基因表达谱芯片技术筛选XTP4基因转染细胞差异表达基因

目的 应用基因芯片技术,检测乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBxAg)反式激活基因XTP4的表达对肝母细胞瘤细胞系HepG2基因表达谱的影响,进一步阐明XTP4蛋白可能的分子生物学功能。方法 设计并合成XTP4基因序列特异性的引物,应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增XTP4基因片段,以常规的分子生物学技术将获得的XTP4编码基因片段克隆到TA载体中进行核苷酸序列的测定,构建真核表达载体pcDNA3.1(-)-XTP4。以脂质体转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,提取mRNA,逆转录为cDNA,与转染空表达载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞进行cDNA芯片分析。结果 构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定,证实准确无误。提取高质量的mRNA,逆转录为cDNA,进行cDNA芯片分析。在1152个基因表达谱的筛选中,发现有21个基因表达水平显著上调,38个基因表达水平显著下调。结论 应用基因表达谱芯片成功筛选了XTP4转染细胞后差异表达基因,为进一步阐明XTP4蛋白可能的生物学功能提供依据。

HBX蛋白反式激活基因XTP4抑制HepG2细胞凋亡

目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBXAg)反式激活基因4(XTP4)对肝母细胞瘤细胞HepG2细胞凋亡的影响。方法构建XTP4基因的真核表达质粒pc DNA3.1/myc-His(-)A-XTP4(p XTP4)及化学合成XTP4基因的干扰RNA(si XTP4)后,分别将XTP4基因的真核表达质粒、干扰RNA及各自的阴性对照(NC、si NC)瞬时转染HepG2细胞中,48 h后进行以下实验:用Western blot验证XTP4在蛋白水平的过表达和干扰表达;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白水平并计算Bcl-2/Bax比值;化学发光法检测胱冬肽酶-3(caspase-3)的活性。结果成功构建了XTP4的真核表达质粒p XTP4、XTP4在蛋白水平过表达和干扰表达。与各自的阴性对照组相比,过表达XTP4的HepG2细胞中,Annexin V+细胞数显著减少(P<0.05),Bcl-2/Bax比值增高(P<0.05),胱冬肽酶-3活性下降(P<0.05);而干扰XTP4表达的HepG2细胞中,Annexin V+细胞数显著增加(P<0.05),Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05),胱冬肽酶-3活性上升(P<0.05)。结论 XTP4具有抑制HepG2细胞凋亡的作用,可能是通过增加Bcl-2/Bax的比值实现。

乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP4与肿瘤发生发展的关系

乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP4是近年来发现的与肿瘤发生发展相关的新基因。众多研究显示XTP4基因表达异常与乳腺癌、前列腺癌、胃癌、结直肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌和肝细胞肝癌等肿瘤密切相关。XTP4基因在肿瘤过度增殖和转移侵袭、肿瘤分级与分期以及化疗耐药等过程中发挥作用。本文将对XTP4基因的结构、功能以及与肿瘤发生发展的关系进行综述,以利于后期对其功能进行深入研究。

乙型肝炎病毒反式激活因子XTP4促进肝癌细胞系迁移和侵袭

目的探讨在肝癌细胞系Hep G2中过表达或干扰XTP4表达对细胞迁移和侵袭能力的影响。方法实验分对照组、过表达组和干扰组,将构建成功的XTP4质粒和化学合成的XTP4小干扰RNA(siRNA)瞬时转染入Hep G2,培养48 h后,实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和蛋白印迹(Western blot)检测细胞内XTP4 mRNA和蛋白表达; Snail和NF-κB以及上皮间质转化(EMT)相关分子的表达。并通过细胞划痕愈合实验、Transwell迁移侵袭实验观察细胞迁移侵袭能力。结果成功重培养并提取出XTP4质粒;过表达组XTP4的转录水平和翻译水平均明显高于对照组(P<0. 05);迁移和侵袭能力明显增加(P<0. 05);下游分子NF-κB、Snail和MMP-9表达均增加(P<0. 05);干扰组XTP4的转录水平和翻译水平较对照组均明显降低(P<0. 05);迁移和侵袭能力也明显降低(P<0. 05);NF-κB、Snail和MMP-9表达减少(P<0. 05)。结论乙型肝炎病毒反式激活因子XTP4可促进Hep G2迁移和侵袭,与NF-κB、Snail和MMP-9调节相关,EMT相关分子E-cadherin、N-cadherin可能参与其中。