凋亡抑制蛋白XIAP研究进展

X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)是哺乳动物中具有抑制细胞凋亡作用的蛋白,是IAPs家族的一员。XIAP通过杆状病毒IAP重复序列(BIR)直接与起始以及效应caspases结合,抑制了细胞凋亡的线粒体途径,也可以通过NF-kB途径抑制细胞表面受体介导的凋亡。XIAP具有不同于Bcl-2的作用机制,是IAPs家族中最具有抑制活性的一个。XIAP的作用受到线粒体释放的蛋白Smac的拮抗,以及受到自身具有泛素连接酶E3活性的RING指结构域的调节。阐述XIAP抑制caspase以及Smac等拮抗XIAP的机理对于治疗肿瘤以及过度凋亡疾病具有重要的意义。

凋亡抑制蛋白XIAP在肝细胞癌中的表达及其对肝细胞癌肝移植患者预后的影响

目的:研究凋亡抑制蛋白XIAP在肝细胞癌中的表达并探讨其对肝细胞癌肝移植患者预后的影响。方法:用免疫组化方法检测组织芯片中192例肝细胞癌及癌旁组织中XIAP的表达,分析其与其他临床病理因素的相关性及对肝细胞癌肝移植患者预后的影响。结果:XIAP在肝细胞癌组织中的阳性表达率高达89.6%,显著高于癌旁组织(45.8%,P=0.000)。以XI-AP表达对肝细胞癌患者肝移植术后生存情况进行分层分析显示,XIAP阳性组3年总体生存率明显低于阴性组(P=0.021),复发率显著高于阴性组(P=0.001)。Cox多因素分析提示XIAP是影响肝细胞癌肝移植术后患者总体生存率的独立预后因素。结论:XIAP在肝细胞癌中阳性表达率较高,XIAP的表达水平是肝细胞癌肝移植患者预后的独立相关因素。

安多霖对高功率微波辐照大鼠睾丸生精细胞Caspase-9和XIAP的影响

为探讨安多霖对微波辐射损伤的的防治机制,将SD雄性大鼠按质量随机分为正常对照组、辐照组和预防组(给药量分别为3、6、9 mg/kg)。预防组大鼠连续灌胃给药,对照组和辐照组给予双蒸水,20 d后辐照组和预防组大鼠行100 m W/cm^2的高功率微波(High power-microwave,HPM)全身辐照10 min。于辐照后第1、2、5天取睾丸组织制备病理标本,采用SP免疫组化检测试剂盒标定目的蛋白,Image-pro plus图像分析软件对特定染色区域进行灰度分析和测定。结果显示,辐照组大鼠睾丸细胞Caspase-9水平较对照组呈"高-低-高"的"倒抛物线"形(p<0.05),给药组则随着时间呈现"先低后高"的趋势(p<0.05);对于X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)而言,辐照组与对照组之间的差异不显著,而6、9 mg/kg组在辐照后第5天较辐照组显著升高(p<0.05)。结果提示,Caspase-9参与了HPM致大鼠睾丸细胞凋亡的过程,安多霖对大鼠睾丸细胞的保护作用需要Caspase-9和XIAP的共同参与。

XIAP反义寡核苷酸对喉癌Hep-2细胞化疗增敏作用的研究

目的通过X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)反义寡核苷酸(antisense oligonu-cleotides,ASODN)转染喉癌Hep-2细胞,探讨其对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响。方法体外培养人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞,应用脂质体法进行XIAP ASODN基因转染,荧光显微镜下观察计算转染率,MTT法检测基因转染前后联合顺铂作用对Hep-2细胞增殖的抑制情况,RT-PCR法检测XIAP mRNA水平,流式细胞仪检测细胞凋亡率及XIAP蛋白表达。结果不同浓度XIAP ASODN转染喉癌Hep-2细胞转染率均在9 0%以上,无明显差异。不同浓度的顺铂作用2 4 h后对细胞增殖有抑制作用,并随剂量的增加抑制率逐渐增大(P<0.05),细胞凋亡率随顺铂(DDP)剂量的增加而逐渐增大(P<0.05);MTT法检测发现不同浓度及不同作用时间的XIAP ASODN与3μg/ml DDP联合作用对细胞的生长抑制率显著高于单用XIAP ASODN组和单用DDP组,差异均有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示ASODN+DDP组细胞凋亡率与单纯DDP组相比显著升高(P<0.01);RT-PCR法显示ASODN+DDP组XIAP mRNA的表达明显下调,而对照组和错义寡核苷酸(scrabble oligonucleotides,SCODN)组XIAP mRNA水平无明显变化;流式细胞仪结果显示ASODN治疗组的XIAP蛋白荧光指数明显低于空白对照组、脂质体转染组以及SCODN转染组(P<0.05),Pearson相关分析显示,在不同处理组与对照组中细胞凋亡率的变化与XIAP蛋白荧光指数的变化呈负相关(r=-0.976,P<0.01)。结论 XIAPASODN喉癌转染Hep-2细胞能够抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,并能提高其对化疗的敏感性。

