健脾益气方干预内质网应激IRE1α-XBP1通路诱导腹膜间皮细胞自噬防治PF的机制

目的 研究健脾益气方通过干预腹膜透析(PD)大鼠内质网应激IRE1α-XBP1通路,诱导自噬以减轻腹膜间皮细胞(PMC)上皮间充质转化(EMT)的作用及机制。方法 SD大鼠72只,采用5/6肾切除联合腹膜透析液制备腹膜纤维化(PF)模型,随机分为假手术组、模型组、西药组、中药高、中、低剂量组,每组12只,进行28 d药物干预。苏木素-伊红(HE)染色观察腹膜组织形态学改变,免疫组化、Western印迹及RT-聚合酶链反应(PCR)测定IRE1α-XBP1通路自噬及纤维化标志蛋白表达。结果 与模型组比较,假手术组、西药组、中药高、中、低剂量组葡萄糖调节蛋白(GRP)78、XBP1s、微管相关蛋白1轻链(LC)3-Ⅱ、自噬相关蛋白Beclin-1、E-钙黏蛋白(cadherin)、α-肌动蛋白(SMA) mRNA及蛋白、pIRE1α蛋白表达差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 健脾益气方能够通过干预内质网应激通路IRE1α-XBP1诱导PMC自噬,激活其适应性保护作用,达到减轻PMC的EMT、改善腹膜功能,最终起到拮抗PF作用。

IRE1α/Xbp1s靶向调控NKp46改善NK细胞杀伤功能清除HIV感染细胞的思路探析

自然杀伤细胞的杀伤活性无MHC限制,不依赖抗体,是抵御肿瘤和病毒感染的第一道防线。肿瘤或慢性病毒感染后,固有免疫NK细胞与适应性免疫T细胞共同发挥免疫功能对抗肿瘤及感染,但由于免疫系统无法迅速根除病灶,免疫细胞内质网稳态被打破,使其无法发挥正常的免疫杀伤及清除功能,导致病情迅速恶化甚至死亡。NKp46是仅表达在NK细胞上的特异性活化受体,它直接影响NK细胞的活化程度与杀伤作用的强弱。艾滋病是一种目前无法根治的慢性传染病之一,病毒持续感染引起NK细胞内质网应激,IRE1α/Xbp1s信号通路的启动导致NKp46蛋白翻译大部分被抑制,影响NK细胞活化发挥功能,因此基于IRE1α/Xbp1s靶向调控NKp46寻求改善NK细胞杀伤功能的新靶点成为研究的新思路。

XBP1及PD-L1在皮肤恶性黑色素瘤中的表达及其临床意义

目的:探讨X-box结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)及程序性死亡配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)在皮肤恶性黑色素瘤(cutaneous malignant melanoma,CMM)中的表达及其临床意义。方法:选取2017年1月至2023年7月宁夏医科大学总医院收治的53例CMM患者和56例色素痣患者,采用免疫组织化学染色法检测恶性黑色素瘤组织及色素痣组织XBP1及PD-L1表达水平,并分析XBP1及PD-L1表达水平与CMM患者临床特征的关系。应用Sperman分析XBP1及PD-L1在CMM中的相关性。结果:与色素痣组织相比,CMM组织XBP1及PD-L1的表达水平均显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。CMM患者XBP1表达水平升高与临床分期Ⅱ~Ⅳ期、肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltrating lymphocytes,TILs)分级2~3级有关(P<0.05),CMM患者PD-L1表达水平升高与原发灶溃疡、临床分期Ⅱ~Ⅳ期、Clark分级Ⅳ~Ⅴ级、TILs分级2~3级有关(P<0.05)。Sperman分析显示,XBP1及PD-L1在CMM中呈正相关(P<0.05)。结论:XBP1及PD-L1可作为CMM诊断及病情判断的分子标志物,且XBP1可能是通过调控PD-L1的表达,进而改变肿瘤微环境,影响CMM的发生发展。

