X-盒结合蛋白1的生理及病理生理学作用

X-盒结合蛋白1(XBP-1)是未折叠蛋白反应的重要组分,有剪接型XBP-1(XBP-1S)和非剪接型XBP-1(XBP-1U)两种形式。当细胞处于内质网应激状态时,XBP-1由活化转录因子6(ATF6)诱导,经IRE1α非传统剪接,转录有功能的XBP-1S,活化未折叠蛋白反应。XBP-1是一种重要的转录因子,对细胞生长和分化具有重要调控作用,并与人类多种疾病的发生和发展相关。

急性心肌梗死患者血清中剪切型X-盒结合蛋白1表达与糖尿病及其他临床因素的相关性

目的分析急性心肌梗死(AMI)患者入院24 h内血清中剪切型X-盒结合蛋白1(Spliced x box binding protein 1,XBP-1S)浓度与患者基本资料、临床指标及影像学指标的相关性。方法按XBP-1S血清浓度中位数164.7 pg/ml,将AMI患者86例分成2组:低表达组(<164.7 pg/ml,n=43)和高表达组(≥164.7 pg/ml,n=43),收集患者基本资料,临床资料和冠状动脉造影影像学资料进行组间比较。XBP-1S血清浓度与资料间的相关分析;结果组间比较发现高表达组糖尿病患病率显著高于低表达组(P <0.05);高表达组与低表达组两组冠状动脉粥样硬化病变血管分支数构成比有相关关系(P <0.05);XBP-1S血清浓度与血管的分支数呈正相关。结论在糖尿病患病率高的患者组中AMI起病急性期内血清中XBP-1S可能表达增高明显,并且与病变血管的分支数呈正相关。

血清剪切型X-盒结合蛋白1水平与急性心肌梗死急诊经皮冠状动脉介入治疗后心肌灌注损伤的相关性研究

目的探讨血清剪切型X-盒结合蛋白1(XBP-1S)水平与急性心肌梗死(AMI)急诊经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后发生心肌灌注损伤的关系。方法回顾性分析2018年1月至2020年1月期间本院急诊接受PCI治疗的150例AMI患者病历资料,依据PCI 6 h后是否发生心肌灌注损伤,将入选者分为发生组与未发生组,比较两组一般资料及检测实验室指标,重点分析PCI治疗前血清XBP-1S水水平与患者心肌灌注损伤的关系。结果全部150例AMI患者,经PCI治疗6h后,发生心肌灌注损伤69例,发生率为46.00%;发生组血清MPO[93.27(87.23,103.72)AUU/L]和XBP-1S[180.03(157.44,203.01)pg/ml]水平均高于未发生组[81.30(75.55,86.25)AUU/L]和[148.31(139.28,162.25)pg/ml],差异有统计学意义(U=7.136、6.846;P均<0.001);组间其他资料比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Logistic回归分析结果显示,治疗前血清MPO和XBP-1S水平与AMI患者经PCI治疗后发生心肌灌注损伤有关,各指标过表达可能是AMI患者经PCI治疗后发生心肌灌注损伤的风险因子(OR>1,P<0.05)。ROC曲线结果显示,治疗前血清髓过氧化物酶MPO和剪切型X-盒结合蛋白1(XBP-1S)水平单独及联合预测AMI患者经PCI治疗后发生心肌灌注损伤风险的曲线下面积(AUC)>0.80,预测价值较理想,且以治疗前血清MPO和XBP-1S的cut-off值分别为85.980 AUU/L和159.023 pg/ml时,预测价值最佳。结论 AMI患者PCI前血清XBP-1S水平与PCI后心肌灌注损伤有关,可能是患者经PCI治疗后发生心肌灌注损伤的风险因子,对预测患者心肌灌注损伤发生风险有一定价值。

