(P<0.01),在缺血后3 d与对照组之间差异无统计学意义。S组右侧海马神经元Caspase-12mRNA表达很弱;C组Caspase-12mRNA表达在12 h达到峰值,SF组Caspase-12mRNA表达在6 h,12 h,24 h,3 d较C组明显下降(P<0.001)。TUNEL显示HI后3hC组和SF组即发现结扎侧脑海马有少量的凋亡细胞,随着缺氧缺血时间的延长,凋亡细胞逐渐增多,24 h达到高峰后下降;SF组在HI后24 h,3 d,7 d均明显低于C组(P<0.05)。新生大鼠缺氧缺血后脑损伤后XIAP、Caspase-12表达均是增加的,但各自有其表达时相特异性,HI后脑组织细胞的凋亡明显增加,Caspase-12、XIAP参与了新生大鼠HIBD后神经元损伤的病理机制;参附注射液能够上调XIAP、下降Caspase-12的表达,从而起到对HIBD新生大鼠保护作用。