应用XTT法检测白细胞介素-Ⅱ的生物学活性

应用XTT比色法检测IL 2的生物学活性并与MTT法和3H掺入法进行比较 ,结果XTT法较上述方法简便易行 ,结果稳定 。

XTT减低法检测法尼醇对白念珠菌生物被膜的抑制作用

目的：体外研究法尼醇对白念珠菌生物被膜的抑制作用。方法：采用微量平板法制备12和24 h白念株菌生物被膜，每组膜分别加入不同浓度法尼醇（100～900μmol/L）培养24 h，甲基四氮盐（XTT）减低法检测法尼醇对白念珠菌生物被膜的抑制作用效果，倒置显微镜下观察生物被膜形态。结果：不同浓度的法尼醇对白念珠菌生物被膜均有抑制作用（P＜0．05），法尼醇浓度增加，抑制强度呈上升趋势。培养12 h，抑制白念株菌生物被膜50％活性的最低药物浓度（sessile minimal inhibitory concentration 50％，SMIC50）为600μmol/L；培养24 h，SMIC50为200μmol/L。结论：法尼醇对白念珠菌生物被膜生长具有明显抑制作用。法尼醇对白念珠菌生物被膜抑制强度与法尼醇浓度和生物被膜时相相关，高浓度法尼醇的抑制效果高于低浓度法尼醇。

两种检测方法评价厚朴对白念珠菌黏附的影响

白念珠菌是人体常见的机会致病性真菌,可存在于正常人口腔、上呼吸道、肠道及阴道,易在义齿、人工插管如尿道插管、气管插管等植入性设备表面定植并进一步形成生物膜。生物膜的形成可保护菌体免受药物的杀伤和免疫系统的攻击。黏附是生物膜成膜的关键,也是白念珠菌致病的关键步骤[1]。本实验拟通过结晶紫法与XTT法观察中药厚朴对白念珠菌黏附的影响,并对两种检测方法进行评价。

一次性使用输液类产品所用不同材质细胞毒性试验方法的比较

目的:比较三种常用的细胞毒性的检测方法。方法:以L-929细胞为观察对象,对不同厂家的一次性使用输液类4种原料的浸提液进行细胞毒性研究,比较不同材料浸提液对细胞增殖度的影响,分析比较MTT法、XTT法和显微观察法三种不同测定方法的差异。结果:通过三种测定方法试验研究,不同厂家4种原料表现出对L-929细胞不同的细胞毒性,均呈现较高的细胞增殖度,无细胞毒性。结论:与显微观察法相比,MTT法和XTT法由于实际检测所需的细胞量相对较少、试验步骤相对简便、检测周期短,因此具有一定的优越性,值得推荐作为细胞毒性检测方法;XTT试剂盒成本较高,但其灵敏度更高,操作更简单。

法尼醇对白念珠菌和粪肠球菌混合生物膜体外抑制作用的研究

目的探讨法尼醇对白念珠菌和粪肠球菌混合生物膜的抑制作用。方法采用微量平板法制备24 h和48 h白念珠菌和粪肠球菌混合生物膜,每组膜分别加入不同浓度法尼醇(100~800μmol/L)培养24 h, XTT减低法检测法尼醇对白念珠菌和粪肠球菌混合生物膜的抑制作用,倒置显微镜下观察混合生物膜形态,激光共聚焦显微镜下观察法尼醇对白念珠菌和粪肠球菌混合生物膜的抑菌效果。结果法尼醇对白念珠菌和粪肠球菌混合生物膜有抑制作用,随着法尼醇浓度的增加,抑制作用呈上升趋势。培养24 h,抑制混合生物膜50%活性的法尼醇最低药物浓度(sessile minimum inhibitory concentration 50%,SMIC50)为150μmol/L;培养48 h,抑制混合生物膜50%活性的法尼醇SMIC50为200μmol/L。结论法尼醇对白念珠菌和粪肠球菌混合生物膜生长具有明显抑制作用。法尼醇对白念珠菌和粪肠球菌的混合生物膜抑制强度与法尼醇浓度和生物膜时相相关,高浓度法尼醇的抑制效果高于低浓度法尼醇。