缬沙坦通过下调X-盒结合蛋白1表达抑制糖尿病心肌病大鼠心肌细胞凋亡

目的:研究糖尿病心肌病(DCM)模型大鼠心肌组织中X-盒结合蛋白1(XBP1)与心肌细胞凋亡之间的联系,以及明确缬沙坦抑制心肌细胞凋亡的作用机制。方法:将清洁级雄性8周龄Wistar大鼠50只随机分为两部分:腹腔注射65 mg/kg的柠檬酸盐缓冲液的大鼠为对照组(n=10);腹腔注射链脲佐菌素65 mg/kg大鼠(n=40)注射7天后,收集大鼠尾静脉血测空腹血糖,其中37只连续2次空腹血糖≥16.7mmol/L(300mg/dl)为DCM大鼠建模成功并将其随机分为2组:给予以生理盐水灌胃的为DCM组(n=20),以30mg/kg·d灌胃缬沙坦给药的为DCM+缬沙坦组(n=17)。三组大鼠饲养过程中检测体重、血糖、血压、心功能等指标变化。大鼠16周后处死观察心肌组织结构、细胞形态、胶原分布情况,TUNEL染色观察心肌细胞凋亡,并通过免疫荧光、蛋白印迹法(Western blot)、实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及半定量RT-PCR检测各组大鼠心肌组织中cytochrome c、cleaved caspase 3、葡萄糖调节蛋白78(GPR78)和剪接型XBP1(XBP1-s)表达水平。结果:DCM组大鼠与对照组相比,心肌结构紊乱,胶原含量明显增加,心肌细胞凋亡增加(P<0.05),GRP78、XBP1-s、cleaved caspase 3和cytochrome c蛋白及核糖核酸(RNA)表达水平明显升高(P<0.05),DCM+缬沙坦组与DCM组相比,心肌细胞排列较整齐,心肌间质内和小动脉周围胶原纤维显著减少,心肌细胞凋亡明显减少(P<0.05),GRP78、XBP1-s、cleaved caspase 3和cytochrome c蛋白及RNA表达水平明显下降(P<0.05)。结论:DCM大鼠心肌组织中存在着调节内质网应激的关键因子-XBP1的活化,DCM病程中存在着XBP1调控的内质网应激相关凋亡途径的激活,心肌细胞凋亡增加,而缬沙坦能够抑制DCM大鼠心肌细胞XBP1的激活,减少心肌细胞凋亡。

X-盒结合蛋白1在脑缺血中的作用

X-盒结合蛋白(X-box binding protein 1,XBP1)是碱性亮氨酸拉链结构蛋白,在脑缺血引起的内质网应激反应中扮演着重要角色。XBP1在非内质网应激时以未剪接的X-盒结合蛋白1(X-box binding protein 1-unspliced,XBP1-u)的形式表达,在内质网应激期间表现为剪接的X-盒结合蛋白(X-box binding protein 1-spliced,XBP1-s)的形式。为了充分了解XBP1,该文将从XBP1的两种异构体的结构、分布、定位以及病理生理功能等方面进行综述,并重点探讨XBP1-s在脑缺血后激活氧连-N-乙酰葡萄胺修饰和葡萄糖调节蛋白-78表达以减少氧化应激损伤、促进缺血组织中的内皮细胞增殖保护脑微血管内皮细胞损伤以及调节细胞焦亡等方面的作用。

X-盒结合蛋白1、血管内皮生长因子C在肝癌中的表达及意义

目的检测X-盒结合蛋白1（XBPl），血管内皮生长因子c（VEGF—C）在肝癌组织中的表达，探讨在肝癌发生发展过程中存在未折叠蛋白反应（UPR）的激活。方法采用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）法检测术中取的新鲜42例肝癌标本、15例同个体癌旁1．0em肝组织和15例正常肝组织中XBPl、VEGF—C的mRNA表达，应用Westernblot法检测57例肝癌组织和正常肝组织标本中XBPl、VEGF—C在蛋白水平的表达。结果肝癌组织、癌旁肝组织、正常肝组织中XBPImRNA相对表达量分别为0．4396±0．0241、0．4152±0．0252、0．4095±0．0149，XBPlmRNA在3组之间的表达呈下降趋势（P〈0．05）；肝癌组织、癌旁肝组织、正常肝组织中VEGF—CmRNA相对表达量分别为0．4447±0．0335、0．4195±0．0334、0．4019±0．0259，VEGF—CmRNA在3组之间的表达呈下降趋势（P〈0．05）。在肝癌组织和正常肝组织中均有两种蛋白的表达，但肝癌组织中的表达明显高于正常肝组织。结论肝癌组织中XBPI、VEGF—CmRNA和蛋白的表达一致，均为高表达。