CyPA和XBP1在糖尿病大鼠外周血和动脉组织中的表达

目的研究2型糖尿病大鼠中亲环蛋白A(cyclophilin A,CyPA)和X盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)的表达情况。方法建立1型糖尿病和2型糖尿病SD大鼠模型,同期饲养普通饮食和高脂饮食大鼠,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测4组大鼠CyPA和XBP1在外周血的表达情况,苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE染色)观察4组大鼠冠状动脉组织形态学改变,免疫组化法检测4组大鼠下肢股动脉组织CyPA和XBP1的表达情况。结果2型糖尿病大鼠血清CyPA表达水平较普食组、高脂喂养组和1型糖尿病组升高,差异有统计学意义(t分别为-7.626、3.677、5.040,P<0.01)。2型糖尿病组大鼠血清XBP1表达水平较普食组、高脂喂养组降低,差异有统计学意义(t分别为4.208、2.997,P分别为0.001、0.013),较1型糖尿病组降低,差异无统计学意义(t=1.843,P=0.084)。HE染色未见4组大鼠冠状动脉发生明显脂肪化改变。免疫组化法检测结果显示,CyPA在2型糖尿病组大鼠动脉组织中表达水平最高;XBP1在高脂喂养组大鼠动脉组织中表达水平最高,在2型糖尿病组大鼠动脉组织中表达水平最低。结论高糖、高脂环境与大鼠外周血和动脉组织CyPA和XBP1表达水平具有相关性,其中高糖、高脂联合作用的影响相较单纯高糖或单纯高脂环境强。

布雷菲德菌素A通过激活IRE1-XBP1信号通路增强顺铂诱导的人肺癌GLC-82细胞凋亡

长时间剧烈的内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)可启动ERS相关通路诱导细胞凋亡;而IREl-XBP1(肌醇需求蛋白1α-X盒结合蛋白1)为高度保守的ERS基本通路。它是最有前景的肿瘤治疗靶点之一。我们研究已证明,布雷菲德菌素A(brefeldin A,BFA)能增强顺铂(cisdichlorodiamine platinum,CDDP)的肺癌细胞杀伤作用,但其分子机制尚不清楚。本研究证明了IRE1-XBP1通路在该协同效应中的作用。Annexin V/PI双染结合流式细胞分析显示,与BFA或CDDP单独处理比较,BFA联合CDDP处理能增强人肺癌GLC-82细胞的凋亡。RT-q PCR和Western印迹揭示,与单独处理比较,BFA联合CDDP处理能增强GLC-82细胞的procaspase3转录本(mRNA)和蛋白质的表达,以及procaspase3的裂解激活,进一步证明了BFA联合CDDP处理可增强GLC-82细胞凋亡。最重要的是,RT-q PCR和Western印迹结果证明,与单独CDDP处理比较,BFA处理的GLC-82细胞中IRE1、XBP1水平明显上调(P<0.05),而BFA+CDDP处理的细胞中IRE1、XBP1水平进一步上调,超过BFA组(P<0.01)。结果提示BFA和BFA+CDDP处理细胞可激活ERS的IRE1-XBP1通路。这些结果证明,BFA可通过激活ERS中的IRE1-XBP1通路增强顺铂诱导的肿瘤细胞凋亡。本研究结果为IREl-XBP1是颇具前景的肿瘤治疗靶点提供了新的证据。