昆明山海棠总生物碱体外抗肿瘤作用的研究

目的:探讨昆明山海棠(THH)总生物碱对10种不同肿瘤细胞系的抑制作用,并筛选出最敏感的肿瘤细胞系。方法:采用XTT法和SRB法对THH总生物碱体外抗肿瘤作用进行初步筛选。结果:THH总生物碱对10种不同肿瘤细胞系生长均有明显的抑制作用,而且对不同肿瘤细胞系抑制作用存显著差异和选择性。尤其是对人T细胞白血病细胞系MOLT-4、人T淋巴母细胞白血病细胞系Jurkat、小鼠黑色素瘤细胞系B16-F10、人结肠腺癌细胞系SW-480抑制率均>80%,其对应的IC50分别为13.59,24.10,30.05,31.39mg·L-1。结论:THH总生物碱体外具有广泛,高效的抗肿瘤活性,可进一步探讨其作为抗肿瘤药物研究开发的价值。

极低密度脂蛋白对大鼠系膜细胞增殖及P42活化蛋白激酶活性的影响

目的:研究极低密度脂蛋白(VLDL)对SD大鼠系膜细胞(MCs)的促增生作用以及VLDL对MCs P42有丝分裂原活化的蛋白激酶(P42 MAPK)活性的影响.探讨P42 MAPK介导的细胞内信号转导途径在上述系膜细胞增生中的作用.方法:采用XTT法测定不同时间、不同浓度VLDL对MCs的促增生作用,借助流式细胞术观察细胞凋亡情况以了解VLDL对MCs是否具有毒性作用;通过同位素标记法测定MCs P42 MAPK活性;观察P42 MAPK抑制剂PD98059抑制该激酶后MCs的增生情况以及激酶活性变化.结果:①不同浓度VLDL(10～500μg/m1)、不同时间(6～48h)与XTT光密度(AD)值呈线性关系[r分别为0.911(P＜.01、0.651 P＜0.05)].当VLDL浓度达1000μg/ml时,MCs出现凋亡;②VLDL可以以剂量关系(10～1000μg/ml)促进MCs的P42 MAPK活性(r=.872,P＜0.05);随VLDL刺激时间延长,P42 MAPK活性增加,但不呈线性关系,分别在30 min、6h、48 h出现波峰[分别为(118.67±6.43)cpm/k、(140.50±17.68)cpm/k与(128±5.66)cpm/k];③PD98059抑制了P42 MAPK后,P42 MAPK活性显著降低;不同浓度、不同时间VLDL刺激MCs后的XTTAD值也显著降低.结论:①在一定浓度内(10～500μg/ml)VLDL可以以浓度、剂量依赖性的关系促进MCs的增生,但高浓度则可促进细胞凋亡,具有毒性作用;②VLDL可以活化P42MAPK;③VLDL可以通过P42 MAPK途径介导促进MCs增生,而且可能是仅通过该激酶途径介导促进MCs增生.

数控剪应力微流装置评价新加达原散对MRSA生物膜的影响

目的:通过XTT法和微流体系统观察评价新加达原散对耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌标准菌株生物膜内细菌数量生物膜形成的影响作用。方法:1)XTT法观测空白组、万古霉素组及新加达原散组(水提取、醇提取)对MRSA标准菌株生物膜成熟期膜内活菌的影响。2)Bioflux200系统中接种MRSA菌至观察区,细菌生物膜形成后分别在各进孔加入一定浓度的新加达原散水提物、醇提物及万古霉素,同时设立溶剂对照组和空白组。然后在0.5 dyne剪切力作用下连续培养30 h,观察各组生物膜的形成情况。结果:1)XTT法观测结果显示,新加达原散可明显减少形成期及成熟期MRSA生物膜膜内活菌数量。2)2种浓度新加达原散水提物、醇提物组生物膜形成面积明显减少,空白组、溶剂对照组生物膜面积增大,万古霉素组生物膜形成面积较前减少,但无新加达原散2组明显。结论:新加达原散减少了MRSA生物膜膜内细菌数量。在流动状态下,一定浓度新加达原散在剪切力的作用下可抑制MRSA生物膜的形成;Bioflux200可以用于抑制细菌耐药中药的疗效评价。