未折叠蛋白反应相关因子葡萄糖调节蛋白78、X-盒结合蛋白1在食管癌中的表达及其意义

目的：探讨未折叠蛋白反应相关因子葡萄糖调节蛋白78（GRP78）及X-盒结合蛋白1（XBP1）在食管鳞状细胞癌中的表达、其对内质网应激（ERS）的激活作用及其在食管癌浸润生长中的作用机制。方法通过免疫组织化学方法检测30例食管鳞状细胞癌及30例正常食管鳞状上皮组织中GRP78、XBP1的表达，分析其与患者预后的关系。结果食管鳞状细胞癌中GRP78阳性表达率为83.3%（25／30），食管正常鳞状上皮组织中为20.0%（6／30）（χ2＝25.833，P＜0.05）。食管鳞状细胞癌中XBP1阳性表达率为70.0%（21／30），食管正常鳞状上皮组织中为26.7%（8／30）（χ2＝20.872，P＜0.05）。肿瘤浸润肌层者的GRP78和XBP1阳性表达率明显高于浸润黏膜层者。结论食管鳞状细胞癌组织中GRP78和XBP1高表达，可能参与了食管鳞状细胞癌的发生、发展。

X-盒结合蛋白1和热休克蛋白靶向的树突状细胞疫苗对肾癌肿瘤免疫治疗作用的比较研究

目的:应用树突状细胞(DC)与X-盒结合蛋白1(XBP1)共培养制备XBP1-DC疫苗,通过与热休克蛋白70(HSP70)-DC疫苗对GRC2细胞的免疫杀伤作用进行比较,初步探讨应用XBP1蛋白与DC共培养制备融合瘤疫苗的可行性。方法:从肾癌患者的外周血中分离出外周血单核细胞(PBMC),经体外培养诱导为DC。以HSP70和XBP1与DC共培养制备HSP70-DC和XBP1-DC融合瘤疫苗。用HSP70-DC和XBP1-DC疫苗分别刺激患者外周血分离的T淋巴细胞,采用ELISA法检测所产生的CTL反应。以经HSP70-DC和XBP1-DC刺激形成的CTL作为效应细胞,以正常细胞、GRC2为靶细胞,测不同效靶比(10:1、20:1)下,效应细胞杀伤靶细胞的能力。结果:PBMC经细胞因子诱导后,CD1a、CD86、CD83、HLA-DR表达水平均显著高于诱导前表达水平(P<0.05)。与DC组比较,XBP1-DC疫苗致敏后,CTL细胞均释放INF-γ显著增加,差异有统计学意义(P<0.05),而与HSP70-DC疫苗致敏的CTL细胞比较,XBP1-DC释放的INF-γ差异无统计学意义(P>0.05)。随着效靶比的升高,各组CTL细胞对GRC2细胞和RCC细胞的杀伤率均相应提高,差异均有统计学意义(P<0.05)。在不同效靶比时,HSP-DC和XBP1-DC免疫的CTL对GRC2和GCC的杀伤作用差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:XBP1与DC共培养后,能增强DC的抗原呈递能力,增强T淋巴细胞分泌细胞因子的能力,从而特异性杀伤肾癌GRC2细胞系,且杀伤作用与HSP70-DC融合瘤疫苗一致,在抗肿瘤杀伤作用中具有一定的可行性。

