益气化浊利水方联合针刺对气虚血瘀证2型糖尿病周围神经病变的疗效观察

目的探讨益气化浊利水方联合针刺治疗气虚血瘀证2型糖尿病周围神经病变(Type 2 diabetic peripheral neu-ropathy,T2DPN)的效果。方法选取2021年9月—2022年9月医院收治的96例T2DPN患者为研究对象,以随机数字表法分研究组(48例)、对照组(48例)。对照组给予针刺治疗,研究组在对照组基础上给予益气化浊利水方治疗,两组均持续治疗2周后评价效果。比较两组中医症状评分、周围神经传导速度及临床疗效,对比两组外周血炎症因子、氧化应激因子变化情况,记录两组治疗期间不良事件发生情况。结果两组治疗后的主症、次症中医证候评分均低于治疗前(P<0.05),研究组治疗后中医证候评分均低于对照组(P<0.05)。两组治疗后正中神经、胫后神经、腓总神经的运动神经传导速度(Motor nerve conduction velocity,MNCV)、感觉神经传导速度(Sensory nerve conduction velocity,SNCV)均高于治疗前(P<0.05),研究组治疗后上述指标均高于对照组(P<0.05)。研究组总有效率(91.67%,44/48)高于对照组(77.08%,37/48)(P<0.05)。两组治疗后肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(Inter-leukin-6,IL-6)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)均低于治疗前(P<0.05),研究组治疗后的TNF-α、IL-6、CRP均低于对照组(P<0.05)。两组治疗后丙二醛(Malondialdehyde,MDA)均低于治疗前,超氧化物歧化酶(Superoxide dis-mutase,SOD)、总抗氧化能力(Total antioxidant capacity,TAOC)均高于治疗前(P<0.05),研究组治疗后的MDA均低于对照组,SOD、TAOC均高于对照组(P<0.05)。两组总不良事件发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论益气化浊利水方联合针刺治疗气虚血瘀证T2DPN可改善患者症状、周围神经传导速度,增强治疗效果,抑制外周血炎症因子分泌、减轻氧化应激损伤,安全性良好。

健脾化浊方对乳腺癌术后AC-T化疗方案血脂及免疫功能的影响

目的观察健脾化浊方对乳腺癌术后AC-T化疗方案血脂及免疫功能的影响。方法选取2017年1月—2020年1月于温州市中医院乳腺科就诊的120例乳腺癌术后行AC-T化疗方案的患者,采用随机表法的方式将120例患者随机分为观察组和对照组,每组60例,对照组:AC-T方案化疗,观察组在对照组治疗的基础上加用健脾化浊方,持续治疗8个化疗周期。评估两组化疗前后血脂水平(TC,TG,LDL-C,HDL-C)、BMI指数、T细胞亚群(CD^(+)_(3)、CD^(+)_(4)、NK细胞百分率及CD^(+)_(4)/CD^(+)_(8)比值)、生活质量评分(KPS评分)。结果血脂水平:对照组化疗后TG、TC、LDL-C水平高于化疗前,HDL-C水平低于化疗前,差异有统计学意义(P<0.05);化疗后,观察组TG、TC、LDL-C水平明显低于对照组,HDL-C水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。BMI指数:对照组化疗后BMI指数高于化疗前,差异有统计学意义(P<0.05);化疗后,观察组BMI指数低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。T细胞亚群:对照组化疗后CD^(+)_(4)细胞、CD^(+)_(4)/CD^(+)_(8)比值、NK细胞百分率均高于化疗前,差异有统计学意义(均P<0.05);对照组化疗后CD^(+)_(8)细胞低于化疗前,差异有统计学意义(P<0.05);化疗后观察组的CD^(+)_(4)细胞、CD^(+)_(4)/CD^(+)_(8)比值、NK细胞百分率均高于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);化疗后观察组的CD^(+)_(8)细胞低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。生活质量(KPS评分):对照组化疗后KPS评分低于化疗前,差异有统计学意义(P<0.05);化疗后观察组的KPS评分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论乳腺癌术后AC-T化疗方案会增加患者的血脂水平,增加BMI指数,降低免疫功能,生活质量下降,健脾化浊方可改善乳腺癌术后AC-T化疗方案患者的血脂水平,降低BIM指数,增强免疫功能,提高生活质量,值得临床推广和应用。