可溶性噻唑盐WST-8用于重组人白细胞介素-2的生物学活性测定

运用新型测定活细胞个数的化学物质,建立一种快速测定重组人白细胞介素-2生物学活性的方法.活细胞代谢过程中,胞内的可溶性噻唑盐WST-8在电子载体1-Methoxy PMS存在时被还原成可溶性甲臢染料,甲臢染料可在A45Onm处产生吸收值,根据其吸收值的大小间接检测活细胞个数从而测定待检测样品中IL-2的浓度水平.相关性实验结果证明,在细胞浓度1250～160000个/孔范围内,CTLL-2活细胞个数与A45O值之间呈线性相关;用此种新方法检测的白细胞介素-2(IL-2)生物学活性结果与MTT法及XTT法结果基本一致,相关系数分别为r=0.9602和r=0.9511.因此, WST-8法适用于悬浮依赖型细胞CTLL-2为基础的IL-2生物学活性检测,且具有经济、实用、简便、易行的特点,有较好的实际应用价值.

不同浓度大蒜素溶液对奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌N2分离株生物被膜的影响

为了研究不同浓度的大蒜素溶液对金黄色葡萄球菌的抑制作用,试验采用XTT法检测了不同浓度大蒜素(512,256,128,64,32,16,8,4,2,1μg/mL)处理对不同生长时间的金黄色葡萄球菌N2分离株生物被膜的影响。结果表明:大蒜素浓度与OD450值呈反比。512μg/mL浓度大蒜素作用于金黄色葡萄球菌N2菌株后测得的OD450值均<0.1,表现为对生物被膜的强烈抑制作用;256,128,64,32,16,8,4μg/mL浓度大蒜素作用于金黄色葡萄球菌N2菌株后测得的OD450值均≥0.1~≤0.4,表现为对生物被膜的明显抑制作用;2,1μg/mL浓度的大蒜素作用于金黄色葡萄球菌N2菌株后测得的OD450值均>0.4,表现为对生物被膜的微弱抑制作用。说明大蒜素浓度是影响金黄色葡萄球菌N2分离菌生物被膜的主要因素,大蒜素浓度为512μg/mL时呈现明显的杀菌作用。

白色念珠菌生物膜形成的定量分析和形态学观察

目的:XTT法定量分析并在激光共聚焦显微镜和荧光显微镜下观察白色念珠菌生物膜的动态形成过程。方法:经过血清处理的灭菌玻片在六孔板中形成生物膜,经过荧光染色后在荧光显微镜和激光共聚焦显微镜下,动态观察生物膜的形成过程,并利用XTT减低法定量分析生物膜的形成过程。结果:形态学和定量分析都表明,白色念珠菌可以在玻片上形成典型的、成熟的生物膜结构,形成过程经过了几个明显的阶段。结论:白色念珠菌形成的生物膜具备典型的微生物生物膜结构。

问号钩端螺旋体毒力基因mviN的表达及细胞毒性作用研究

目的克隆表达问号钩端螺旋体毒力基因mviN并观察表达产物对血管内皮细胞ECV304及肺上皮细胞A549的毒性作用。方法将mviN基因插入原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET-mviN,转化大肠杆菌BL21(DH3)以高效表达携带组氨酸标签的Trx-MviN融合蛋白,并作亲和层析纯化。以XTT法检测毒力蛋白Trx-MviN对ECV304及A549细胞增殖的抑制作用,同时以流式细胞术检测其作用于ECV304及A549后的细胞凋亡率。结果成功构建了重组质粒pET-mviN并高效表达出Trx-MviN融合蛋白;毒力蛋白Trx-MviN作用于ECV304及A549后,与对照组相比较,其细胞增殖被显著抑制(P<0.05),而细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论重组质粒pET-mviN高效表达出Trx-MviN融合蛋白,纯化后的融合蛋白Trx-MviN对ECV304及A549具有细胞毒性作用。