X-盒结合蛋白1条件性基因敲除小鼠模型的建立

目的建立可进行条件性敲除X-盒结合蛋白1(Xbp1)基因的flox杂合子小鼠。方法通过ET-clone的方法构建基于cre-loxp系统和FLP-frt系统的条件性基因打靶载体。载体线性化后电转JM8A3 ES细胞,经G418和Ganc筛选获得抗性ES细胞克隆。经长片段PCR鉴定获得正确同源重组的阳性克隆。阳性ES细胞经克隆扩增后,注射入C57BL/6J小鼠的囊胚中,获得嵌合鼠,筛选出高比例嵌合小鼠与野生型C57BL/6J小鼠交配后获得阳性F1代小鼠,并分别进行PCR和测序鉴定。结果成功构建打靶载体,共获得144个抗性ES细胞,克隆经长片段PCR鉴定,共获得4个正确同源重组的阳性克隆。获得4只阳性F1代小鼠,经测序鉴定正确。Xbp1基因flox杂合子小鼠表型无明显异常。结论成功构建了条件性敲除Xbp1基因的flox杂合子小鼠,为未来研究器官或组织特异性的Xbp1生物学作用奠定了基础。

内质网应激相关因子X-盒结合蛋白-1在人体肝癌组织中的表达

目的研究内质网应激(ERS)相关因子X-盒结合蛋白(XBP)-1在肝癌组织中的表达情况,以此证实肝癌演进中是否存在ERS反应的活化。方法病理学诊断确定的45例肝癌组织、15例癌旁组织和15例正常肝组织,采用逆转录(RT)-聚合酶链反应(PCR)和Western印迹法检测XBP-1 mRNA和蛋白表达。结果 RT-PCR结果表明,肝癌组织中XBP-1 mRNA表达(0.444 6±0.035 7)显著高于癌旁组织(0.421 8±0.033 8)、正常肝组织(0.402 7±0.026 9)(P<0.05)。Western印迹结果表明肝癌组织中XBP-1蛋白的表达量显著高于癌旁组织和正常肝组织(P<0.05)。结论肝癌发生及发展过程中存在ERS反应的激活。

内质网应激前后肝癌细胞中C/EBP同源蛋白及X-盒-结合蛋白-1的表达

目的:观察内质网应激(ERS)标志蛋白X-盒-结合蛋白-1(XBP-1)和C/EBP同源蛋白(CHOP)在正常肝细胞及不同分化程度肝癌细胞中的表达。方法:将培养获得的正常肝细胞LO2、高分化肝癌细胞株Hep G2及低分化肝癌细胞株SMMC-7721细胞分为无水乙醇未处理组(ERS前组)和无水乙醇处理组(ERS组),ERS组的3种细胞分别给予无水乙醇处理获得ERS细胞模型;采用Western Blot方法检测3种细胞ERS前后XBP-1、CHOP表达。结果:在ERS前组中,XBP-1表达从高到低依次为LO2、Hep G2、SMMC-7721;ERS组中,XBP-1在3种细胞中的表达都上调,与ERS前组比较差异有统计学意义(P<0.05),增加量从高到低依次为SMMC-7721、LO2及Hep G2,3种细胞间两两比较差异无统计学意义(P>0.05);ERS前后,Hep G2细胞中均无CHOP表达;ERS前组中,CHOP表达高低依次为SMMC-7721、LO2;ERS组中,CHOP在LO2细胞及SMMC-7721细胞表达均上调,与ERS前组比较差异有统计学意义(P<0.05),而在SMMC-7721细胞中表达上调更明显(与LO2细胞比较,P<0.05)。结论:发生ERS后,LO2、Hep G2及SMMC-7721细胞中XBP-1的表达水平都升高,分化程度低的SMMC-7721细胞中的XBP-1及CHOP的表达升高更明显。