香连化浊方对慢性萎缩性胃炎模型大鼠胃黏膜EGFR/MAPK/ERK信号通路的影响

目的 探讨香连化浊方治疗慢性萎缩性胃炎(CAG)的可能作用机制。方法 利用GEO数据库筛选出基因芯片数据集,基于GEO2R工具、GeneCards数据库获得CAG增殖相关差异基因。采用Metascape平台对CAG增殖相关差异基因进行GO分析和KEGG富集分析,寻找与CAG相关的生物过程及重要信号通路,并进行动物实验验证。70只Wistar大鼠,随机抽取14只作为正常组进行常规饲养,其余56只大鼠采用“N-甲基-N’-硝基-亚硝基胍+饥饱失常+水杨酸钠”联合造模法制备CAG模型。造模成功的50只大鼠随机分为模型组、摩罗丹组和香连化浊方低、中、高剂量组,每组10只。摩罗丹组大鼠给予摩罗丹溶液1.4 g/(kg·d)灌胃,香连化浊方高、中、低剂量组大鼠分别给予香连化浊方溶液36、18、9 g/(kg·d)灌胃,正常组和模型组大鼠给予生理盐水0.01 ml/g灌胃,各组均每日1次,连续60天。HE法观察大鼠胃黏膜组织病理学变化,透射电镜观察大鼠胃黏膜细胞超微结构,Western-blot法检测胃黏膜组织中表皮生长因子受体(EGFR)、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1 (p-ERK1)、原癌基因(c-myc)蛋白表达水平,RT-PCR法检测胃黏膜组织EGFR、细胞外信号调节蛋白激酶1 (ERK1)、c-myc mRNA表达。结果 最终得到45个CAG增殖相关差异基因。GO和KEGG富集分析结果显示,可影响正向调控细胞因子的产生、正向调控丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联反应、调节氧化应激诱导的细胞死亡等,涉及与癌症通路、MAPK信号通路、辅助性T细胞17(Th17)细胞分化等多个信号通路。HE染色可见各给药组大鼠胃黏膜厚度、固有层腺体排列状态、炎性细胞浸润情况等方面较模型组均有改善,其中以香连化浊方高、中剂量组效果最佳。透射电镜结果显示,与模型组比较,各药物干预后,线粒体结构恢复,内质网肿胀减轻,以香连化浊方高、中剂量组效果较为显著。与正常组比较,模型组大鼠胃黏膜EGFR、p-ERK1、c-myc蛋白及EGFR、ERK1、c-myc mRNA表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,香连化浊方高剂量组胃黏膜EGFR及c-myc、摩罗丹组c-myc、各给药组p-ERK1蛋白表达降低,各给药组EGFR、ERK1、c-myc mRNA表达亦明显降低(P<0.05);与摩罗丹组比较,香连化浊方低剂量组c-myc蛋白表达明显升高,香连化浊方高、中剂量组EGFR、c-myc mRNA表达降低,香连化浊方高、低剂量组ERK1 mRNA表达降低(P<0.05)。结论 香连化浊方治疗CAG可能机制是调控胃黏膜组织EGFR/MAPK/ERK信号通路,阻断细胞异常分化、增殖,从而减轻CAG胃黏膜组织损伤。

健脾益肾化浊方对多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢颗粒细胞凋亡蛋白及PI3K/AKT/mTOR通路的影响

