稳定过表达XAF1基因对A2780卵巢癌细胞生物学功能的影响

目的构建稳定过表达XAF1基因A2780卵巢癌细胞株,并观察XAF1基因对卵巢癌细胞增殖、凋亡、细胞周期及对紫杉醇敏感性的影响。方法分别将质粒pcDNA3.1(+)和pcDNA3.1(+)-XAF1转染至卵巢癌细胞A2780,通过质粒抗性标记(遗传霉素G418)筛选得到阴性对照细胞株(A2780/Negative control,A2780/NC)和稳定表达XAF1的细胞株(A2780/XAF1);通过行细胞克隆形成实验和CCK8实验检测细胞增殖及对紫杉醇的敏感性,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡。结果成功构建了稳定表达XAF1的卵巢癌细胞A2780/XAF1,细胞形态无明显变化;与A2780/NC相比,A2780/XAF1克隆形成能力能力更低(P=0.0016),细胞贴壁后第1天和第3天增殖活性更低(P=0.009,0.0035),两组细胞的细胞周期分布差异存在统计学意义(P<0.0001),两两比较结果显示A2780/XAF1组G2-M期细胞百分比显著增加(P<0.001)。在无凋亡刺激、无血清培养及紫杉醇诱导下,A2780/XAF1的凋亡率均比A2780/NC更高(P<0.001);在不同紫杉醇浓度作用下,A2780/XAF1的增殖活性均显著低于A2780/NC(P<0.001),且A2780/XAF1的紫杉醇半数抑制浓度显著低于A2780/NC。结论成功构建稳定表达XAF1的卵巢癌细胞A2780/XAF1;XAF1调控卵巢癌细胞A2780的增殖、凋亡及细胞周期,并增加了卵巢癌对紫杉醇的敏感性。

XAF1基因对肺腺癌细胞A549的作用及机制

背景与目的 XAF1是重要的肿瘤细胞生长抑制因子,其低表达与多种肿瘤细胞有关。研究肿瘤抑制基因XAF1对人肺腺癌细胞株A549的作用及机制。方法利用重组腺病毒Ad5/F35-XAF1和对照腺病毒Ad5/F35-NULL瞬时转染A549细胞,用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blot方法检测A549细胞株中XAF1 m RNA和蛋白质的表达;MTT检测细胞增殖率、流式细胞仪检测细胞凋亡率,并用Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达。结果腺病毒介导的XAF1瞬时转染肺腺癌A549细胞后,XAF1 m RNA及蛋白表达水平明显提高,并能明显抑制该细胞增殖和促进细胞凋亡,蛋白质印记法显示凋亡相关蛋白PARP、Caspase-3、Caspase-8的裂解条带。结论恢复XAF1基因在人肺腺癌A549细胞中表达后,能明显抑制该肿瘤细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与XAF1激活肺癌细胞相关凋亡途径有关。

HSF1与XAF1基因在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨热休克转录因子1(HSF1)与X染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(XAF1)基因在子宫内膜组织中的表达及临床意义。方法:选取2018年6月至2019年6月行手术治疗的38例子宫内膜癌患者,收集其新鲜组织标本,作为研究组。选取同期38例子宫内膜良性病变患者,行刮诊治疗,收集子宫内膜组织,作为对照组。免疫组织化学-链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结染色法(SP法)检测子宫内膜癌组织、正常子宫内膜组织中HSF1与XAF1基因表达,分析临床意义。结果:研究组HSF1阳性表达率为73.68%,高于对照组的36.84%,差异有统计学意义(P<0.05);研究组HSF1表达阳性者组织学分级、淋巴结转移与表达阴性者比较,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组XAF1阳性表达率为28.95%,低于对照组的73.68%,差异有统计学意义(P<0.05);研究组XAF1表达阳性者手术病理分期、组织学分级、淋巴结转移与表达阴性者比较,差异有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜癌组织中HSF1与XAF1表达呈负相关(P<0.05)。结论:HSF1与XAF1在子宫内膜癌患者中异常表达,且两者呈负相关,可能在子宫内膜癌发生、发展中发挥重要作用。

XAF1基因及蛋白在局灶性小肠胃肠道间质瘤组织中表达的研究

目的:探讨XAF1基因及蛋白在小肠胃肠道间质瘤(GISTs)组织中的表达及其与肿瘤危险度分级的关系。方法:分别采用实时定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白印迹法检测XAF1在10例原发性局灶性小肠GISTs的肿瘤及瘤旁新鲜组织标本中的表达。结果:XAF1mRNA及其蛋白在小肠GISTs组织中的表达量显著低于瘤旁组织(P均<0.01)。中、高危小肠GISTs肿瘤组织中XAF1mRNA的表达均显著低于相应的瘤旁组织(P<0.05),而低危小肠GISTs与其瘤旁组织间XAF1mRNA的表达差异无统计学意义。结论:与瘤旁组织相比,XAF1基因的表达减少可能与小肠GISTs的发生有关。

