长链非编码RNA XLOC_004122在结核病患者肺巨噬细胞中的表达研究

目的探讨XLOC_004122在结核患者支气管肺泡灌洗液的表达以及功能,评价长链非编码RNA(XLOC_004122)作为诊断MTB感染新标志物的潜力。方法收集解放军第309医院2014年10月-2015年3月结核科48例患者支气管肺泡灌洗液标本,结合患者的临床症状、体征、实验室检查、影像学检查等将其分为结核病组和非结核对照组,应用实时荧光定量PCR检测XLOC_004122的差异表达;通过基因GO功能注释、富集分析和KEGG信号转导通路富集分析,阐明XLOC_004122靶基因参与调控的细胞功能与信号通路。结果与非结核对照组相比,结核病组XLOC_004122的表达量显著下调(t=-2.487,P<0.01);GO分析结果显示XLOC_004122靶基因功能主要富集于离子通道的活性、通道复合物的合成、跨膜转运活性等过程;KEGG信号转导通路主要富集于Ca2+、toll样受体等信号通路,通过XLOC_004122共表达的Ca2+通道信号通路可以看出其在NCX、OPCR、CaV1、PTK、MLCK和CAMK中均有差异表达。结论 XLOC_004122在结核感染中呈相对低表达,且可能与结核病的发生有关,可尝试将其作为诊断结核感染的新指标。

长链非编码RNA XLOC_002319在食管鳞癌中表达及其甲基化状态

目的:通过检测食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中长链非编码RNA XLOC_002319(long non-colding RNA XLOC_002319,lncRNA XLOC_002319)基因的表达及其甲基化状态,探讨XLOC_002319基因在ESCC发生及发展中的作用。方法:分别应用RT-PCR以及甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)的方法检测DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycitydine,5-aza-d C)处理前后的食管癌细胞株(TE1、TE13、Yes-2、Eca109和T.TN)、ESCC组织以及癌旁正常组织、食管上皮内瘤变(esophageal intraepithelial neoplasia,EIN)组织中XLOC_002319基因的表达和甲基化状态。结果:未经5-aza-d C处理的5种食管癌细胞中XLOC_002319基因的表达均呈阴性或弱阳性,经5-azad C的5种食管癌细胞中XLOC_002319基因的表达均增高。5株食管癌细胞在5-aza-d C处理前表现为XLOC_002319高甲基化状态,处理后,Eca109和T.TN细胞系中XLOC_002319基因甲基化程度降低,其余3株细胞系中XLOC_002319基因均表现为非甲基化状态。XLOC_002319基因在ESCC组织中的表达显著低于食管上皮内瘤变组织和癌旁正常组织(P<0.01),并与组织学分化程度和TNM分期密切相关(P<0.05)。ESCC组织中XLOC_002319基因启动子区甲基化率为63.75%(51/80),显著高于食管上皮内瘤变组织和癌旁正常组织(P<0.01),并与淋巴结转移、组织学分化程度和TNM分期密切相关(P<0.05)。发生XLOC_002319基因甲基化的ESCC组织中XLOC_002319基因表达显著低于未发生甲基化的ESCC组织(P<0.01)。结论:XLOC_002319基因在ESCC中的低表达可能与ESCC的发生密切相关,且其启动子区甲基化可能是导致其表达沉默的机制之一。

长链非编码RNA XLOC_005009对食管鳞状细胞癌生物学特性的影响

目的:探讨长链非编码RNA XLOC_005009基因对食管鳞状细胞癌(ESCC)的体外增殖、迁移、侵袭和细胞周期与细胞凋亡等生物学特性的影响。方法:收集2015-2016年河北医科大学第四医院肿瘤研究所57例ESCC患者手术切除的癌组织及癌旁组织标本。应用实时荧光定量PCR检测XLOC_005009基因在人ESCC细胞系Eca109、Kyse170与ESCC组织及其癌旁组织的表达,构建pc DNA3.1-XLOC_005009过表达质粒并转染Eca109、Kyse170细胞,应用MTS法、克隆形成实验、划痕实验、Transwell小室、流式细胞术分别检测转染前后细胞增殖、克隆形成、迁移、侵袭、细胞周期与凋亡的变化。结果:XLOC_005009 m RNA在食管癌组织中的表达明显低于癌旁组织(0.06±0.06 vs 0.21±0.19,P<0.05),且食管癌细胞XLOC_005009 m RNA表达亦均低于对照组(P<0.05)。转染过表达质粒的Eca109和Kyse170细胞XLOC_005009基因表达显著高于对照组(Eca109细胞:039±0.17 vs0.02±0.00;Kyse170细胞:0.35±0.08 vs 0.01±0.01,均P<0.05)。与对照组相比,XLOC_005009基因过表达Eca109和Kyse170细胞增殖能力细胞显著减弱(P<0.05);克隆形成率显著减少(P<0.05);穿膜细胞数显著减少[Eca109细胞:(146.40±34.47)vs(193.00±26.33);Kyse170细胞:(157.80±32.51)vs(269.00±29.89),均P<0.05];Eca109细胞迁移率无显著变化,Kyse170细胞迁移率明显减小(P<0.05);S期细胞比例增加,细胞凋亡影响不明显。结论:XLOC_005009低表达与食管癌的发生发展密切相关,XLOC_005009过表达可抑制食管癌细胞的体外增殖、侵袭与迁移能力。