结直肠癌组织中XIAP的表达及其意义

目的探讨结直肠癌组织中凋亡抑制蛋白XIAP的表达及其与各临床病理因素的关系。方法应用免疫组织化学染色法以及RT-PCR检测87例结直肠癌组织中XIAP的表达情况。结果结直肠癌、癌旁组织、正常组织中XIAPmRNA表达阳性率分别为64.4%(56/87)、49.4%(43/87)和11.4%(10/87),结直肠癌组织中XIAPmRNA表达阳性率与癌旁组织和正常组织比较均有显著性差异。免疫组化染色显示,87例结直肠癌组织有61例(70.1%)XIAP呈阳性,XIAP表达在不同病理分级之间差异有显著性(P=0.014),在不同的临床分期、肿瘤部位、淋巴结转移之间的差异无显著性。结论XIAP在结直肠癌中的高表达与结直肠癌的发生可能有关,其是一种具有潜在价值的结直肠癌肿瘤标志物。

XIAP抑制剂的研究进展

凋亡抑制蛋白(XIAP)被认为是凋亡抑制蛋白家族中对细胞凋亡抑制作用最强的蛋白,研究发现,它在许多肿瘤细胞中有过量表达,其作用机制是XIAP对执行凋亡的caspase家族蛋白产生抑制作用。近年来,XIAP小分子抑制剂研究越来越受到人们的重视。该文对XIAP抑制剂的研究进行综述。

U0126对MCF-7细胞株化疗敏感性及XIAP蛋白表达的影响

目的:探讨MEK抑制剂U0126对乳腺癌细胞株MCF-7的凋亡诱导和化疗增敏作用及其与X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的相关性。方法:利用体外培养乳腺癌细胞株MCF-7,采用MTT比色法观察U0126、紫杉醇(PTX)、阿霉素(ADM)对MCF-7生长的影响;应用流式细胞术观察用药前后细胞周期变化和凋亡率;以Western blot法检测用药前后XIAP蛋白表达变化。结果:与单药相比,U0126与PTX、ADM联合可显著抑制MCF-7的增殖,增加细胞的凋亡率;联合用药组XIAP蛋白的表达比单药组明显降低。结论:MEK抑制剂U0126与PTX、ADM序贯性联合应用可以协同性增加对MCF-7化疗的敏感性,其机制可能与下调XIAP的表达有关。

XIAP在鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2和5-8F中的表达与研究

目的比较CNE1、CNE2及5-8F鼻咽癌细胞株中X链锁调亡抑制蛋白(XIAP)的表达差异。方法体外培养鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2及5-8F,采用RT-PCR法检测CNE1、CNE2及5-8F细胞株中XIAP基因表达情况。结果 XIAP基因在CNE1低表达,而在CNE2和5-8F高表达。结论 XIAP与NPC的恶性程度和转移潜能有关。

XIAP、XAF1、TNF-α在子宫内膜异位症发病机制中的作用

目的:探讨X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)及相关因子1(XAF1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在子宫内膜异位症(EMT)发病机制中的作用。方法:2007年6月～2008年4月行腹腔镜下子宫内膜异位囊肿剥除术患者65例(研究组),同期因输卵管因素不孕行腹腔镜手术治疗的患者55例(对照组),均刮取子宫内膜,利用流式细胞仪检测细胞凋亡率;免疫组化检测在位及异位子宫内膜组织中XIAP和XAF1的表达;ELISA检测两组患者腹水中TNF-α浓度。结果:①对照组分泌期细胞凋亡率(7.38±0.76%)高于增生期(4.66±1.14%)(P<0.05);研究组在位和异位内膜增生期与分泌期细胞凋亡率均无周期变化,异位内膜低于在位内膜(P<0.05),在位内膜低于正常内膜(P<0.05)。②对照组和研究组在位内膜中XIAP的表达,增生期均高于分泌期(P<0.05),在研究组异位内膜中表达无周期变化。③XAF1的表达,对照组和研究组在位内膜组织中分泌期XAF1表达高于增生期(P<0.05),研究组异位内膜增生期和分泌期XAF1的表达无差异(P>0.05)。④研究组和对照组增生期与分泌期腹水中TNF-α浓度无差异(P>0.05),研究组高于对照组(P<0.05)。⑤XIAP与XAF1表达呈负相关,XAF1的表达与TNF-α水平呈正相关(P<0.05)。结论:在EMT中凋亡抑制因子表达增强,凋亡促进因子表达减弱,可能对异位内膜种植起促进作用,但TNF-α水平升高通过增强XAF1活性,在一定程度上限制了异位内膜的无限制生长,使其表现为良性疾病。

