基于网络药理学探讨消瘿散结方治疗甲状腺结节的作用机制

目的通过现代网络药理学方法探析消瘿散结方治疗甲状腺结节的作用机制。方法通过TCMSP、TCMID、TCM Database@Taiwan及symMap数据库检索消瘿散结方的主要有效成分,利用pubchem数据库查找其化合物与分子结构,在Swiss Target Prediction数据库检索其作用靶点,通过GeneCards和DisGeNet数据库检索甲状腺结节疾病相关基因,直接对药物靶位基因和相关疾病基因序列进行韦恩分析,利用Cytoscape软件实现可视化并分析筛选出核心基因组,最后在DAVID数据库中进行富集分析,对复方药物潜在的治疗作用靶点可进行GO功能分析和KEGG通路分析。结果检索到复方药物组合的主要有效化合物199个、作用靶点342个;符合条件的甲状腺结节疾病基因1218个,其中108个是消瘿散结方治疗甲状腺结节的潜在作用靶点。通过GO功能和KEGG通路分析发现消瘿散结方治疗甲状腺结节是通过PI3K-Akt、Rap1、EGFR、MAPK及HIF-1等信号通路发挥作用。消瘿散结方治疗甲状腺结节的重要基因为AKT1、VEGFA、TNF、SRC及EGFR等。结论通过现代网络药理学方法发现消瘿散结方药对组合治疗甲状腺结节的药物作用机制涉及多靶点与通路,可能与细胞增殖、凋亡与黏附、血管生长因子、炎性因子及糖代谢与癌症因子等相关。

消痰散结方对裸鼠MKN-45胃腺癌组织中PCNA表达的影响

目的 :立足于痰浊凝结为癌瘤形成与转移的重要病理因素之一 ,设计观察了消痰散结方 (半夏、胆南星、茯苓、枳实、陈皮、炙甘草等组成 )对裸鼠胃腺癌体内生长的抑制作用及其对胃癌组织中增殖细胞核抗原 (PCNA)表达的影响。方法 :建立裸鼠MKN - 4 5胃腺癌模型 ,采用免疫组化ABC法检测胃癌组织中PCNA的阳性表达率 ,同时观察了不同用药组瘤组织重量和病理学变化。结果 :在裸鼠体内实验观察中 ,消痰散结方组抑瘤率大于 30 % ,其瘤重明显低于空白对照组 (P <0 .0 5) ;与化疗组比较 ,无统计学差异(P >0 .0 5)。中药组裸鼠胃癌组织PCNA表达水平明显低于空白对照组 (P <0 .0 5) ,表明细胞增殖活性降低。结论 :消痰散结方可抑制裸鼠胃癌的生长 。

消痰散结方对人胃癌细胞周期及CDK4表达影响的实验研究

[目的]观察消痰散结方(主要由半夏、胆南星、鸡内金、全蝎等组成)对胃癌细胞周期及CDK4表达的影响,以探讨其抑制胃癌增殖的机理。[方法]将人胃癌MKN-45接种于裸鼠腋部皮下,分别给予小鼠消痰散结方、环磷酰胺或生理盐水21 d后处死小鼠,取出瘤组织,用流式细胞仪检测各组胃癌组织中处于G1、S期的细胞数,用免疫组化SABC法检测胃癌组织中CDK4的表达。[结果]中药组G1期细胞数为(66.84±1.14)％,空白组为(54.66±8.72)％,二者比较有显著性差异(P<0.01),中药组、化疗组S期细胞比例均明显低于空白组(P<0.01),中药组S期细胞数也明显低于化疗组(P<0.01)。中药组胃癌组织中CDK4表达总阳性率、中度及以上阳性率均明显低于空白组和化疗组(均P<0.05)。[结论]消痰散结方可明显抑制胃癌细胞的增殖;其机理可能是通过抑制CDK4的表达来影响细胞周期的完成。

消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白及mRNA表达的影响

目的:通过观察消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45原位移植模型端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白及mRNA表达的影响,探讨其抑制胃癌细胞增殖的作用机制。方法:采用OB胶粘贴法建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤模型,随机分成模型组、消痰散结方低剂量组、消痰散结方中剂量组、消痰散结方高剂量组、5-Fu组,每组8只,运用免疫组化、实时荧光定量RT-PCR方法检测hTERT蛋白及mRNA的表达。结果:①消痰散结方低、中、高剂量组的平均瘤重与模型组相比,有显著差异(P<0.01);②消痰散结方中、高剂量组hTERT蛋白的阳性表达率与模型组相比有统计学意义(P<0.05或P<0.01);③消痰散结方中、高剂量组hTERTmRNA含量与模型组相比有统计学意义(P<0.05)。结论:①消痰散结方有明显的抑制胃癌细胞生长的作用;②消痰散结方通过下调hTERT蛋白及mRNA的表达而抑制端粒酶的活性,使癌细胞端粒长度逐渐缩短,丧失无限增殖能力,起到抑制肿瘤细胞生长、增殖的作用。

