乳酸杆菌组成型启动子探测载体pgateway-612的构建

为筛选适宜乳酸菌(LAB)宿主表达载体的启动子,本研究以大肠杆菌-LAB穿梭载体pPG612为基本骨架,利用GatewayTM克隆技术操作构建了LAB组成型启动子探测载体,并利用该载体筛选了短乳杆菌的S层启动子。我们利用底物X-gluC与报告基因gusA编码的蛋白酶之间的特异性显色反应筛选阳性菌落,超声破碎后的菌体蛋白经SDS-PAGE和western blot分析表明该启动子在宿主菌中具有组成型启动子活性。本研究为进一步利用表达载体及筛选其他LAB启动子奠定基础。

六倍体大小麦tritordeum花药组织特异性启动子的鉴定与分离

启动子是基因表达调控的重要顺式元件,也是基因工程表达载体的一个重要元件。一个无启动子的带有UidA基因的质粒pPLGUS通过基因枪转化进tritordeum材料中,对转基因材料的多种不同组织进行了X-gluc显色来检测不同组织中的GUS活性,有一个株系的花药组织特异性启动子已被证明成功捕获,并通过PCR方法将其分离。提取叶片的总DNA作模板,上游使用水稻花药启动子分离的引物P1,以UidA基因的部分序列为下游引物P2,PCR扩增UidA基因的上游旁侧序列。已经获得一条长667 bp的目的片断,含有部分UidA基因的序列和一段UidA基因的上游旁侧序列,该序列中具有植物启动子的一些必备元件,初步断定它是一段花药组织特异性启动子序列。

香蕉CMV—BH外壳蛋白基因转化香蕉的研究初报

将香蕉ＣＭＶ（黄瓜花叶病毒）—ＢＨ外壳蛋白基因克隆到能在植物里表达的Ｐ（０２２４）载体上，然后再将此基因连同３５Ｓ启动子和ＮＯＳ终止子克隆到另一植物表达载体ｐ（Ｂ１２１）的ＨｉｎｄⅢ位点，构成一个既有选择标记的ＮＰⅡ基因，又有报告基因ＧＵＳ的嵌合基因表达载体，且每个基因都有各自的启动子和终止子。利用基因枪将带有ＮＰＴⅡ－ＣＭＶ－ＢＨ－Ｃｐ－ＧＵＳ基因的质粒载体导人香蕉试管苗的幼芽中，培养２ｄ后检测ＧＵＳ基因的表达，观察到不同细胞层次都有ｘ－Ｇｌｕｃ反应。

基因直接转化植物小孢子方法的探讨

将带有ｇｕｓ报告基因的质粒ＤＮＡ用电激法转入小白菜的小孢子中，培养两天后，检测ｇｕｓ基因的表达，观察到Ｘ—Ｇｌｕｅ反应。