XIAP基因在乳腺癌发生及发展过程中的表达及意义

目的:探讨XIAP基因在乳腺癌发生和发展中的作用。方法:采用免疫组化S-P法检测正常乳腺组织(96例)、乳腺囊性增生组织(56例)、乳腺不典型增生组织(12例)及乳腺癌组织(119例)中XIAP蛋白的表达,并分析其与乳腺癌临床病理特征的关系。结果:XIAP蛋白在正常乳腺组织、乳腺囊性增生组织、乳腺不典型增生组织及癌组织中的阳性率分别为4.2%(4/96)、5.4%(3/56)、42.7%(5/12)和72.2%(86/119),后两者的阳性表达率明显高于前两者(P<0.005);浸润性非特殊型乳腺癌XIAP蛋白阳性率(82.0%,73/89)明显高于浸润性特殊型乳腺癌(45.4%,10/22)和早期浸润性乳腺癌(37.5%,3/8)(P<0.05);XIAP蛋白表达在有淋巴结转移的乳腺癌中有升高趋势,但无统计学意义(P>0.05)。结论:XIAP蛋白在乳腺癌发生、发展不同阶段呈不同程度的表达,过度表达提示预后不良。

XIAP基因在慢性髓系白血病中的表达及临床意义

本研究旨在检测慢性髓系白血病(CML)患者XIAP基因mRNA的表达情况,以探讨其在CML病情进展及预后中的意义。应用染色体R显带技术及实时PCR技术对71例CML患者和10名健康者进行染色体核型分析及XIAP mRNA检测。结果表明,XIAP mRNA在CML的加速期和急变期的平均表达水平明显高于慢性期(p<0.01)。XIAP基因在不同核型组的平均表达水平无显著性差异。结论:CML患者加速期和急变期XIAP基因表达明显增高,XIAP基因与CML的病情进展密切相关。

转染XIAP基因对丝裂霉素诱导膀胱癌细胞凋亡的影响

目的 :探讨XIAP基因对低剂量丝裂霉素C(MMC)诱导膀胱癌细胞凋亡的影响。方法 :脂质体介导XIAP基因转染膀胱癌T2 4细胞 3天后 ,用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测XIAP基因的表达 ,用低剂量MMC诱导细胞凋亡启动 ,用MTT比色法分析检测癌细胞生长活性 ,用 3’末端脱氧核苷酰转移酶介导生物素标记法检测细胞凋亡率。结果 :各组癌细胞在低剂量MMC的诱导下发生凋亡 ,与单用MMC组比较 ,转染XIAP基因的癌细胞组的凋亡率显著降低。结论 :XIAP基因在癌细胞中的过度表达可以明显降低化疗药物诱导的膀胱癌细胞凋亡 ,其可能在膀胱癌多药耐药中起一定作用。

人XIAP基因多克隆抗体的快速制备方法研究

【目的】探索快速制备高品质X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)多克隆抗体的方法,为研究XIAP基因的功能及XIAP蛋白在肿瘤组织中的表达量检测提供参考。【方法】通过RT-PCR方法获得人XIAP基因的CDs区序列,与pET151/D-TOPO载体连接,构建XIAP基因的原核表达载体;考察细胞密度(OD600)、IPTG浓度、诱导温度和诱导时间对XIAP重组蛋白表达量的影响,以确定XIAP重组蛋白的最佳诱导条件,并用Ni-NTA亲和层析柱法纯化XIAP重组蛋白;用纯化的XIAP重组蛋白对2只成年新西兰白兔进行常规免疫后,再对其中1只进行耳静脉注射加强免疫,连续3d,每天免疫1次,用ELISA检测抗体效价,Western blot检测抗体特异性。【结果】①通过RT-PCR方法获得人XIAP基因的CDs区序列,与pET151/D-TOPO载体连接,构建XIAP基因的原核表达载体,测序后,与GenBank中序列的的相似度为97%。②XIAP重组蛋白的最佳诱导条件为:温度30℃,初始诱导细胞密度(OD600)为0.6,IPTG浓度0.5mmol/L,诱导时间4h。在此条件下,XIAP重组蛋白多以包涵体的形式存在于细胞沉淀中。③利用Ni-NTA亲和层析柱法,在pH为5.9和4.5的洗脱液中均可获得质量浓度为600μg/mL的XIAP重组蛋白。④耳静脉连续加强免疫是刺激动物机体快速产生抗体的有效方法(31d)。ELISA和Western blot检测结果表明,耳静脉连续加强免疫产生的XIAP抗体的效价和特异性均明显高于常规免疫所产生的抗体。【结论】耳静脉连续加强免疫能够显著提高XIAP抗体的效价,且能有效缩短多克隆抗体的制备时间。