裸鼠人胃癌细胞核转录因子NF-κBP^(65)蛋白与端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白的表达及关系

目的:通过观察胃癌细胞核转录因子NF-κBP65蛋白与端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白的表达及关系,探讨消痰散结方抑制胃癌细胞增殖的作用机制。方法:采用OB胶粘贴法建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤模型,随机数字表法分成模型组,消痰散结低、中、高剂量组,5-Fu组,每组8只,观察消痰散结方干预对胃癌组织NF-κBP65蛋白、hTERT蛋白表达的影响及相关性。结果:①消痰散结方中、高剂量组、5-Fu组NF-κBP65蛋白的阳性表达与模型组相比,P<0.05,有统计学意义;②消痰散结方中剂量组、5-Fu组hTERT蛋白的阳性表达率与模型组比较明显降低,P<0.05,有统计学意义;消痰散结方高剂量组hTERT蛋白的阳性表达率与模型组有显著差异,P<0.01;③胃癌细胞NF-κBP65蛋白与hTERT蛋白表达呈显著正相关(r=0.929,P<0.01)。结论:胃癌MKN-45细胞中存在着活化的NF-κB及高表达的hTERT蛋白,并且存在线性相关,消痰散结方可能通过其抑制NF-κB活性,阻断了NF-κB对hTERT的活性调控,使胃癌细胞增殖受到抑制,从而阻断胃癌发展,控制胃癌复发与转移。

裸鼠人胃癌MKN-45细胞核转录因子NF-κBP^(65)蛋白与增殖细胞核抗原表达的相关性

目的:通过观察胃癌细胞核转录因子NF-κBP65蛋白与增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达及关系,探讨消痰散结方抑制胃癌细胞增殖的作用机制。方法:采用OB胶粘贴法建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤模型,随机数字表法分成模型组,消痰散结低、中、高剂量组,5-Fu组,每组8只,观察消痰散结方干预对胃癌组织核转录因子NF-κBP65蛋白、增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响及相关性。结果:①消痰散结方中、高剂量组、5-Fu组NF-κB的P65蛋白的阳性表达与模型组相比P<0.05,有统计学意义;②消痰散结方低、中、高剂量组、5-Fu组的PCNA阳性表达率与模型组相比有统计学意义,P<0.05;③胃癌细胞NF-κBP65蛋白与PCNA表达存在正相关(r=0.857,P<0.01)。结论:胃癌MKN-45细胞中存在着活化的NF-κB及高表达的PCNA,并且存在线性相关,消痰散结方可能通过其抑制NF-κB活性,阻断了NF-κB对PCNA的活性调控,使胃癌细胞增殖受到抑制,控制胃癌复发与转移。

消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤组织形态学的影响

目的通过建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤模型,从组织形态学变化,探讨消痰散结方抑制胃癌细胞增殖的作用机制。方法采用OB胶粘贴法建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植模型,随机分为模型组,消痰散结低、中、高剂量组,5-氟脲嘧啶(5-Fu)组,每组8只,观察各组荷瘤鼠肿瘤生长情况、抑瘤率、大体及超微结构变化。结果(1)模型组、消痰散结方低、中、高剂量组动物实验前后体重变化与5-Fu组相比差异有显著统计学意义(P<0.01)。(2)消痰散结方低、中、高剂量组抑瘤率分别为36.62%、44.82%、58.11%,呈现出剂量依赖效应,且消痰散结方高剂量组抑瘤率高于5-Fu组(51.82%),但差异无统计学意义。(3)光镜下模型组可见肿瘤细胞增生明显,核大畸形,核仁深染,核质比大,核分裂相多见;消痰散结方组肿瘤细胞数目减少,核质比小,瘤组织可见片状坏死;5-Fu组可见大片状坏死。(4)电镜下模型组细胞增殖、分裂多见;消痰散结方各剂量组凋亡细胞居多,可见细胞核固缩等典型的凋亡形态学变化;5-Fu组可见异染色质边集,并可见细胞坏死。结论消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤有较好的抑制肿瘤生长作用,可明显地促进胃癌细胞凋亡、抑制胃癌细胞增殖,有效抑制胃癌发展。