醒鼻凝胶滴鼻剂对于变应性鼻炎豚鼠鼻腔、支气管肺泡灌洗液IL-4、IL-13、TGF-β和鼻黏膜及肺组织XBP1的影响

目的观察醒鼻凝胶滴鼻剂对变应性鼻炎豚鼠上下气道相关的鼻腔灌洗液、支气管肺泡灌洗液白介素4(IL-4)、白介素13(IL-13)、转化生长因子-β(TGF-β)的影响,鼻黏膜及肺组织X盒结合蛋白1(XBP1)的影响,及肺组织炎症情况。方法健康普通级豚鼠60只,适应性喂养1周后,以卵清白蛋白(OVA)致敏、激发建立变应性鼻炎豚鼠模型,采用简单数字和分层随机法随机分为6组,分别为正常对照组、模型组、醒鼻凝胶滴鼻剂6.88 mg/kg剂量组、醒鼻凝胶滴鼻剂13.76 mg/kg剂量组、醒鼻凝胶滴鼻剂27.52 mg/kg剂量组、雷诺考特组;10只/组。并于造模第16天开始给药。采用ELISA检测鼻腔灌洗液、支气管肺泡灌洗液IL-4、IL-13、TGF-β;用RT-PCR检测鼻黏膜及肺组织XBP1 mRNA;用HE染色评价肺组织炎症情况。结果与正常对照组比较,模型组鼻腔灌洗液、支气管肺泡灌洗液及鼻黏膜、肺组织XBP1 mRNA指标明显升高(P<0.01);与模型组比较,醒鼻凝胶滴鼻剂6.88 mg/kg剂量组、13.76 mg/kg剂量组、27.52 mg/kg剂量组及雷诺考特组鼻腔灌洗液、支气管肺泡灌洗液的IL-4、IL-13、TGF-β,鼻黏膜的XBP1 mRNA指标明显降低(P<0.01);醒鼻凝胶滴鼻剂6.88 mg/kg剂量组、27.52 mg/kg剂量组,雷诺考特组及肺组织的XBP1 mRNA指标降低明显(P<0.01)。HE染色显示,与正常对照组比较,模型组豚鼠肺组织气道血管周围炎症细胞浸润明显;与模型组比较,醒鼻凝胶滴鼻剂干预后,醒鼻凝胶滴鼻剂6.88 mg/kg剂量组、13.76 mg/kg剂量组、27.52 mg/kg剂量组肺组织气道血管周围炎症细胞浸润减轻。结论醒鼻凝胶滴鼻剂可通过下调上气道包括鼻腔灌洗液、鼻黏膜等相关炎症因子的表达,减轻豚鼠鼻炎模型肺组织气道血管周围炎症,发挥治疗变应性鼻炎的作用,并能在一定程度上下调下气道相关的支气管肺泡灌洗液及肺组织相关炎症因子的表达,为醒鼻凝胶滴鼻剂在上下气道的变态反应性Th1/Th2细胞因子的作用机制研究提供了一定的实验参考数据。

心衰Ⅰ号联合贝那普利对慢性心力衰竭大鼠心功能、CHOP、GRP78和XBP1的影响

目的:考察心衰Ⅰ号联合贝那普利对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心功能和糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及X盒结合蛋白(XBP1)的影响。方法:将CHF模型大鼠分5组:模型组、心衰Ⅰ号组、贝那普利组、心衰I号+贝那普利组(联合组),并设假手术组,各组连续给药28 d。记录大鼠体征、死亡、心功能情况,测定心肌组织CHOP、GRP78、XBP1表达,血清丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平。结果:无死亡大鼠。与假手术组比较,模型组大鼠SBP、DBP、CO、LVSP、±dp/dtmax及血清SOD显著降低(P<0.05),心肺指数、LVEDP、血清MDA水平及心脏CHOP、GRP78、XBP1蛋白表达显著升高(P<0.05)。各给药组上述指标不同程度改善,以联合用药组效果最佳(P<0.05)。结论:心衰Ⅰ号联合贝那普利可改善CHF大鼠的心功能,降低心肌CHOP、GRP78及XBP1蛋白表达,降低血清MDA含量并升高SOD活性,提示心衰Ⅰ号通过抑制ERS介导的信号通路达到抑制心肌细胞凋亡的目的。