非小细胞肺癌XIAP和Smac的表达与临床病理特征及预后的关系

目的:探讨XIAP(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)和Smac(second mitochondria-derived activator of cas-pase,Smac)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达与临床病理特征及预后的关系。方法:采用免疫组织化学法检测70例非小细胞肺癌组织及70例对应癌旁肺组织中XIAP、Smac的表达。结果:XIAP在70例NSCLC组织中有59例阳性表达,其中高表达16例;对应70例癌旁肺组织中有52例表达,其中高表达5例,两组XIAP表达强度比较差异有统计学意义(Z=-4.049,P<0.001);Smac在70例肺癌组织中有63例阳性表达,其中高(强阳性)表达32例;对应70例癌旁肺组织有53例表达,其中高(强阳性)表达5例,两组Smac表达强度比较差异有统计学意义(Z=-5.484,P<0.001)。NSCLC组织中XIAP、Smac的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、组织类型、分化程度、吸烟与否等无明显关系(P>0.05);但二者的表达均与临床分期、淋巴结转移与否有关系(P<0.05)。通过Kaplan-Meier法分析得出,XIAP和Smac在NSCLC中的表达与患者的预后均无明显关系(P>0.05)。结论:1)XIAP和Smac在非小细胞肺癌组织及其对应癌旁肺组织中均有表达,但存在表达量的差异。2)XIAP和Smac在非小细胞肺癌中的表达与患者的预后均无显著关系。

XIAP抑制剂增强依托泊苷对急性淋巴细胞白血病6T⁃CEM细胞凋亡诱导作用的研究

目的研究XIAP抑制剂AT-406联合依托泊苷对急性淋巴细胞白血病6T-CEM细胞凋亡的诱导作用及分子机制.方法体外培养6T-CEM细胞,加入不同浓度(0.1、1、10μmol/L)的XIAP抑制剂AT-406和20 nM依托泊苷处理6T-CEM细胞,CCK8分析药物对细胞生长抑制率;PE-Annexin-V/7-AAD双染检测XIAP抑制剂AT-406联合依托泊苷对6T-CEM细胞凋亡的影响;比色法分析XIAP抑制剂AT-406联合依托泊苷处理的6T-CEM细胞中Caspase-3酶活性的影响,Western Blot分析凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase-3表达水平.结果不同浓度XIAP抑制剂AT-406处理6T-CEM细胞后明显抑制细胞的增殖,AT-406增强依托泊苷对细胞的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡,XIAP抑制剂AT-406增强可以依托泊苷对6T-CEM细胞凋亡的作用诱导,差异具有统计学意义(P<0.05);AT-406联合依托泊苷增强6T-CEM细胞中Caspase-3酶活性;Western Blot实验结果显示XIAP抑制剂AT-406处理的6T-CEM细胞中,细胞凋亡执行蛋白Cleaved-Caspase-3表达明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05).结论XIAP抑制剂AT-406增强依托泊苷对急性淋巴白血病6T-CEM细胞凋亡的诱导作用,激活细胞凋亡途径.

凋亡抑制蛋白XIAP在胃癌组织中的表达及临床意义

目的研究X连锁凋亡抑制因子(XIAP)在胃癌组织中基因和蛋白水平的表达,探讨XIAP在胃癌抗凋亡特性中的作用以及与病理分级和临床分期的关系。方法采用RT-PCR检测胃癌组织及癌旁正常组织中XIAP基因的表达。采用免疫组织化学法对25例胃癌组织中XIAP蛋白表达进行检测并积分。结果胃癌组织中XIAP mRNA高表达,癌旁正常组织中XIAP mRNA低表达,两者表达率有统计学差异(P=0.000),免疫组化染色显示:XIAP蛋白主要集中在胃腺癌细胞浆中,在胃癌组织中的阳性率为84.0%(21/25),在癌旁正常胃组织中的阳性率为25.0%(6/25),两者差异有显著性(P=0.000)。XIAP蛋白表达与肿瘤病理分化程度有关(P=0.002),与临床分期无关。结论提示XIAP在胃癌中的高表达与胃癌的发生可能有关,可望作为胃癌基因治疗的一个新靶点。