平喘宁调节IRE-1α-XBP-1s信号轴干预哮喘大鼠气道炎症的机制研究

目的:探究平喘宁对哮喘大鼠气道炎症的防治作用及机制。方法:将105只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、地塞米松组、桂龙咳喘宁组、平喘宁高剂量组、平喘宁中剂量组、平喘宁低剂量组,每组15只。以卵清蛋白联合氢氧化铝复制大鼠哮喘模型,造模21 d后,各给药组分别灌胃给予相应药物,正常组、模型组灌胃给予等体积的生理盐水,1次/d,连续4周。4周后,在进行哮喘激发试验后2 h内解剖大鼠并取出肺组织,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)。HE染色观察肺组织中平滑肌厚度、炎症细胞浸润程度等相应病理的改变;ELISA法检测BALF中IL-5、IL-17水平;RT-qPCR法检测肺组织IRE-1αmRNA、XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA、Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA、Scara3 mRNA相对表达量;Western blotting法检测肺组织中IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65蛋白相对表达量。结果:HE染色结果显示,与模型组比较,各给药组(平喘宁低剂量组、平喘宁中剂量组、平喘宁高剂量组、地塞米松组、桂龙咳喘宁组)大鼠肺组织病理情况都有不同程度的缓解。ELISA结果显示,与正常组比较,模型组大鼠BALF中IL-5、IL-17水平均明显升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠BALF中IL-5、IL-17水平均明显降低(P<0.01),且平喘宁具有剂量依赖性;平喘宁低、中剂量组大鼠BALF中IL-5、IL-17水平均高于地塞米松组和桂龙咳喘宁组(P<0.01);平喘宁高剂量组大鼠BALF中IL-5水平明显高于地塞米松组和桂龙咳喘宁组(P<0.01),而IL-17水平与地塞米松组和桂龙咳喘宁组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。RT-qPCR结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肺组织IRE-1αmRNA、XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA相对表达量均明显升高(P<0.01),Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA、Scara3 mRNA相对表达量均明显降低(P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠肺组织IRE-1αmRNA、XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA相对表达量均明显降低(P<0.01),Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA、Scara3 mRNA相对表达量均明显升高(P<0.05或P<0.01);平喘宁低剂量组大鼠肺组织IRE-1αmRNA、XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA相对表达量均明显高于地塞米松组和桂龙咳喘宁组(P<0.01),Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA、Scara3 mRNA相对表达量均明显低于地塞米松组和桂龙咳喘宁组(P<0.01);平喘宁中剂量组大鼠肺组织XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA相对表达量均明显高于地塞米松组和桂龙咳喘宁组(P<0.01),Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA、Scara3 mRNA相对表达量均明显低于地塞米松组和桂龙咳喘宁组(P<0.05或P<0.01),而IRE-1αmRNA相对表达量与地塞米松组和桂龙咳喘宁组比较,差异无统计学意义(P>0.05);平喘宁高剂量组大鼠肺组织IRE-1αmRNA相对表达量均明显低于地塞米松组和桂龙咳喘宁组(P<0.01),而Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA相对表达量均明显高于地塞米松组(P<0.01);平喘宁高剂量组Hgsnat mRNA、Pdgfrb mRNA相对表达量与桂龙咳喘宁组比较,差异无统计学意义(P>0.05),XBP-1s mRNA、NF-κB p65 mRNA、Scara3 mRNA与地塞米松组和桂龙咳喘宁组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Western blotting结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肺组织IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65蛋白相对表达量均明显升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠肺组织IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65蛋白相对表达量均明显降低(P<0.01);平喘宁低剂量组大鼠肺组织IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65蛋白相对表达量均明显高于地塞米松组和桂龙咳喘宁组(P<0.01);平喘宁中剂量组大鼠肺组织XBP-1s、NF-κB p65蛋白相对表达量均明显高于地塞米松组和桂龙咳喘宁组(P<0.05或P<0.01),IRE-1α蛋白相对表达量明显高于桂龙咳喘宁组(P<0.05),而IRE-1α蛋白相对表达量与地塞米松组比较,差异无统计学意义(P>0.05);平喘宁高剂量组大鼠肺组织IRE-1α、XBP-1s、NF-κB p65蛋白相对表达量与地塞米松组和桂龙咳喘宁组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:平喘宁可通过调节IRE-1α-XBP-1s信号轴改善OVA诱导的哮喘大鼠气道炎症性损伤。

