人类HBxAg蛋白反式激活基因5的原核表达及其蛋白纯化

为了更深入研究XTP5蛋白(也称人类次要组织相容性抗原(mHA-8))的生物学功能,以HepG2细胞总RNA为模板、应用RT-PCR技术获得XTP5基因,再利用基因工程技术对其进行克隆和原核重组表达载体构建和诱导表达,成功克隆XTP5基因,并成功构建原核重组表达空载体pET-32a(+)-XTP5;阳性重组质粒转化大肠杆菌E.coliBL21后,在37℃经终浓度1 mmoL/L IPTG诱导5 h后,受体菌大量表达76.88 ku XTP5重组蛋白;West-ern-blot证实宿主菌表达的蛋白特异性好;肝素亲和层析柱纯化表达产物XTP5蛋白效果良好。结果表明,成功克隆了人类XTP5基因,并获得纯度较高的融合蛋白XTP5。

HBxAg蛋白反式激活基因5的生物信息学分析及真核表达载体的构建

目的对HBxAg蛋白反式激活基因5(XTP5)进行生物信息学分析,并构建其真核表达载体。方法利用生物信息学软件对XTP5基因进行CpG岛、启动子活性、转录终止信号和氨基酸的一、二级结构以及信号肽、跨膜特性和功能基序进行预测。构建XTP5基因的真核表达载体pcDNA3.1-XTP5和pGBKT7-XTP5。结果生物信息学分析发现XTP5基因有200bp左右的CpG岛,有高启动子活性序列、转录终止信号位点,二级结构以Helix为主,存在信号肽的概率为0.0000A,无跨膜区域信号,存在数个功能基序。成功构建了XTP5基因的真核表达载体pcDNA3.1-XTP5和pGBKT7-XTP5。结论为深入研究XTP5结构和功能、进一步探讨乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)发病机制创造了条件。