目的 探讨健脾益肾化浊方治疗多囊卵巢综合征(PCOS)的可能作用机制。方法 70只SD雌性大鼠随机分为空白组和模型组各15只,二甲双胍组,健脾益肾化浊方低、中、高剂量组各10只。除空白组外,其余各组均采用来曲唑灌胃联合高脂饲料喂养21天构建PCOS模型。造模成功后,空白组和模型组用10 ml/(kg·d)生理盐水灌胃;二甲双胍组用盐酸二甲双胍片100 mg/(kg·d)灌胃;健脾益肾化浊方低、中、高剂量组分别用健脾益肾化浊方药物混悬液1.275、2.55、5.10 g/(kg·d)灌胃,干预30天。将卵巢称重并计算卵巢指数;ELISA法测定大鼠血清促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)、睾酮(T)、抗苗勒管激素(AMH)和雌二醇(E2)水平;HE染色观察卵巢组织形态改变;免疫组织化学染色法检测大鼠卵巢组织半胱氨酸天冬氨酸酶3 (Caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸酶9 (Caspase-9)和磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B (AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋(mTOR)蛋白阳性表达;Western blot法检测大鼠卵巢组织促凋亡蛋白(BAX)、抗凋亡蛋白(Bcl-2)、Caspase-9、细胞色素C (Cytochrome-C)和PI3K、AKT、mTOR蛋白相对表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠卵巢组织以囊性扩张卵泡为主,颗粒细胞层减少,间质增生明显;卵巢指数、血清T、LH、AMH、卵巢组织Caspase-3、Caspase-9平均光密度和BAX/Bcl-2值、Cytochrome-C、Caspase-9蛋白相对表达量明显升高,血清E2、FSH及卵巢组织PI3K、AKT、mTOR平均光密度和蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,健脾益肾化浊方各剂量组和二甲双胍组卵巢组织多囊样改变得到改善,可见各级卵泡和黄体,颗粒细胞层增厚,卵巢指数、血清LH、AMH、卵巢组织Caspase-9平均光密度和蛋白相对表达明显降低,血清E2、FSH,卵巢组织PI3K和AKT平均光密度,PI3K、AKT和mTOR蛋白相对表达显著升高(P<0.05或P<0.01);二甲双胍组和健脾益肾化浊方中、高剂量组血清T水平和Caspase-3平均光密度显著下降,健脾益肾化浊方低、高剂量组和二甲双胍组mTOR平均光密度显著增加、BAX/Bcl-2值明显降低,二甲双胍组和健脾益肾化浊方高剂量组卵巢组织Cytochrome-C蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。与二甲双胍组相比,健脾益肾化浊方低剂量组血清T水平明显升高,健脾益肾化浊方中剂量组BAX/Bcl-2值显著升高(P<0.05);与健脾益肾化浊方中剂量组相比,健脾益肾化浊方高剂量组Cytochrome-C蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论 健脾益肾化浊方可抑制PCOS大鼠卵巢颗粒细胞凋亡蛋白表达,从而维持内分泌平衡以改善卵巢生殖功能,其机制可能与激活PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。

清金化浊方协同治疗对慢性阻塞性肺疾病急性加重痰热瘀肺证患者住院期间血栓事件影响的回顾性队列研究

目的分析清金化浊方协同治疗对慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD)痰热瘀肺证住院患者发生血栓事件的影响及其可能的机制。方法采用回顾性队列研究,纳入AECOPD痰热瘀肺证住院患者305例,根据是否应用清金化浊方(要求疗程≥7天)分为暴露组(193例)和非暴露组(112例),并经1∶1倾向性评分匹配(PSM)得到109对病例,比较匹配后两组患者住院期间血栓事件发生情况,治疗(10±3)天后主要症状或体征(包括咳嗽、咯痰、喘息、紫绀)缓解情况,治疗前及治疗(10±3)天后首次辅助检查[包括D-二聚体、中性粒细胞百分比(NEUT%)、C反应蛋白(CRP)、动脉血氧分压(PaO_(2))、动脉血二氧化碳分压(PaCO_(2))]的差异。结果匹配后,暴露组患者住院期间血栓事件发生率(5例,4.59%)较非暴露组(15例,13.76%)降低(P<0.05),暴露因素(应用清金化浊方≥7天)是AECOPD痰热瘀肺证住院患者发生血栓事件的保护因素[相对危险度(RR)=0.333,95%CI(0.126,0.885)];暴露组患者治疗后咳嗽缓解91.74%(100/109)、咯痰缓解94.50%(103/109)、喘息缓解93.58%(102/109)、紫绀缓解88.99%(97/109)均高于非暴露组的82.57%(90/109)、86.24%(94/109)、81.65%(89/109)、78.90%(86/109),暴露组缓解率均优于非暴露组(P<0.05);两组患者治疗后D-二聚体、NEUT%、CRP、PaCO_(2)水平均较治疗前降低(均P<0.05),PaO_(2)水平均明显升高(P<0.05);两组患者各指标治疗前后差值比较,暴露组D-二聚体、NEUT%、PaO_(2)水平改善均优于非暴露组(P<0.05),而CRP、PaCO_(2)水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论清金化浊方协同治疗能有效降低AECOPD痰热瘀肺证住院患者的血栓事件发生,并可缓解患者咳嗽、咯痰、喘息、紫绀的临床症状或体征,改善肺功能,其机制可能与改善血液高凝、炎症状态有关。