血清ITLN-1、XBP1S水平对心肌梗死PCI患者预后的预测价值

目的探讨血清新型细胞因子内分泌素(1ITLN-1)、剪接型X-盒结合蛋白(1XBP1S)水平联合检测对心肌梗死(MI)经皮冠状动脉介入(PCI)患者术后的预后预测价值。方法纳入2018年1月至2021年1月接收的因患MI进行PCI术的患者120例(试验组),根据MI患者PCI术后预后发生情况将其分为预后良好组(82例)和预后不良组(38例),选取同期健康体检者100例为对照组。酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清ITLN-1、XBP1S水平,COX多因素回归分析MI患者PCI术后预后不良事件的影响因素,受试者工作曲线(ROC)评价血清ITLN-1、XBP1S在MI中的临床意义。结果与对照组比较,试验组患者血清ITLN-1显著降低,XBP1S显著升高,差异统计学意义(P<0.05)。与预后良好组比较,预后不良组患者血清ITLN-1显著降低,IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、XBP1S显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素COX回归分析显示,TNF-α、XBP1S均是MI患者PCI术后预后不良的独立危险因素(P<0.05)。高水平ITLN-1是冠心病患者PCI术后预后不良的独立保护因素(P<0.05)。ROC结果显示,血清ITLN-1、XBP1S水平及二者联合预测MI患者PCI术后预后不良的AUC分别为0.701、0.728、0.846,其中联合预测AUC显著高于二者单独预测AUC(Z=4.075、4.410,P<0.05)。结论MI患者PCI术后患者血清ITLN-1水平降低、XBP1S水平升高,与不良预后的发生关系密切,均有望成为MI患者PCI术后不良预后发生的预测因子。

NAMPT在多发性骨髓瘤中的作用机制及其临床意义

目的:探讨烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)在多发性骨髓瘤中的作用机制及其临床价值。方法:采用RT-q PCR和Western blot方法检测多发性骨髓瘤细胞和正常骨髓单个核细胞中NAMPT的表达水平,同时通过细胞增殖与凋亡实验、小干扰RNA沉默、过表达实验和染色质免疫共沉淀实验分析NAMPT的生物学功能。结果:多发性骨髓瘤细胞系(MM1R、MM1S、U266和RPMI-8226)中NAMPT m RNA和蛋白的表达水平较正常骨髓单个核细胞均显著升高(P<0.001),且在U266细胞中最明显。与Si-NC组相比,Si-NAMPT组转染24、48、72 h均显著抑制U266细胞增殖(P=0.006,P<0.001,P=0.001),转染48 h时U266细胞凋亡率升高显著(P<0.001)。与Flag-NC组比较,Flag-NAMPT组U266细胞增殖均显著升高(P=0.003,P=0.002,P<0.001),转染48 h时细胞凋亡率明显降低。在U266细胞中NAMPT的表达在转录水平受到XBP1的调控。用硼替佐米处理XBP1或NAMPT稳定敲除或经MKC3946预处理的U266细胞后细胞增殖率均显著下降,BAX m RNA和蛋白水平显著升高,BCL-2 m RNA和蛋白水平显著下调,Caspase-3裂解度显著下降,Caspase-3/7活性急剧增加(P<0.05)。结论:NAMPT在多发性骨髓瘤细胞系中高表达,促进多发性骨髓瘤细胞增殖,抑制细胞凋亡。在U266细胞中NAMPT受IRE1α-XBP1信号通路的转录调控。稳定敲除NAMPT或阻断IRE1α-XBP1通路可显著提高U266细胞对硼替佐米的敏感性。

内质网分子伴侣GRP94、GRP78和XBP1在病理性瘢痕中的表达初探

目的:检测内质网应激反应的关键分子葡萄糖调节蛋白94(GRP94)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和X-盒结合蛋白1(XBP1)mRNA在病理性瘢痕的表达,探讨其基因表达及内质网应激反应与病理性瘢痕形成及转归的关系。方法:用RT-PCR法检测GRP94、GRP78和XBP1mRNA在:①瘢痕疙瘩(13例)、增生性瘢痕(17例)和正常皮肤(15例)组织以及体外培养的瘢痕疙瘩(5例)、增生性瘢痕(5例)和正常皮肤(6例)成纤维细胞中的表达;②体外培养瘢痕疙瘩和增生性瘢痕成纤维细胞(各5例)中经0.1mg/ml氢化可的松作用前后的表达。结果:①GRP94、GRP78和XBP1mRNA在瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮肤组织及其成纤维细胞中的表达均无显著性差异(P>0.05);②0.1mg/ml氢化可的松作用后,GRP94mRNA在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕来源的成纤维细胞中的表达量均显著下降,具有统计学意义(P<0.01);而GRP78和XBP1mRNA在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕来源的成纤维细胞中的表达量改变均无显著性差异(P>0.05)。结论:内质网分子伴侣GRP94、GRP78和XBP1在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕组织及其成纤维细胞中基因转录与正常皮肤组织及其成纤维细胞中基因转录水平一致;GRP94mRNA的表达量显著下降可能是糖皮质激素治疗病理性瘢痕的机制之一。