胞外DNA在根管白色念珠菌生物膜中作用的研究

目的动态观察根管内白色念珠菌生物膜形成过程,通过DNaseⅠ对生物膜形成的影响,研究胞外DNA在根管内白色念珠菌生物膜形成过程中的作用。方法在2.0cm2载玻片上形成白色念珠菌生物膜,并在生物膜形成至不同时间用DNaseⅠ处理,AO/EB染色,极光共聚焦显微镜观察生物膜的形态变化,并用XTT减低法定量分析DNaseⅠ作用前后生物膜内细胞的生长活性。结果DNaseⅠ对根管内白色念珠菌生物膜形成有抑制作用。结论胞外DNA在根管内白色念珠菌生物膜形成过程中有着重要的作用。

白色念珠菌生物膜生长动力学分析和形态学观察

【目的】了解白色念珠菌生物膜生长动力学特点及白念菌生物膜的动态形成过程。【方法】白色念珠菌菌株Ca40在经过血清处理的灭菌血盖片上形成生物膜,经过结晶紫染色后在连电脑光学显微镜下,动态观察生物膜的形成过程,采用甲基四氮盐(tetrazolium salt,XTT)减低法测定生物膜生长动力学。【结果】白色念珠菌可以在血盖片上形成典型的、成熟的生物膜结构,其形成过程有早期、中期、晚期3个阶段。白念菌生物膜活性随培养时间延长而增加,48 h后代谢活性相对稳定。【结论】白色念珠菌生物膜具有三维立体空间结构,其结构具有多样、不均质、开放的特点。

成熟生物膜与白假丝酵母菌耐药性相关

目的观察白假丝酵母菌生物膜形成过程中耐药性产生的变化情况。方法利用载玻片法形成白假丝酵母菌生物膜结构,倒置显微镜观察不同阶段的生物膜形态,用美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）微量稀释法检测浮游状态白假丝酵母菌耐药性,用二甲氧唑黄（XTT）减低法获得生物膜耐药性的变化情况。结果白假丝酵母菌耐药性随着生物膜的成熟不断增强,比游离态菌高100倍以上。结论成熟生物膜与耐药性增强有明显正相关性。

不同种动物血液及其浓度对奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌分离株N_2生物被膜形成的影响

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌生物被膜的形成受许多物质及其同一种物质不同浓度添加的影响。本研究以乳房炎金黄色葡萄球菌分离株N_2为研究对象,采用XTT法研究不同浓度的羊血、鸡血和驴血对金黄色葡萄球菌分离株N_2生物被膜的影响。结果表明,羊血对生物被膜形成的促进作用最大,鸡血次之,驴血反而抑制生物被膜的形成;羊血、鸡血的浓度梯度范围在3%~5%内对金黄色葡萄球菌分离株N_2的生物被膜形成的促进作用最强,在低于该浓度范围时对生物被膜的形成呈抑制作用。综上所述,不同种类动物的血液以及同一种动物的不同浓度血液都会对金黄色葡萄球菌分离株N_2生物被膜的形成产生较大影响。

中药五倍子对白色念珠菌生物膜影响的体外研究

目的:比较五倍子水煎液、氢氧化钙和洗必泰三种根管消毒药物对白色念珠菌生物膜作用效果。方法:在96孔培养板底形成白色念珠菌生物膜,用XTT减低法定量分析生物膜形成过程及三种药物抑制生物膜内细胞生长80%的药物浓度。结果:48h细胞代谢水平最高,细胞活力及耐药性随培养时间延长而增强。结论:白色念珠菌生物膜对氢氧化钙耐药,对洗必泰敏感,五倍子对白色念珠菌生物膜初期阶段具有抑制作用。

阿司匹林对木糖葡萄球菌体外生物被膜的作用

通过阿司匹林对木糖葡萄球菌生物被膜干预作用的研究,为木糖葡萄球菌生物被膜的治疗提供理论参考。通过结晶紫染色法(CV)、XTT分析法和激光共聚焦显微镜方法研究阿司匹林对木糖葡萄球菌生物被膜的作用及生物被膜下活菌和死菌的分布情况。结果显示,阿司匹林对木糖葡萄球菌有抑菌作用并且对其生物被膜的干预作用显著。