XIAP基因对食管癌细胞黏附、侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨沉默X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因表达对食管癌细胞黏附、侵袭和迁移能力的影响及机制。方法:参照LipofectamineTM2000说明将设计合成的XIAP特异性siRNA(si-XIAP)转染人食管癌EC9706细胞,将转染阴性对照siRNA(NC组)和仅加入脂质体的空白细胞作为两个对照组,siRNA转染48 h,通过Western blotting检测XIAP、AKT、p-AKT、E-cadherin和MMP-2蛋白表达;通过MTT法、Transwell法分别检测细胞黏附、侵袭和迁移能力;MTT法检测转染siRNA后24 h、48 h和72 h的细胞增殖。结果:XIAP特异性siRNA转染后,EC9706细胞XIAP表达明显降低,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.05)。与空白组比较,si-XIAP组细胞增殖明显降低,黏附率明显升高,侵袭和迁移能力明显降低,p-AKT和MMP-2表达明显降低,E-cadherin表达明显升高(P<0.05)。结论:沉默XIAP基因可增强食管癌细胞黏附率,抑制侵袭和迁移能力,机制与抑制PI3K/AKT信号通路有关。

XIAP基因在骨髓瘤患者中的表达及临床意义

多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）是浆细胞的恶性肿瘤。骨髓内肿瘤性浆细胞增生,常侵犯多处骨组织,引起多发性溶骨性病损。MM病变为多发性,常引起多处骨组织破坏,可累及骨骼系统的任何部位。X连锁凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP）是凋亡抑制蛋白（IAP）家族的一员[1]。在已经发现的IAP家族成员中,

儿童噬血细胞性淋巴组织细胞增生症XIAP基因突变筛查

目的了解X连锁凋亡抑制因子（XIAP）基因突变和序列变异在儿童噬血细胞性淋巴组织细胞增生症（HLH）中的发生情况。方法应用聚合酶链反应（PCR）结合直接测序方法，对2009年1月至2012年12月诊断为HLH的65例患儿（病例组）及70例健康儿童（对照组）XIAP基因外显子（1-1、1．2、2-6）编码区进行序列分析。结果在HLH患儿XIAP基因外显子编码区未发现突变；仅在XIAP外显子5发现1个非同义单核苷酸多态性（SNP）位点rs5956583，但此SNP位点的基因型和等位基因频率在病例组和对照组之间的分布差异均无统计学意义（均P〉0．05）。结论由XIAP基因突变导致的儿童HLH可能比较罕见；XIAP基因SNP位点rs5956583可能与儿童HLH发病关系不大。

Smac和XIAP基因在肾细胞癌中的表达及意义

目的 探讨Smac和XIAP基因在肾细胞癌组织中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学法检测95例肾癌标本不同分型、分级、分期及10例正常肾组织中Smac和XIAP的表达,分析其表达与肾癌分级、分期的关系及二者表达相关性.结果 Smac在各型肾细胞癌中随分期、分级的增加表达减低,XIAP在各型肾细胞癌中随分期、分级的增加表达增高,二者的表达呈负相关.结论 Smac和XIAP表达与肾细胞癌分期、分级关系密切,共同参与了肾癌的发生发展。

凋亡抑制基因XIAP在前列腺癌细胞中的表达及与临床病理特征的关系

目的 :研究XIAP基因在前列腺癌细胞系和前列腺癌组织的表达情况 ,及其与前列腺癌临床病理特征的关系。 方法 :应用RT PCR检测前列腺癌组织、正常前列腺组织和前列腺癌细胞株PC 3,DU 14 5 ,LNCaP细胞XIAP基因的表达 ,并通过免疫组化SP法检测 5 6例前列腺癌组织标本XIAP蛋白的表达情况。 结果 :XIAP基因在前列腺癌组织和前列腺癌细胞株PC 3,DU 14 5 ,LNCaP细胞高表达 ,正常前列腺组织无表达。在前列腺癌组织和癌旁组织中 ,XIAP蛋白阳性检出率分别为 5 3.6 % (30 / 5 6 )和 2 1.5 % (12 / 5 6 ) (P <0 .0 1) ;不同分期、分级组XIAP阳性检出率相比差异无显著性 (P >0 .0 5 )。 结论 :凋亡抑制基因XIAP与前列腺癌相关 ,在前列腺癌发生过程中具有重要的作用 ,有可能成为前列腺癌治疗的靶标。