应用抑制性消减杂交技术筛选HBxAg蛋白结合蛋白XBP1的上调基因

目的应用酵母双杂交及生物信息学(bioinformatics)技术获得HBxAg蛋白结合蛋白XBP1,为了解该基因的反式调节机制,利用抑制性消减杂交技术筛选并克隆XBP1蛋白反式激活的靶基因。方法以XBP1表达质粒pcD-NA3.1(-)-myc-his(A)-XBP1转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)-myc-his(A)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并合成cDNA,经RsaⅠ酶切后将实验组cDNA分成两组,分别衔接两种不同接头,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次PCR反应,产物与T/A克隆载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆经PCR鉴定后进行测序及同源性分析。结果成功构建人XBP1蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA。扩增后得到80个200～1 000bp插入片段的克隆,随机挑选其中30个插入片段测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得28个已知编码序列基因和2个未知的新基因。结论 XBP1在肝细胞内表达后能够上调HepG2细胞中许多不同基因表达的变化,这些基因与细胞信号转导、细胞增殖与分化、免疫应答、能量代谢、细胞凋亡、肿瘤发生等生物过程密切相关。

miR-135b-5p通过靶向下调XBP1增强MCF-7/DOXR细胞对阿霉素敏感性的机制

目的探讨miR-135b-5p通过调控X盒结合蛋白(XBP1)对MCF-7/DOXR细胞阿霉素敏感性的机制。方法采用Westernblot检测XBP1的表达水平;RT-qPCR法检测XBP1 mRNA在乳腺癌细胞MCF-7和乳腺癌阿霉素耐药MCF-7/DOXR细胞中的表达水平以及miR-135b-5p的表达水平;CCK-8检测MCF-7/DOXR细胞的增殖情况;Annexin-V-FITC双染流式细胞术检测MCF-7/DOXR细胞的凋亡情况;双荧光素酶报告基因验证miR-135b-5p与XBP1的调控关系。结果XBP1在乳腺癌细胞MCF-7和MCF-7/DOXR细胞中均高表达(P<0.05),敲降XBP1可显著抑制MCF-7/DOXR细胞增殖并促进了细胞凋亡(P<0.05)。双荧光素酶报告基因证实,XBP1是miR-135b-5p的潜在靶基因,miR-135b-5p靶向下调XBP1的表达水平(P<0.05)。实验进一步证实,过表达miR-135b-5p下调XBP1进而显著抑制MCF-7/DOXR细胞增殖并诱导细胞凋亡(P<0.05)。结论miR-135b-5p通过下调XBP1增强MCF-7/DOXR细胞对阿霉素的敏感性。

依达拉奉对幼鼠惊厥持续状态后海马XBP1 mRNA和caspase12表达及神经元凋亡的影响

目的:探讨依达拉奉对幼鼠惊厥持续状态(status convulsion,SC)后海马内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)关键标志分子X盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)mRNA、caspase-12的表达及神经元凋亡的影响。方法:将19～21日龄SD大鼠随机分入惊厥持续状态(SC)组、依达拉奉(ED)组、生理盐水对照(NS)组;各组再按不同时间点分五个亚组。应用氯化锂-匹鲁卡品建立大鼠SC模型,用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)动态观察SC后海马XBP1、caspase-12 mRNA的表达情况。用免疫组织化学方法观察海马caspase-12蛋白表达情况。用TUNEL法观察神经元凋亡细胞数。结果:幼年大鼠海马中XBP1和caspase-12在SC组表达显著增强,与NS组比较差异有显著性(P<0.01);与SC组比较,ED组XBP1 mRNA表达显著升高(P<0.01或P<0.05),caspase-12 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.01或P<0.05);SC组在惊厥12 h后的各时间点海马CA1区TUNEL阳性细胞数均显著高于NS组(P<0.01),而ED组TUNEL阳性细胞数均较SC组显著下降(P<0.01或P<0.05)。结论:依达拉奉有可能通过上调XBP1的表达与下调caspase-12的表达,并使神经元凋亡数目减少,从而发挥对神经元的保护作用。