知母皂苷B-Ⅱ通过调控LncRNA XLOC_032768减轻LPS诱导心肌细胞损伤

目的探讨知母皂苷B-Ⅱ是否通过调控长链非编码RNA XLOC032768(LncRNA XLOC032768)而影响LPS诱导心肌细胞凋亡、氧化应激及炎症反应。方法体外培养大鼠心肌细胞H9C2,使用LPS处理细胞建立损伤模型,采用不同浓度的知母皂苷B-Ⅱ处理细胞,同时分别将si-NC、si-XLOC032768转移至H9C2细胞,随后使用LPS与知母皂苷B-Ⅱ处理,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用硫代巴比妥酸法检测MDA水平,采用黄嘌呤氧化酶法检测SOD的活性,采用5,5′-二硫代双(2-硝基苯甲酸)比色法检测GSH-Px的活性,采用硝酸还原法检测NO水平,采用ELISA法检测TNF-α、PGE2水平,RT-qPCR检测XLOC032768的表达,Western blot法检测Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达。结果与对照组比较,模型组凋亡率与Bax、cleaved caspase-3蛋白表达及MDA、NO、TNF-α、PGE2水平升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达及GSH-Px、SOD的活性降低(P<0.05),XLOC032768的表达降低(P<0.05);与模型组比较,低、中、高剂量知母皂苷B-Ⅱ组凋亡率与Bax、cleaved caspase-3蛋白表达及MDA、NO、TNF-α、PGE2水平降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达及GSH-Px、SOD的活性升高(P<0.05),XLOC032768的表达升高(P<0.05);干扰XLOC032768表达可降低知母皂苷B-Ⅱ对LPS诱导心肌细胞凋亡、氧化应激及炎症反应的作用。结论知母皂苷B-Ⅱ可通过上调XLOC032768的表达而抑制LPS诱导心肌细胞凋亡、氧化应激及炎症反应从而减轻心肌细胞损伤。

长链非编码RNA XLOC_009038促进食管鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的观察长链非编码RNA XLOC_009038对食管鳞状细胞癌EC109、EC9706细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭等生物学特性的影响并探讨其作用机制。方法构建XLOC_009038干扰质粒转染食管鳞癌EC109、EC9706细胞,使XLOC_009038基因表达下调。应用MTT比色法、克隆形成实验观察基因下调前后细胞增殖、克隆能力的变化;流式细胞技术检测细胞凋亡情况;Transwell测定转染前后细胞迁移及侵袭能力的变化;Western blot检测转染前后细胞内procaspase3蛋白表达量。结果两株细胞中实验组XLOC_009038基因表达明显低于对照组(P <0.001)。XLOC_009038基因表达下调后EC109、EC9706细胞的克隆、增殖能力均明显降低(P <0.05);与对照组相比实验组细胞的迁移及侵袭能力明显减弱(P <0.001);流式细胞技术显示下调XLOC_009038后EC109、EC9706两实验组细胞晚期凋亡率增高(P <0.001);Western blot显示干扰XLOC_009038后两种细胞的实验组procaspase3表达量增加(P=0.013;P <0.001)。结论 XLOC_009038与食管鳞癌的发生发展密切相关,XLOC_009038过表达可能通过抑制procaspase3来调控食管鳞癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力。

LncRNA XLOC_109948在急性髓系白血病患者中的表达变化及临床意义

目的:检测急性髓系白血病(AML)患者骨髓和血清中LncRNA XLOC_109948的表达水平并验证二者表达的一致性。同时探讨LncRNA XLOC_109948表达变化在AML发生、发展中的临床意义。方法:收集62例AML患者的骨髓组织和静脉血样本,其中36例为AML患者,26例为完全缓解的AML患者(AML-CR组)。同时收集20例健康体检者的静脉血,设为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LncRNA XLOC_109948表达水平,分析其表达水平与临床特征的关系。结果:AML组患者骨髓及血清中LncRNA XLOC_109948表达量均高于AML-CR组和对照组(P<0.001)。而其在AML-CR组和对照组2者之间表达差异无统计学意义(P>0.05)。LncRNA XLOC_109948的表达水平在化疗缓解时明显下调,复发时明显上调,且均具有统计学意义(P<0.05)。LncRNA XLOC_109948的表达与细胞遗传学临床病理参数显著相关(P<0.05),但与性别、年龄、WBC计数、骨髓blast、FAB亚型等临床特征无相关性(P>0.05)。结论:AML患者骨髓和血清中LncRNA XLOC_109948呈高表达,且两者表达时序性一致。其表达变化可反映AML发生发展、化疗效果及预后的判断。

长链非编码RNA XLOC_002319在贲门腺癌中的表达及其甲基化状态

[目的]检测贲门腺癌(GCA)中长链非编码RNA XLOC_002319(lncRNA XLOC_002319)的表达及其甲基化状态,探讨XLOC_002319在贲门腺癌发生发展中的作用。[方法]分别应用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)以及甲基化特异性PCR(MSP)检测贲门腺癌组织、癌旁不典型增生组织及癌旁正常组织中XLOC_002319的表达和甲基化状态。[结果]XLOC_002319在贲门腺癌组织和癌旁不典型增生组织中的表达显著低于癌旁正常组织(P<0.01),并且在贲门腺癌组织中XLOC_002319的表达与组织学分化程度、淋巴结转移和TNM分期密切相关(P<0.05)。贲门腺癌组织中XLOC_002319的启动子区甲基化率(61.54%)和癌旁不典型增生组织甲基化率(54.84%)显著高于癌旁正常组织(17.95%)(P<0.01),并且贲门腺癌组织中XLOC_002319的启动子区甲基化率与组织学分化程度、淋巴结转移和TNM分期密切相关(P<0.05)。发生XLOC_002319甲基化的贲门腺癌组织中XLOC_002319的表达显著低于未发生甲基化的贲门腺癌组织(0.217±0.074 vs 0.253±0.060,P<0.05)。[结论]XLOC_002319在贲门腺癌中的异常低表达可能与贲门腺癌的发生密切相关,且其启动子区甲基化可能是导致其表达沉默的机制之一。