干扰XIAP基因联合5-FU对人胆管癌细胞体内生长抑制的实验研究

XIAP基因是凋亡抑制蛋白（IAPs）家族的主要成员之一，它与恶性肿瘤的发生、发展有密切的关系口]。本实验小组在体外实验的基础上，将XIAP反义寡核苷酸（ASODN）单独或联合5-FU对人胆管癌裸鼠种植瘤模型进行干预，通过一系列观察指标，探讨二者体内协同抑癌作用，为临床联合用药提供理论依据。

RNAi双向沉默Survivin和XIAP基因对卵巢癌细胞A2780-cp凋亡及顺铂敏感性影响的观察

目的:运用RNA干扰技术双向沉默卵巢癌耐顺铂细胞株A2780-cp的Survivin和XIAP基因后,观察细胞的凋亡及对顺铂敏感性的影响。方法:通过脂质体介导将化学合成的Survivin-siRNA和XIAP-siRNA,共同或单独转染到卵巢癌耐药细胞株A2780-cp中,未转染组作为阴性对照;流式细胞术(FCM)检测转染细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测Survivin和XIAP基因的蛋白表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测转染后细胞对顺铂的敏感性及其增殖情况。结果:转染48 h后,单独和共同转染组与对照组相比可见明显的细胞凋亡形态学变化,共转染组凋亡率为26.98%,高于单转Survivin-siRNA组(12.82%)和单转XIAP-siRNA组(11.18%)。蛋白质印迹法结果显示,共转染组Survivin和XIAP的蛋白抑制率分别为71.11%和76.81%,单转染组Survivin和XIAP蛋白抑制率分别为75.00%和82.48%,与其他对照组比较差异有统计学意义,P<0.05;MTT结果显示,转染后细胞对顺铂敏感性增强,共转染组细胞生长活力下降明显,顺铂的IC50值为(0.10±0.01)μg/mL,与单转染组及脂质体转染组比较差异有统计学意义,P<0.05。结论:同时干扰Survivin基因和XIAP基因能更好的抑制卵巢癌耐药细胞株A2780-cp的生长,降低其耐药性,促进其凋亡。

下调XIAP表达增强化疗药物诱导胃癌细胞凋亡的作用

目的:观察下调X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因表达对胃癌细胞化疗敏感性的影响.方法:构建XIAP基因反义真核表达载体,稳定转染胃癌细胞株MKN-45,RT-PCR和Western blot法检测癌细胞XIAP基因表达.选用顺铂、丝裂霉素分别处理转染前后的胃癌细胞,采用MTT比色法、克隆形成抑制实验检测癌细胞体外生长活性:透射电镜、流式细胞术、TUNEL检测癌细胞凋亡及比率;Western blot和比色法检测细胞内caspase-3蛋白表达和活性水平.结果:RT-PCR和Western blot证实,稳定转染反义XIAP基因的胃癌细胞MKN-45的XIAP mRNA和蛋白表达水平分别降低84.75%(P<0.01)和89.75%(P<0.01),各浓度顺铂、丝裂霉素处理24 h后,转染反义XIAP基因的MKN-45细胞生长抑制率分别增加7.3%-25.3%(P<0.01),12.3%-16.3%(P<0.01).透射电镜下可见部分细胞发生典型的凋亡形态学改变,凋亡率分别为34.12%和32.5%,显著高于未转染对照组MKN-45细胞的凋亡率(14.2%,P<0.05).与MKN-45细胞比较,稳定转染反义XIAP基因的MKN-45细胞内caspase-3表达水平增高2.45倍(P<0.01),活性水平提高3.68倍(P<0.0 1).结论:通过反义RNA技术下调XIAP基因表达,能提高癌细胞中caspase-3的表达和活性,增强化疗药物对癌细胞的诱导凋亡作用.