基于网络药理学及实验验证探讨香连化浊方治疗慢性萎缩性胃炎大鼠作用机制

目的:基于网络药理学和实验验证,探讨香连化浊方治疗慢性萎缩性胃炎(CAG)的作用机制。方法:利用中药系统药理学技术平台(TCMSP)、SWISS TARGETS数据库、基因组注释数据库平台(GENE CARDS)、在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)筛选香连化浊方和疾病的作用靶点,利用STRING数据库、Cytoscape软件构建蛋白互作网络,筛选核心靶点,利用Metascape数据库进行基因本体论(GO)分析与京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。制备CAG大鼠模型后予香连化浊方干预治疗,观察大鼠胃黏膜组织病理学改变,采用免疫组化、实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)对核心靶点进行验证。结果:网络药理学结果显示香连化浊方中口服利用度较高的成分有珊瑚甙、过氧化苯甲酰内酯、芍药花酮等;主要活性成分槲皮素、木犀草素、山柰酚等作用于192个靶点,生物学途径主要为参与蛋白磷酸化正调控、氧化应激反应、损伤应答、凋亡信号通路等;细胞组分主要包括膜侧、膜筏、细胞外基质、细胞质的核周围区域等;分子功能包括激酶结合、转录因子结合、蛋白域特异性结合、蛋白激酶活性等。KEGG富集通路与磷脂酰肌醇-3-激酶-丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(PI3K-AKT)信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、细胞凋亡通路。实验验证研究发现香连化浊方治疗后大鼠胃黏膜萎缩病理程度减轻,胃组织核心靶点AKT1、C-MYC的蛋白表达明显下调(P<0.05),胃组织Cmyc mRNA表达明显下调(P<0.05)。结论:香连化浊方中有效成分槲皮素、木犀草素、山柰酚等可能通过下调Cmyc mRNA、AKT1、C-MYC蛋白表达抑制胃黏膜细胞过度增殖实现对CAG的治疗作用。