单宁酸联合顺铂增强肝癌HepG2细胞IRE1-XBP1通路的激活水平

本文主要研究单宁酸(TA)联合顺铂(CDDP)对肝癌HepG2细胞内质网应激IRE1-XBP1通路的影响。用180μM单宁酸、0.9μg/m L顺铂单独用药或者联合用药处理肝癌HepG2细胞24 h或48 h后,应用流式细胞技术测定HepG2细胞的凋亡率,实时荧光定量PCR技术(q-RT-PCR)、蛋白免疫印迹(western blot)技术检测IRE1α和XBP-1分子的表达水平。MTT结果显示,单宁酸和顺铂均能显著抑制HepG2细胞的生长,且均呈剂量性依赖;二者联合用药能够显著增加HepG2细胞的生长抑制率;流式细胞术结果显示,单宁酸与顺铂联合用药能够显著抑制HepG2细胞的增殖,并诱导细胞凋亡的发生;q-RT-PCR及Western blot结果显示,单宁酸与顺铂联合用药能显著上调细胞IRE1α和XBP-1的表达水平。结果表明单宁酸能够联合顺铂增强肝癌HepG2细胞内质网应激IRE1-XBP1通路的激活水平,提示IRE1-XBP1通路可能是单宁酸和顺铂协同抗肝癌HepG2细胞的分子机制之一。

IRE1通路与肿瘤

内质网应激是细胞内广泛存在的一种应激反应。研究表明,内质网应激与肿瘤的发生发展密切相关。针对内质网应激及其相应信号通路进行肿瘤的预防或治疗受到了广泛关注。IRE1(inositol-requiring enzyme 1)通路是内质网应激诱发的最保守的信号通路。研究证实,IRE1及其主要的下游效应分子剪切型X-盒结合蛋白1与肿瘤进展密切相关。本文对IRE1通路与肿瘤发生发展、血管新生、肿瘤转移、肿瘤耐药性和恶性程度的相关性进行了阐述,同时分析了IRE1在不同肿瘤样本中的突变率、突变类型与病人存活状态的关系。作为肿瘤治疗的有效靶点,针对IRE1通路的调控能够有效延缓肿瘤的发生发展。

不同时程吗啡依赖对雄性大鼠睾丸GRP94和XBP-1表达的影响

目的观察内质网应激标志性分子GRP94和XBP-1在不同时程吗啡依赖大鼠睾丸组织中的动态表达,以探究吗啡依赖对生殖系统的影响。方法建立吗啡戒断、消退及点燃大鼠模型后,利用定量PCR(RTPCR)技术和蛋白免疫印迹(Western blot)技术分别检测睾丸组织中GRP94和XBP-1 mRNA或蛋白的表达水平。结果 RT-PCR和Western blot结果显示,与NS对照组比较,吗啡依赖大鼠戒断48 h后,其睾丸组织GRP94和XBP-1表达水平均显著升高(P<0.01);经17 d的戒断,大鼠对吗啡依赖消退后,GRP94和XBP-1表达水平均有所升高(P>0.05);大鼠对吗啡依赖消退后,于31 d给予吗啡进行复燃,GRP94和XBP-1表达水平均显著升高(P<0.01或P<0.05)。吗啡依赖大鼠睾丸组织GRP94和XBP-1表达水平在戒断48 h后最高,消退时有所降低(P<0.01),而点燃后水平又有所上调(P<0.05)。结论吗啡依赖与睾丸内质网应激标志性分子GRP94及其XBP-1通路的激活密切相关,为吗啡依赖患者生殖系统损伤的修复提供更多的理论依据。