XBP1在非洲爪蟾胚胎发育中的作用

目的 :探讨X盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)对非洲爪蟾胚胎发育的影响。方法:利用Western blot、原位杂交和免疫染色法检测XBP1在胚胎发育各个阶段的表达;通过显微注射基因特异性反义寡核苷酸实现基因敲降,利用RTPCR和整体胚胎原位杂交法检测基因表达变化。结果 :XBP1主要表达于非洲爪蟾胚胎发育期的神经、前肾、胰腺等器官中;敲降XBP1s在胚胎发育早期影响非洲爪蟾胚层形成相关基因,在胚胎发育后期影响胰腺发育相关基因。结论:XBP1s在胚胎发育早期可能影响胚层形成,在晚期可能影响胰腺的发育。

RNA干扰XBP1基因表达对口腔鳞状细胞癌生物学特性的影响研究

目的:检测口腔鳞状细胞癌组织中X盒结合蛋白1(XBP1)的表达及观察抑制其表达后对人口腔鳞状细胞癌Tca8113增殖凋亡的影响,并探讨其机制。方法:RT-PCR检测42例口腔鳞状细胞癌及癌旁组织中XBP1基因的mRNA表达;NC-siRNA和XBP1-siRNA转染至Tca8113细胞内,不经任何处理的细胞作为空白对照组,48h后,CCK8实验、流式细胞仪分别检测XBP1基因转染对细胞增殖、凋亡的影响;Western blot检测Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达的变化。结果:口腔鳞状细胞癌中XBP1基因的mRNA表达显著高于癌旁组织(P<0.01);转染XBP1-siRNA能够显著降低XBP1的蛋白表达,降低细胞的存活率,促进细胞的凋亡,上调Cleaved caspase3蛋白表达,下调β-catenin、Cyclin D1蛋白表达(P<0.01)。结论:RNA干扰沉默XBP1基因表达可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路降低Tca8113增殖及诱导细胞凋亡。

XBP1在白癜风皮损及应激HaCaT细胞中的表达

目的:检测XBP1在白癜风皮损组织及H2O2诱导的HaC aT细胞中的表达。方法:H2O2处理体外培养的HaC aT细胞。Real time PCR检测白癜风皮损中及应激HaC aT细胞中XBP1的表达;ELISA检测应激HaC aT细胞中特异性抑制剂抑制XBP1活化前后IL-6和IL-8的表达。结果:白癜风皮损和应激HaC aT细胞中XBP1 mRNA显著高于正常对照;应激HaC aT细胞中IL-6和IL-8水平高于空白对照组,抑制XBP1活化后两者分泌减少。结论:XBP1在白癜风皮损组织中显著上调,促进应激的HaC aT细胞分泌IL-6、IL-8。

内质网应激分子XBP1S在1型糖尿病大鼠认知功能障碍中作用探讨

目的:本研究通过观察tau蛋白和内质网应激通路关键分子XBP1S在糖尿病大鼠海马表达的变化,探讨XBP1S在糖尿病大鼠脑认知功能障碍的作用.方法:大鼠经腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立1型糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠模型,注射STZ16周末,取大鼠海马组织,采用Western Blots和免疫组织化学方法 ,观察大鼠海马组织中XBP1S和Tau的变化.结果:注射STZ16周,Western Blots结果显示:糖尿病大鼠海马组织中XBP1S蛋白表达明显降低,Tau蛋白表达明显升高;免疫组织化学染色结果显示:DM大鼠海马CA1区Tau阳性细胞数较多,颜色深;DM大鼠海马CA1区XBP1阳性细胞数较少,颜色浅.结论 :XBP1S在DM大鼠海马区表达比正常大鼠减少,提示XBP1S在可能参与糖尿病大鼠认知损伤.