XIAP及PCNA表达水平与非小细胞肺癌患者临床分期及预后的关系

目的探讨X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)及增殖细胞核抗原(PCNA)表达与非小细胞肺癌患者临床分期及预后的关系。方法以本院2012年1月至2016年12月收治的260例非小细胞肺癌患者为研究对象,分析患者血清中XIAP及PCNA表达水平与非小细胞肺癌患者临床分期及预后的关系。结果 XIAP、cyclin D1、Smac、PCNA、E-cadherin、Ki67、CD34、VEGF及EGFR表达水平与非小细胞肺癌临床分期密切相关,且随着临床分期增高,上述蛋白表达水平升高(P<0.05);XIAP及PCNA表达水平与非小细胞肺癌患者预后呈负相关,即非小细胞肺癌患者XIAP及PCNA表达水平越高,预后越差(P<0.05)。结论 XIAP及PCNA蛋白与非小细胞肺癌患者临床分期及预后有关。

XIAP及其相关因子1在急性淋巴细胞白血病中表达意义

目的:探讨X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)及其相关因子(XAF1)在急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及其临床意义,并评估其在临床治疗及预后中的价值。方法:采用病例对照研究,应用实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测85例ALL患者骨髓标本中XIAP及XAF1的mRNA表达水平。结果:XIAP mRNA表达水平初诊ALL组高于CR组和对照组(P<0.05),而低于复发组(P<0.05),CR组表达水平高于对照组(P<0.05);而XAF1在ALL时呈低表达或不表达,CR组表达高于ALL其它组(P<0.05),与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。XIAP及XAF1二基因表达水平在T系ALL与B系ALL,成人与儿童,男女性别之间表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。XIAP/XAF1比值在ALL患者中初诊组和复发组明显高于对照组和缓解组(P<0.05),缓解组高于对照组(P<0.05)。结论:ALL患者XIAP基因高表达,而XAF1呈现低表达或不表达,提示XIAP可能通过抑制白血病细胞凋亡参与了ALL的发生发展,并与预后不良及治疗反应相关。ALL中XIAP与XAF1表达水平的不平衡,可能是ALL预后不良及复发的一项重要因素之一。抑制XIAP及上调XAF1基因来治疗ALL,将为ALL的基因治疗提供新思路。

XIAP、P53和Ki67在甲状腺乳头状癌中的表达及相互关系

目的探讨XIAP、P53和Ki67在甲状腺乳头状癌组织中的表达及相互关系。方法采用免疫组化SP法检测35例甲状腺乳头状癌和28例甲状腺腺瘤组织中XIAP、P53和Ki67的表达情况。结果 XIAP、P53和Ki67在甲状腺乳头状癌组织中表达阳性率分别为94.29%、85.71%和65.71%,与甲状腺腺瘤(50.00%、14.29%、7.14%)比较差异有统计学意义(P<0.01)。P53和Ki67的表达与XIAP的表达无相关性(r值分别为0.05177和0.02457,P均>0.05)。P53和Ki67在甲状腺乳头状癌组织中的表达与性别、年龄、结节数量、肿瘤大小无关(P>0.05),XIAP表达女性高于男性。结论 XIAP、P53和Ki67在甲状腺乳头状癌组织中表达增高,XIAP、P53和Ki67表达无相关关系。

前列腺癌基因治疗XIAP-shRNA表达载体的构建及鉴定

目的为了研究X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)对前列腺癌的作用,构建靶向XIAP基因的小发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)表达载体.方法设计3对针对XIAP基因不同位点的shRNA片段,构建携带此shRNA片段的真核表达载体pGPU6/GFP/Neo-XIAP,分别命名为XIAP-shRNA1、XIAP-shRNA2和XIAP-shRNA3,进行酶切及测序鉴定.通过脂质体转染人前列腺癌细胞株DU145,并优化转染率.结果测序证明干扰序列完全正确,当质粒与脂质体比例1μg:2μl时转染率最高.结论成功构建重组质粒pGPU6/GFP/Neo-XIAP,为进一步研究XIAP基因在前列腺癌基因治疗奠定了基础.