抑癌基因XAF1和BNIP3表达及其异常甲基化与宫颈病变相关性研究

目的探讨抑癌基因XAF1和BNIP3表达及其异常甲基化与宫颈病变的关系。方法选择140例手术切除并经病理证实的标本,其中宫颈癌组48例,宫颈上皮内瘤样病变2~3级组织(CIN2-3组)32例,宫颈皮内瘤样病变1级组织(CIN1组)30例,正常宫颈组织(对照组)30例,采用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)法及免疫组化(SP)法,检测上述各组中XAF1和BNIP3启动子区甲基化状态及蛋白表达水平。结果正常宫颈组、CIN1组、CIN2-3组、宫颈癌组XAF1基因启动子甲基化阳性率分别为3.3%、6.6%、37.5%、60.4%,正常宫颈组与CIN1组甲基化阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);CIN1组与CIN2-3及宫颈癌组甲基化阳性率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);正常宫颈组、CIN1组、CIN2-3组、宫颈癌组BNIP3基因甲基化阳性率分别为16.7%、20.0%、43.8%、68.8%,正常宫颈组与CIN1组甲基化阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);CIN1组与CIN2-3及宫颈癌组甲基化阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05);正常宫颈组、CIN1组、CIN2-3组、宫颈癌组XAF1蛋白的阳性表达率分别为73.3%、76.7%、40.6%、10.4%,宫颈组与CIN1组XAF1蛋白表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05);CIN2-3组及宫颈癌组XAF1蛋白表达率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);正常宫颈组、CIN1组、CIN2-3组、宫颈癌组的BNIP3蛋白表达率分别为63.3%、70.0%、43.8%、14.6%,正常宫颈组与CIN1组BNIP3蛋白表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05);CIN1组与CIN2-3组、宫颈癌组比较,BNIP3蛋白表达率逐渐下降,差异均有统计学意义(P<0.05);宫颈癌组织中XAF1蛋白与BNIP3蛋白表达呈正相关(P<0.05)。结论XAF1及BNIP3基因启动子甲基化所致的XAF1及BNIP3表达失活,可能在宫颈病变的发生及发展过程中起着重要作用。

XAF1基因与p53基因在结直肠肿瘤中的表达研究

目的观察两个相邻位置的抑癌基因XIAP相关因子1(XAF1)与p53基因在结直肠肿瘤中的表达。方法选取结肠癌细胞株Colo205、Colo320、LoVo、SW1116为体外研究对象,另取41例结直肠癌、28例结直肠腺瘤/息肉以及31例正常人结肠黏膜为体内研究对象。应用逆转录聚合酶链反应检测XAF1mRNA与p53mRNA在体内外的表达,应用免疫组化法检测P53蛋白在结直肠组织中的表达。结果4种细胞株中XAF1表达均较为低下,p53mRNA表达均较高。结直肠肿瘤组织中的XAF1mRNA表达显著低于正常组织(P<0.01),结直肠癌中的表达又显著低于良性肿瘤(P<0.05)。结直肠肿瘤组织中的p53mRNA表达显著高于正常组织(P<0.01),但在良、恶性肿瘤中的表达差异无统计学意义(P<0.05)。P53蛋白在正常组织中未见表达,良、恶性肿瘤组的组织P53蛋白表达之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论XAF1基因在结直肠肿瘤中表达降低,且结直肠癌XAF1mRNA表达显著低于良性肿瘤,可作为判断良、恶性肿瘤的鉴别指标。

XAF1基因诱导胰腺癌细胞株BxPC3凋亡的实验研究

目的探讨Ad5／F35腺病毒介导的XAF1基因诱导胰腺癌细胞BxPC3凋亡及其可能的作用机制。方法将前期构建的重组腺病毒Ad5／F35-XAF1感染胰腺癌细胞BxPC3。采用半定量RT-PCR、蛋白质印迹检测法检测感染前后BxPC3细胞XAFlmRNA和蛋白表达的变化；运用Annexin—V／PI和TUNEL法检测细胞的凋亡率；免疫蛋白印迹法检测细胞Caspase-3、PARP、Caspase-8和Bcl-2蛋白的表达。结果Ad5／F35-XAF1感染后，BxPC3细胞的XAFlmRNA和蛋白表达明显增高，与空白组和Ad5／F35-Null对照组比较，差异显著（P〈0．05）；两种方法检测的细胞凋亡率分别为（19．90±3．09）％、（9．29±2．13）％，较A（15／F35-Null组的（6，72±0．76）％、（2．73±0．51）％和空白组的（7．22±1．53）％、（1．56±0．47）％均有显著差异（P〈0．01）；Caspase-3、PARP、Caspase-8蛋白表达显著增强，Bcl-2表达降低。结论Ad5F35-XAF1重组腺病毒感染胰腺癌细胞BxPC-3能明显诱导细胞的凋亡，其机制可能是激活死亡受体途径和线粒体途径。