转录因子XBP1在口腔鳞状细胞癌中的表达

目的:检测口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)组织中X盒结合蛋白1(X box binding protein 1,XBP1)的表达,并探讨其意义。方法:应用qRT-PCR法检测50例OSCC肿瘤和癌旁正常黏膜上皮中剪切型XBP1(XBP1splicing,XBP1-s)的表达;应用组织芯片技术和免疫组化染色相结合的方法检测100例OSCC癌旁上皮、肿瘤中心、侵袭前沿及淋巴结转移灶中XBP1蛋白的表达。结果:qRT-PCR显示:XBP1-s mRNA表达显著上升(log2(倍数)≥1)的病例与颈淋巴结转移相关(P<0.05)。免疫组化结果显示:XBP1蛋白在OSCC侵袭前沿和淋巴结转移灶中的表达均高于癌旁上皮和肿瘤中心(P<0.05);且在淋巴结转移灶中的表达明显高于侵袭前沿(P<0.05)。此外,XBP1蛋白表达还与OSCC组织病理学分级相关(P<0.05)。结论:XBP1可能是促进口腔鳞状细胞癌侵袭和转移的一个重要因子。

补肾开窍方通过抑制IRE1/XBP1内质网应激通路发挥对帕金森病模型大鼠的神经保护作用

【目的】探讨补肾开窍方对6-羟基多巴(6-OHDA)诱导的帕金森病(PD)模型大鼠的神经保护作用及可能机制。【方法】将60只SD大鼠随机分为6组,即假手术组、模型组、石菖蒲挥发油组、龟板组、补肾开窍方组、IRE1抑制剂组,每组10只。采用大鼠左脑立体注射6-OHDA法建立PD大鼠模型。造模结束后,石菖蒲挥发油组大鼠给予30 mg/kg石菖蒲挥发油灌胃,龟板组大鼠给予3.77 g/kg龟板液灌胃,补肾开窍方组给予3.77 g/kg龟板液、30 mg/kg石菖蒲挥发油灌胃,IRE1抑制剂组大鼠给予15 mg/kg STF-083110腹腔注射,每日2次,给药30 d。高效液相色谱(HPLC)法测定纹状体内单胺类神经递质多巴胺(DA)的含量,流式细胞术测定中脑内酪氨酸羟化酶(TH)的表达率,蛋白免疫印迹(Western blot)法测定纹状体内葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP家族同源蛋白(CHOP)、磷酸化需肌醇酶1(p-IRE1)和X盒结合蛋白1(XBP1)的表达。【结果】与假手术组比较,模型组大鼠的自主运动功能、平衡能力与协调性及感觉运动整合功能显著降低(P<0.05),单胺类神经递质DA和TH表达显著降低(P<0.05),内质网应激(ERS)指标GRP78、CHOP表达及纹状体内p-IRE1、XBP1表达均升高(P<0.05)。补肾开窍方可使大鼠的行为学改善,增加脑内DA和TH含量,使ERS指标GRP78、CHOP表达降低,降低纹状体p-IRE1和XBP1水平[与IRE1抑制剂组比较无显著性差异(P>0.05)]。【结论】补肾开窍方可能通过抑制ERS的IRE1/XBP1通路对6-OHDA诱导的PD模型大鼠产生神经保护作用。

下调XBP1基因表达对脑胶质瘤细胞活力和凋亡的影响

目的:探讨下调X盒结合蛋白1(XBP1)表达对脑胶质瘤细胞活力和凋亡的影响。方法:q PCR检测脑胶质瘤组织中XBP1的m RNA表达。将干扰XBP1表达的小干扰RNA(XBP1-si RNA组)转染人脑胶质瘤U251细胞,同时设置正常对照(control)组(细胞无特殊处理)和阴性对照(NC-si RNA)组(转染不具有任何干扰作用的si RNA),转染48 h后,用q PCR检测3组细胞中XBP1的m RNA表达;Western blot检测XBP1、增殖细胞核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞周期素D1(cyclin D1)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白水平;CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞周期及凋亡。结果:XBP1在脑胶质瘤中的表达显著高于瘤旁组织(P<0.05);转染XBP1-si RNA后,细胞中XBP1的m RNA及蛋白表达均显著降低(P<0.05);NC-si RNA组细胞活力、细胞周期变化、细胞凋亡率及PCNA、Bcl-2、Bax、cyclin D1、PI3K和p-Akt的蛋白水平与control组比较差异无统计学显著性;XBP1-si RNA组细胞活力、S期细胞及PCNA、Bcl-2、cyclin D1、PI3K和p-Akt蛋白水平均显著低于control组,细胞凋亡率、G0/G1期细胞及Bax蛋白表达均显著高于control组(P<0.05)。结论:下调脑胶质瘤细胞XBP1基因表达可降低肿瘤细胞的活力,阻滞细胞于G1期,并促进细胞的凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关。