蒽贝素(Embelin)通过阻断NF-κB信号通路抑制肝癌细胞Bel-7404生长的研究

蒽贝素(Embelin)是一种X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)的小分子抑制剂,可以抑制XIAP的生成和活性,从而解除XIAP的抗凋亡作用,使凋亡顺利进行.研究了Embelin抑制肝癌细胞Bel-7404增殖的机制.采用不同浓度梯度,通过荧光显微镜、Hochest33342染色、MTT检测、AnnexinⅤ/PI流式细胞术和Western blot分别检测Embelin对Bel-7404细胞的形态学变化、凋亡小体形成、细胞存活率、细胞凋亡水平、凋亡信号转导相关蛋白表达的影响.结果显示,Embelin能明显抑制Bel-7404细胞增殖,并通过激活caspase通路以及阻断NF-κB信号通路诱导Bel-7404细胞凋亡,为进一步利用Embelin进行肝癌治疗的研究打下一定的基础.

X-连锁凋亡抑制蛋白在鼻咽癌中的表达及其意义

目的探讨X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)表达在鼻咽癌发生发展过程中的作用,以及XIAP表达与鼻咽癌分化程度和淋巴转移的关系。方法应用RT-PCR法检测45例鼻咽癌组织、17例正常鼻咽组织和鼻咽癌细胞株5-8F、CNE-2中XIAP mRNA的表达,并通过免疫组化SP法检测鼻咽癌组织及癌旁组织XIAP蛋白的表达情况。结果 XIAP mRNA在5-8F、CNE-2和鼻咽癌组织中呈高表达,正常鼻咽组织不表达或低表达;鼻咽癌组织和正常鼻咽组织XIAP mRNA阳性检出率分别为86.67%(39/45)和35.29%(6/17)(P<0.01);在鼻咽癌组织和癌旁组织中,XIAP蛋白阳性检出率分别为82.22%(37/45)和24.44%(11/45)(P<0.01);鼻咽癌组织XIAP蛋白表达与肿瘤分级和淋巴转移无关(P>0.05)。结论 XIAP在鼻咽癌中高表达,可能在鼻咽癌发生过程中具有重要的作用。

凋亡抑制蛋白在TRAIL诱导胃癌细胞凋亡中的作用

目的探讨凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis pro-teins,IAP)在调节胃癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)敏感性方面的作用。方法 PI染色流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测caspase-3、PARP、XIAP、Survivin、cIAP1和cIAP2的表达。结果 TRAIL能诱导胃癌细胞凋亡,BGC-823细胞较SGC-7901细胞对TRAIL更敏感。caspase-3的活化及PARP的裂解在TRAIL作用早期即出现,且BGC-823细胞较SGC-7901细胞发生得更快。4种IAP蛋白在两株胃癌细胞中都组成性地高表达,Survivin和cIAP1在TRAIL处理前后无变化。而XIAP在BGC-823细胞中明显下降,在SGC-7901细胞中无改变。cIAP2在TRAIL作用后两株细胞中均有所降低。结论 TRAIL诱导胃癌细胞凋亡可能在活化的caspase-3水平受调控,XIAP能保护胃癌细胞免于凋亡。

紫杉醇联合奥沙利铂对非小细胞肺癌模型小鼠的治疗作用

目的观察紫杉醇联合奥沙利铂对荷瘤裸鼠非小细胞肺癌治疗效果以及对PDCD5和XIAP表达的影响。方法制备裸鼠肺癌荷瘤模型,将荷瘤小鼠随机分为空白组、0.9%氯化钠溶液组、奥沙利铂组、紫杉醇组和紫杉醇联合奥沙利铂组;q-PCR检测各组PDCD5和XIAP基因表达水平;Western bolt分析各组PDCD5和XIAP蛋白表达情况;对比分析各组肿瘤组织重量。结果紫杉醇联合奥沙利铂组PDCD5 mRNA表达水平最高(P<0.01),XIAP mRNA表达水平最低(P<0.01);紫杉醇联合奥沙利铂组PDCD5蛋白表达最高(P<0.01),XIAP蛋白表达最低(P<0.01);对比各分组肿瘤组织重量,紫杉醇联合奥沙利铂组肿瘤质量最小(P<0.01)。结论紫杉醇联合奥沙利铂化疗能显著增加PDCD5表达和降低XIAP表达,能使已发生的非小细胞肺癌组织质量显著减少。