XIAP、survivin、LPA及CA125在上皮性卵巢癌中的表达

目的:探讨上皮性卵巢癌患者的组织标本中survivin mRNA和XIAP mRNA及血浆LPA和血清CA125表达与卵巢癌患者临床病理学指标的关系。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测50例上皮性卵巢癌及12例正常卵巢组织标本中survivin mRNA和XIAP mRNA的表达,检测50例卵巢癌、44例卵巢良性疾病患者及20例健康女性血浆LPA和血清CA125的表达情况。结果:在正常卵巢标本与卵巢癌标本中,XIAP mRNA的阳性表达率分别为2/12(16.7%)、37/50(74%),差异有统计学意义(P<0.05);sur-vivin mRNA的阳性表达率分别为0、42/50(84%),差异有统计学意义(P<0.05)。survivin mRNA与XIAP mR-NA在卵巢癌组织中的表达呈正相关rs=0.03(P<0.05)。XIAPs、urvivin表达与肿瘤的病理分期、病理类型、淋巴结转移和腹水形成有关(P<0.05)。卵巢癌组血浆LPA均值为(7.67±3.02)μmol/L,阳性率为78.0%;卵巢良性疾病组LPA均值为(2.734±1.471)μmol/L,阳性率为27.3%,健康对照组LPA均值为(1.557±1.294)μmol/L,阳性率为5.0%,三者间的差异有统计学意义(P<0.05)。卵巢癌的诊断中LPA的特异度为75.0%,高于CA125;早期卵巢癌的诊断中二者联合检测的灵敏度最高,为85.7%;LPA的灵敏度为71.4%,高于CA125的28.6%,差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅱ-Ⅳ期患者血浆LPA水平较Ⅰ期显著升高(P<0.01);Ⅱ-Ⅳ期各期之间无显著性差异(P>0.05)。3种病理类型中LPA阳性率的差异无显著性(P>0.05)。结论:survivin和XIAP基因系重要的肿瘤相关基因,与卵巢癌的发生发展有关;血浆LPA诊断早期卵巢癌的特异性和敏感性均高于CA125,联合检测有较高的临床价值。

动脉栓塞化疗宫颈癌患者近期疗效差异的HSPA1A基因多态性及影响因素分析

目的探讨动脉栓塞化疗宫颈癌患者近期疗效差异的HSPA1A基因多态性及影响因素。方法随机选取187例宫颈癌患者(Ⅰb~Ⅲb期)作为宫颈癌组,再根据化疗效果分为疗效好组(n=142)和疗效差组(n=45);随机选取同时期体检正常的女性106例作为对照组。采用TaqMan探针基因分型法研究HSPA1A基因SNP位点rs1008438(G>T)的等位基因、基因型的分布频率;采用荧光定量PCR法检测XIAP和Smac基因的相对表达量。结果rs1008438位点等位基因G和T在疗效好组和对照组、疗效好组和疗效差组中的分布频率比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。动脉栓塞化疗后,疗效好组XIAP基因的相对表达量降低,凋亡细胞数增加(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,患者动脉栓塞化疗前的XIAP基因表达量、凋亡细胞数、宫颈病灶大小评分、宫旁受侵质地评分及总分与化疗后疗效差异相关(P<0.05)。结论针对宫颈癌化疗疗效差的患者,要综合考虑宫颈局部病灶和宫旁受侵组织的情况,进一步改进治疗方案。

消瘤1号通过影响XIAP表达诱导MCF-7人乳腺癌细胞凋亡

目的探讨中成药消瘤1号诱导MCF-7人乳腺癌细胞的凋亡作用,并通过分析其作用后的MCF-7细胞XIAP蛋白表达的变化,探讨其诱导MCF-7细胞凋亡的分子机制。方法采用细胞培养技术,用不同浓度药物处理MCF-7细胞24、48、72 h,用CCK-8法检测药物对细胞增殖的影响;用HE染色细胞,观察细胞形态变化;采用Western blot法检测XIAP和caspase-3表达。结果消瘤1号处理MCF-7细胞24 h,随着药物浓度增加,作用时间延长,细胞增殖速度减慢;细胞经染色后,与对照组相比,经药物处理后的细胞核出现皱缩,细胞膜褶皱、卷曲和破碎,提示凋亡细胞的增多。Western blot检测结果表明,消瘤1号通过下调XIAP,上调caspase-3蛋白表达诱导乳腺癌细胞的凋亡,并且呈浓度依赖性。结论消瘤1号能够通过XIAP直接抑制凋亡效应分子caspase-3的活性,促进MCF-7细胞凋亡,抑制细胞增殖。

葛根素对脑缺血诱导神经细胞凋亡的保护作用

目的探讨葛根素(puerarin,Pur)对脑缺血诱导神经细胞凋亡和凋亡蛋白抑制剂XIAP表达的影响。方法SD大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)的同时ip50,100mg.kg-1Pur,MCAO50min后再灌注24h,用TTC染色法、Annexin-V和PI双荧光标记结合流式细胞检测法、半定量RT-PCR等技术分别检测大鼠脑水肿、梗死体积、细胞凋亡和坏死率、caspase-3活性、XIAPmRNA表达。结果Pur(100mg.kg-1)明显缓解缺血引起的脑水肿和神经行为障碍(P<0.05);减少脑梗死体积,以皮层尤其显著(P<0.01)。Pur(100mg.kg-1)还显著降低背外侧皮层的细胞凋亡和坏死率,抑制caspase-3活性,逆转缺血诱导的XIAPmRNA表达下调(P<0.05,P<0.01)。结论Pur通过调节神经细胞XIAPmRNA表达,抑制细胞凋亡而保护缺血性脑损伤。

