右美托咪定预处理通过XIST/miR-125a/DRAM2轴预防大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的探讨右美托咪定(dexmedetomidine,Dex)预处理通过XIST/miR-125a/DRAM2轴对大鼠心肌缺血再灌注损伤(myocardical ischemia-reperfusion injury,MI/RI)的影响。方法体内实验将45只大鼠随机分为假手术组、MI/RI组、Dex组;采用结扎冠状动脉左前降支法建立MI/RI大鼠模型;Dex组缺血前给予静脉注射5μg/kg Dex预处理;体外实验以H9C2心肌细胞为研究对象,分为空白组、H/R组、Dex组、Dex+pcDNA3.1 NC组、Dex+pcDNA3.1 XIST组;通过缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)构建MI/RI体外细胞模型;通过qRT-PCR技术检测体内外实验各组中XIST、miR-125a、DRAM2的mRNA表达水平;通过免疫印迹技术检测体内外实验各组中DRAM2的蛋白表达水平;通过HE染色检测大鼠心肌组织病理学变化和心肌梗死面积;通过ELISA技术检测各组大鼠血清中肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme,CK-MB)、肌钙蛋白I(cTnI)含量;通过丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)检测试剂盒考察细胞上清液中MDA和SOD的浓度;通过双荧光素酶报告基因系统考察XIST、miR-125a的靶向关系。结果在体内实验中,与假手术组相比,MI/RI组梗死面积、CK-MB、cTnI含量、XIST、DRAM2表达均显著上调(P<0.05),而miR-125a的显著下调(P<0.05);此外,与MI/RI组相比,Dex组梗死面积、CK-MB、cTnI含量、XIST、DRAM2表达均显著下调(P<0.05),miR-125a表达显著上调(P<0.05);在体外实验中,与对照组相比,H/R组MDA含量、细胞凋亡率、XIST、DRAM2表达均显著上调(P<0.05),SOD含量、miR-125a表达均显著下调(P<0.05);与H/R组相比,Dex组MDA含量、细胞凋亡率、XIST、DRAM2表达均显著下调(P<0.05),SOD含量、miR-125a表达均显著上调(P<0.05);过表达XIST逆转了Dex对MIRI体外细胞模型的保护作用(P<0.05)。结论Dex预处理可以改善MIRI大鼠症状,抑制心肌细胞氧化应激损伤及细胞凋亡,可能与调控XIST/miR-125a/DRAM2轴有关。

MiR-125b-5p通过靶向DRAM2抑制BCG介导的巨噬细胞自噬

目的:本文旨在探讨miR-125b-5p对BCG介导的细胞自噬途径的调控及巨噬细胞内BCG存活的影响及其可能的作用机制。方法:采用卡介苗菌株BCG感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,用RT-PCR检测miR-125b-5p的表达量。Western blot检测DRAM2及自噬相关蛋白表达水平。菌落形成单位(CFU)计数检测BCG生存率。通过生物信息学软件预测miR-125b-5p的靶基因。利用双萤光素酶报告系统、RT-PCR及Western blot法验证miR-125b-5p与DRAM2的靶向作用关系。结果: BCG感染的巨噬细胞RAW264.7中miR-125b-5p的表达明显上调,且呈时间依赖性。另外,miR-125b-5p过表达明显下调巨噬细胞中LC3-Ⅱ表达量,同时上调p62的表达水平,从而降低细胞的自噬水平。此外,过表达miR-125b-5p通过负性调控自噬过程增加胞内BCG的存活率。生物信息学分析表明DRAM2是miR-125b-5p的靶基因。双荧光素酶报告系统结果验证miR-125b-5p可明显抑制DRAM2的相对荧光素酶活性。RT-PCR及Western blot法证实miR-125b-5p可靶向作用于DRAM2-3′-UTR并抑制其表达。结论: BCG感染巨噬细胞RAW264.7后,可使miR-125b-5p表达明显上调,通过靶向抑制DRAM2的表达,从而参与调控巨噬细胞RAW264.7的自噬途径,继而影响BCG在细胞内的存活,这可能是MTB的潜伏感染的机制之一。