5-氮杂胞苷对骨髓瘤细胞增殖抑制作用及对XAF1基因表达的影响

目的探讨5-氮杂胞苷处理对骨髓瘤细胞系RPMI 8226和XG-7细胞中XAF1基因表达的影响及体外抗骨髓瘤作用的机制。方法采用逆转录PCR和Western blot方法检测骨髓瘤细胞系RPMI 8226和XG-7细胞中XAF1基因和蛋白的表达。采用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测XAF1基因启动子CpG岛甲基化状态。采用0～5μmol／L 5-氮杂胞苷处理骨髓瘤细胞株。采用CCK-8比色法检测5-氮杂胞苷处理对骨髓瘤细胞增殖抑制作用。采用Annexin V／7-AAD染色流式细胞术检测细胞凋亡。结果XG-7细胞不表达XAF1 mRNA及蛋白，RPMI 8226细胞表达XAF1 mRNA转录本1和2。XG-7和RPMI 8226细胞XAF1基因启动子CpG岛均存在过甲基化。XG-7和RPMI 8226细胞经2．5μmol／L 5-氮杂胞苷处理72h后仅表达XAF1 mRNA转录本1并表达XAF1蛋白，并且XAF1基因启动子CpG岛甲基化程度降低。5-氮杂胞苷抗骨髓瘤作用呈时间和浓度依赖性。5-氮杂胞苷处理RPMI 8226和XG-7细胞48h的，氏值分别为2．4μmol／L和2．6μmol／L。结论骨髓瘤细胞中抑癌基因XAF1表达缺失或表达异常与XAF1基因启动子CpG岛过甲基化有关。5-氮杂胞苷处理可以诱导XAF1 mRNA及蛋白表达。5-氮杂胞苷在临床上能达到的药物浓度下具有抗骨髓瘤作用，其作用机制是诱导骨髓瘤细胞凋亡。

非小细胞肺癌患者中XAF1的表达及其临床意义

目的研究非小细胞肺癌(non-small celllung cancer,NSCLC)患者中XAF1基因的mRNA水平,并分析与NSCLC临床病理特征的关系。方法采用Real-PCR检测60例NSCLC患者癌组织标本和配对正常癌旁组织的XAF1基因mRNA表达水平,比较癌组织和癌旁组织XAF1基因的表达差异;采用单因素方差分析不同临床病理特征间XAF1基因的表达差异。结果 NSCLC患者癌组织XAF1基因的mRNA水平明显低于正常癌旁组织XAF1基因的表达量,且XAF1基因的mRNA水平随着分化程度降低、TNM分期增加及淋巴结转移而降低;差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 XAF1基因在NSCLC患者中呈低水平表达,其表达水平的降低可能与促进NSCLC的发生、发展有关。

XAF1和XIAP在肺鳞癌中的表达及临床意义

目的探讨X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)相关因子1(XAF1)在肺鳞癌发生、发展中的作用。方法 51例肺鳞癌患者术后切除的肺组织标本分为三组:A组为肺癌组织,B组为肺癌旁2cm组织,C组为肺癌旁5cm组织。应用免疫组化检测三组XAF1蛋白表达;半定量逆转录-PCR检测51例肺癌组织中XAF1和XIAP mRNA表达,分析其表达与临床病理特征的相关性。结果 A组XAF1的表达强度显著低于B、C组(54.9%vs.78.4%、86.7%)(P<0.05);低分化和高TNM分期的XAF1表达低于高分化和低TNM分期(P<0.05)。A组中XAF1mRNA的表达水平低于C组(P<0.05)。结论 XAF1在肺癌发生、发展中具有促凋亡作用。

粪便DNA中X染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1基因启动子甲基化状态在结直肠癌筛查中的应用研究

目的以粪便DNA中x染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子（XAF）1基因启动子区域的甲基化状态为靶目标，建立新的有效的筛查结直肠癌的方法。方法收集需做肠镜检查患者自然排泄粪便，经肠镜或病理学检查确诊后，分为3组，结直肠正常组45例，结直肠腺瘤组30例，结直肠腺癌组24例。使用QIAampDNAStoolMiniKit自粪便抽提人DNA。应用甲基化特异性的PCR（MSP）检测粪便DNA中XAFl基因启动子区域甲基化状态。结果经genomic—DNAPCR，证实所提取DNA均含有人基因组DNA。经MSP检测，正常组存在高甲基化15例，阳性率33．33％；腺瘤组18例，阳性率60．00％；腺癌组15例，阳性率62．50％，腺瘤组、腺癌组与正常组比较差异有统计学意义（P〈0．05），但腺瘤组与腺癌组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论使用Qiagen试剂盒抽提粪便中人DNA的方法比较稳定。以粪便DNA中XAFl基因启动子区域甲基化状态为靶目标进行结直肠肿瘤的早期诊断，敏感度、特异度较高，但尚需要大样本研究进一步验证。