XBP1对低氧环境下胶质瘤细胞活力及糖酵解的影响

目的:明确低氧应激对胶质瘤细胞X-盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)的作用;明确胶质瘤细胞XBP1表达与糖代谢之间的关系;抑制XBP1表达对胶质瘤细胞在常氧和低氧环境下细胞活力的影响;明确低氧环境中XBP1对胶质瘤细胞糖酵解的影响。方法:分别在常氧和低氧条件下培养人脑胶质瘤细胞系,检测XBP1激活情况;使用si RNA技术抑制XBP1表达,使用氧化磷酸化抑制剂处理细胞,检测细胞活力及糖代谢方式的改变,在常氧和低氧条件下检测细胞存活及糖酵解产物。结果:低氧环境下XBP1活化增加。低氧环境下XBP1沉默降低胶质瘤细胞活力、ATP和乳酸生成,葡萄糖消耗量减少。细胞氧化磷酸化受到抑制后,XBP1沉默降低胶质瘤细胞存活率。结论:低氧环境可诱导胶质瘤细胞XBP1的活化。在低氧环境下XBP1沉默降低胶质瘤细胞活力和糖酵解,胶质瘤细胞的糖酵解依赖于XBP1活化。

尼罗罗非鱼Xbp1-S基因克隆及表达分析

为了了解尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)细胞转录因子Xbp1-S(On Xbp1-S)的基因序列特征及其在无乳链球菌(Streptococcus alactolyticus)应激和在B细胞分化中的作用,应用RACE克隆技术获得的On Xbp1-S基因全长1380 bp,包括开放阅读框ORF为1155 bp,5?端非编码区(5?UTR)长127 bp,3?端非编码区(3'UTR)长98 bp。On Xbp1-S序列分析推测该基因编码384个氨基酸,分子量为41.32 k Da,理论等电点为4.36。同源性分析显示,On Xbp1-S基因与其他鱼类的聚为一支,其中,与南极鳕(Notothenia coriiceps)相似性最高。荧光定量PCR及Western-blot结果显示,On Xbp1-S在各组织中均有表达,m RNA水平上在肝脏中表达量最高,蛋白水平上在胸腺中表达量最高,而在肌肉中表达量最低。无乳链球菌应激后,On Xbp1-S基因在肝脏和脾脏中的表达趋势相似,均在应激期间出现表达量上调,在192 h出现峰值。另外,免疫组化分析发现,On Xbp1-S因子在不同分化程度B细胞亚类中的表达呈现差异,在成熟B细胞中呈现高表达,而在未成熟B细胞中几乎不表达。研究结果表明,On Xbp1-S参与尼罗罗非鱼对无乳链球菌的免疫防御,和在B细胞分化中起作用。本研究将为进一步研究On Xbp1-S因子应答病原菌侵染的机理及促进B细胞分化机制提供理论依据。

过量表达XBP1对于重组CHO细胞中HBsAg分泌的影响

考察了过量表达CHO细胞的内源性XBP1(X-box binding protein 1)对于重组CHO细胞中乙肝表面抗原(HBsAg)分泌的影响。结果表明:XBP1无法改善DMSO作用下CHO细胞中HBsAg的分泌,但能促进DTT作用下的HBsAg的分泌。进一步研究发现,细胞在DTT作用下形成了内质网分泌压力,而在DMSO作用下,没有形成内质网分泌压力。由此推断在内质网成为分泌限制部位的情况下,XBP1能够促进HBsAg的分泌;而DMSO通过促进二硫键的形成促进了HBsAg在内质网中的分泌,使得分泌限制部位发生在分泌过程中的其他细胞器。