灯盏花素对缺血再灌注小鼠脑细胞凋亡的保护作用

目的探讨灯盏花素对脑缺血再灌注诱导细胞凋亡损伤的保护机制。方法小鼠采用双侧颈总动脉结扎法建立重复全脑缺血再灌注模型。术后24或48h,制备石蜡切片(HE染色)检测脑组织海马CA1区锥体细胞形态学变化;用紫外分光光度计检测脑组织一氧化氮合成酶(NOS)活性;用琼脂糖凝胶电泳技术检测DNA损伤情况,同时用RT-PCR技术检测缺血再灌注过程中小鼠海马CA1区凋亡蛋白抑制剂XIAP(X-chromosome linked inhibitor of apoptosis protein)mRNA的表达。结果全脑重复缺血再灌注可以使海马CA1区幸存的锥体细胞数量减少(P<0.01),提高NOS活性,并增加DNA片段化程度,同时伴随着XIAPmRNA表达显著下调(P<0.01)。5,20和80mg.kg-1灯盏花素能剂量依赖性减少缺血小鼠海马CA1区神经细胞的死亡(P<0.05,P<0.01),降低NOS(P<0.01)活性,并抑制DNA片段化的产生以及XIAP mRNA表达的下调(P<0.05,P<0.01)。结论灯盏花素可通过抑制神经细胞凋亡而减轻缺血再灌注引起的脑损伤。

X-连锁凋亡抑制蛋白在鼻咽癌中的表达及其意义

目的探讨X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)表达在鼻咽癌发生发展过程中的作用,以及XIAP表达与鼻咽癌分化程度和淋巴转移的关系。方法应用RT-PCR法检测45例鼻咽癌组织、17例正常鼻咽组织和鼻咽癌细胞株5-8F、CNE-2中XIAP mRNA的表达,并通过免疫组化SP法检测鼻咽癌组织及癌旁组织XIAP蛋白的表达情况。结果 XIAP mRNA在5-8F、CNE-2和鼻咽癌组织中呈高表达,正常鼻咽组织不表达或低表达;鼻咽癌组织和正常鼻咽组织XIAP mRNA阳性检出率分别为86.67%(39/45)和35.29%(6/17)(P<0.01);在鼻咽癌组织和癌旁组织中,XIAP蛋白阳性检出率分别为82.22%(37/45)和24.44%(11/45)(P<0.01);鼻咽癌组织XIAP蛋白表达与肿瘤分级和淋巴转移无关(P>0.05)。结论 XIAP在鼻咽癌中高表达,可能在鼻咽癌发生过程中具有重要的作用。

凋亡抑制基因XIAP在前列腺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨前列腺组织中凋亡抑制基因XIAP的表达及其与临床病理特征的关系。方法应用RT-PCR和免疫组化(SP)法,检测XIAP在62例前列腺癌组织中的表达情况。结果62例前列腺癌组织中XIAP基因高表达,正常的前列腺组织中XIAP均无明显表达。62例前列腺癌组织中XIAP蛋白阳性表达共有43例(69．4％),低分化组XIAP蛋白阳性表达率(94．4％)明显高于中分化(70．0％)和高分化组(35．7％),其差异有统计学意义(P<0．05);XIAP蛋白阳性表达与前列腺癌的临床分期比较亦有统计学意义,临床分期愈晚,XIAP蛋白阳性表达率愈高(P<0．05)。结论XIAP与前列腺癌的发生发展有关,检测前列腺癌组织中XIAP表达可能对判断前列腺癌预后有一定意义。

X-连锁凋亡抑制蛋白在子宫颈癌组织的表达

目的探讨XIAPmRNA表达在子宫颈癌发生发展过程中的作用。方法通过HE染色从组织病理学上确定子宫颈组织的良、恶性以及恶性组织的分级和分期。应用RT-PCR法检测43例子宫颈癌组织和15例慢性子宫颈炎组织中XIAPmRNA的表达情况。结果子宫颈癌组织XIAPmRNA表达的阳性率为88.37%,明显高于慢性子宫颈炎组织(46.67%),两者差异显著(P<0.01)。XIAPmRNA表达随分化程度降低而升高(P<0.01),有淋巴转移的患者高于无淋巴转移的患者(P<0.05);子宫颈癌组织XIAPmRNA表达与患者年龄、病理分期无关(P>0.05)。结论XIAP与子宫颈癌发生发展有密切关系;其表达水平的检测对子宫颈癌的病理诊断及其分级有参考价值。