基于Wnt通路探讨温阳化浊方含药血清对Ishikawa和JAr细胞胚胎种植模型的影响

目的 探讨温阳化浊方促进胚胎种植的可能作用机制。方法 将20只大鼠随机分为温阳化浊方组和空白组,每组10只。温阳化浊方组大鼠给予温阳化浊方药液21.05 g/kg连续灌胃7天,空白组不予灌胃,制备温阳化浊方含药血清和空白血清。体外培养THP-1单核细胞,佛波酯(PMA)诱导分化成巨噬细胞,再用20 ng/ml脂多糖(LPS)和20 ng/ml γ干扰素(IFN-γ)诱导巨噬细胞M1极化。M1型巨噬细胞分别加入2%、4%、8%、10%、15%、20%的温阳化浊方含药血清和空白血清培养,采用CCK8法检测细胞存活率,选取最大无毒剂量的温阳化浊方含药血清进行后续实验。M1型巨噬细胞分为:模型1组、温阳化浊方含药血清1组、空白血清1组,在诱导M1极化后,温阳化浊方含药血清1组给予筛选浓度的温阳化浊方含药血清,空白血清1组给予同浓度的空白血清,各组均干预24 h和48 h,Real-time PCR法检测M1型巨噬细胞标志物肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β (IL-1β)和M2型巨噬细胞标志物趋化因子配体18 (CCL-18)、甘露糖受体C型1 (MRC-1) mRNA表达。采用Transwell体系共培养M1型巨噬细胞、Ishikawa细胞和JAr细胞,建立体外胚胎种植模型。将胚胎种植模型细胞分为:非容受态组(只包含Ishikawa细胞)、容受态组(包含Ishikawa细胞和JAr细胞)、模型2组(M1型巨噬细胞与Ishikawa细胞、JAr细胞共培养)、温阳化浊方含药血清2组和空白血清2组。温阳化浊方含药血清2组和空白血清2组在M1型巨噬细胞与Ishikawa细胞共培养的同时,分别给予筛选浓度的温阳化浊方含药血清和空白血清干预48 h,再与JAr细胞共培养。Realtime PCR方法检测Wnt通路相关因子Wnt4、Wnt6、Wnt7b、Wnt11、β-连环蛋白(β-catenin)和子宫内膜容受性标志分子整合素αV (ITGαV)、整合素β3 (ITGβ3)、整合素β5 (ITGβ5)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、L-选择素(L-selectin)的mRNA表达;免疫荧光法检测Wnt通路下游分子原癌基因(C-Jun)、间质上皮转换因子(Met)、淋巴细胞增强结合因子1 (LEF1)的表达;因非容受态组无JAr细胞球黏附,观察其余各组的JAr细胞黏附率。结果 根据细胞存活率结果,选择10%温阳化浊方含药血清进行后续实验。干预48 h时,与模型1组比较,温阳化浊方含药血清1组TNF-α和IL-1β mRNA表达显著降低,CCL-18和MRC-1 mRNA表达显著升高(P<0.01),空白血清1组TNF-α mRNA表达显著降低(P<0.05);与温阳化浊方含药血清1组比较,空白血清1组CCL-18和MRC-1 mRNA表达均显著降低(P<0.01)。与非容受态组比较,容受态组细胞中Wnt4、Wnt6、Wnt7b、Wnt11、β-catenin、ITGαV、ITGβ3、ITGβ5、E-cadherin、L-selectin mRNA及C-Jun蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01);与容受态组比较,模型2组Wnt4、Wnt6、Wnt7b、Wnt11、β-catenin、ITGαV、ITGβ3、ITGβ5、E-cadherin、L-selectin mRNA及C-Jun蛋白表达,JAr细胞的黏附率显著降低(P<0.05或P<0.01);与模型2组比较,温阳化浊方含药血清2组Wnt4、Wnt6、Wnt7b、Wnt11、β-catenin、ITGαV、ITGβ3、ITGβ5 mRNA及C-Jun蛋白表达,JAr细胞的黏附率均显著升高(P<0.01),空白血清2组各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论 温阳化浊方含药血清通过抑制M1型巨噬细胞极化,上调Wnt通路,提高子宫内膜容受性,从而促进慢性子宫内膜炎的胚胎种植。

化浊解毒润肠方治疗热积型功能性便秘患者36例随机对照临床研究

目的观察化浊解毒润肠方治疗热积型功能性便秘的临床疗效,并探讨其可能作用机制。方法将72例热积型功能性便秘患者按照随机数字表法分为治疗组和对照组各36例,对照组给予复方聚乙二醇电解质散(Ⅳ)治疗,服用方法:A剂、B剂各1包,同溶于125 ml温水中,每日2次口服;治疗组给予化浊解毒润肠方,每日1剂,水煎分2次口服。两组疗程均为4周。观察两组治疗前后每周完全自发排便次数、首次排便时间、便秘症状评分量表(KESS)评分、中医证候总积分、72 h结肠排出率;检测治疗前后两组患者血清5-羟色胺(5-HT)、胃动素(MOT)、血管活性肠肽(VIP)水平及肠道菌群(乳杆菌、双歧杆菌和大肠埃希菌)数量。结果治疗后两组每周完全自发排便次数均较治疗前明显增加(P<0.05),且治疗组明显高于对照组(P<0.05)。治疗后治疗组首次排便时间为(5.08±1.54)h,对照组为(9.08±1.38)h,治疗组明显短于对照组(P<0.05)。两组患者KESS评分、中医症状总积分、72 h结肠残留率及血清VIP水平均较治疗前明显降低(P<0.05),且治疗组明显低于对照组(P<0.05)。两组患者血清5-HT、MOT水平及肠道双歧杆菌、乳杆菌数量均较治疗前明显升高(P<0.05),且治疗组明显高于对照组(P<0.05)。结论化浊解毒润肠方可以增加热积型功能性便秘患者每周完全自发排便次数,改善便秘症状,缩短首次排便时间,其机制可能与调节血清5-HT、MOT、VIP水平及肠道菌群有关。