萝卜硫素对心肌缺血再灌注损伤大鼠IRE-1/XBP-1通路及心肌凋亡的影响

目的探究萝卜硫素(SFN)对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌凋亡及肌醇需求酶1(IRE-1)/X-盒结合蛋白-1(XBP-1)通路的影响。方法实验分为假手术组、模型组、SFN组、STF-083010组、SFN+STF-083010组五组,每组10只。冠状动脉左室支结扎前2 h,SFN组尾静脉注射5 mg/kg SFN,STF-083010组腹腔注射30 mg/kg STF-083010,SFN+STF-083010组在SFN组基础上腹腔注射30 mg/kg STF-083010,假手术组、模型组尾静脉和腹腔注射等体积生理盐水。除假手术组外,其余各组冠状动脉左室支结扎大鼠,假手术组仅打开胸腔暴露出心脏穿丝线而不结扎。TTC染色检测心肌梗死情况;苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠心肌组织形态学情况;TUNEL染色观察心肌组织细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测心肌组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase3)、B淋巴细胞瘤-2基因(BCL2)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)mRNA表达;免疫印迹法检测心肌组织中IRE-1、p-IRE-1、XBP-1蛋白表达。结果模型组心肌细胞排列紊乱,细胞膜破坏严重,细胞核部分散落在外;SFN组心肌细胞排列紊乱部分缓解,见少量细胞核散落;STF-083010组心肌细胞排列紊乱,细胞核散落严重;SFN+STF-083010组细胞排列恢复正常,排列整齐。与假手术组比较,模型组心肌梗死体积百分比、心肌组织细胞凋亡率,caspase3、BAX mRNA水平,p-IRE-1/IRE-1、XBP-1蛋白水平升高(P<0.05),BCL2 mRNA水平降低(P<0.05);与模型组比较,SFN组、STF-083010组、SFN+STF-083010组心肌梗死体积百分比、心肌组织细胞凋亡率,caspase3、BAX mRNA水平,p-IRE-1/IRE-1、XBP-1蛋白水平降低(P<0.05),BCL2 mRNA水平升高(P<0.05);分别与SFN组、STF-083010组比较,SFN+STF-083010组心肌梗死体积百分比、心肌组织细胞凋亡率,BAX mRNA水平,p-IRE-1/IRE-1、XBP-1蛋白水平降低(P<0.05);与STF-083010组比较,SFN+STF-083010组caspase3 mRNA水平降低(P<0.05),BCL2 mRNA水平升高(P<0.05)。结论SFN通过抑制IRE-1/XBP-1通路缓解MIRI大鼠的心肌凋亡,从而实现对MIRI的保护。

内质网应激对溃疡性结肠炎患者炎性因子表达的影响

目的:通过对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者外周血单个核细胞进行内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)刺激,比较X-盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)剪切形式(XBP1 splicing,XBP1s)及炎性细胞因子表达水平变化,探讨UC患者对ERS反应的变化.方法:通过实时聚合酶链反应(real timepolymerase chain reaction,RT-RCR)检测XBP1s,实时定量聚合酶链反应(quantitative-polymerase chain reaction,Q-PCR)检测白介素-2(interleukin-2,IL-2)、γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、IL-17α表达变化.比较UC之间差异并进行相关分析.结果:(1)用植物凝集素(phytohemagglutinin,PHA)及毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)单独及联合刺激正常人及UC患者外周血单个核细胞后XBP1均发生剪切,联合刺激时剪切形势较明显;(2)分别PHA与TG、联合刺激正常人及UC患者外周血单个核细胞,发现联合刺激组IL-2、IFN-γ、IL-17α表达水平增高.结论:在ERS状态下,正常人群及UC患者的T淋巴细胞均可通过XBP1s所介导的信号通路对ERS发生响应,激活炎性细胞因子表达,加重炎性发生,与正常人相比,UC患者外周血单个核细胞对ERS作用更为敏感.