糖皮质激素受体水平在白血病、肾病治疗中临床意义的探讨

目的:探讨糖皮质激素受体(GCR)水平高低对急性淋巴性白血病(ALL)、肾病综合征(NS)疗效的影响。方法:采用受体放射配体结合技术测定ALL、NS和对照组外周血淋巴细胞糖皮质激素高亲和力受体GCRH和低亲和力受体GCRL位点数,分析GCR与疗效之间的关系;并通过动物实验观察中药小柴胡汤对应用糖皮质激素所产生的GCR“降调节”效应的影响。结果:疗前GCRH>4000位点/细胞的ALL患者对激素联合化疗疗效好,化疗后GCRH明显降调,但GCRL治疗前后无明显变化。NS患者疗前GCRH>6000位点/细胞,则对GC疗效好,当GCRH<3000位点/细胞,则GC治疗无效。SD大白鼠实验表明,小柴胡汤具有显著的调控GCR水平作用。结论:对ALL患者和NS患者治疗前检测GCR水平,有助于制定个体化的治疗措施。

小柴胡汤在恶性肿瘤全程管理中的应用研究进展

恶性肿瘤已超过中风及冠心病跃升成为全球70岁前的主要死因,其发病率正逐年增长,严重影响我国人民生活水平及社会经济发展。外科手术、放射治疗、化学治疗、靶向治疗、免疫治疗是西医干预肿瘤的主要手段,对延长患者生存期具有重要意义,但存在不良反应多、易耐药等弊端。中医药在肿瘤治疗中的疗效确切、应用广泛,成为了近年的研究热点。小柴胡汤出自《伤寒杂病论》,由柴胡、黄芩、人参、半夏、炙甘草、生姜、大枣组成,具有和解少阳、调和寒热阴阳、疏肝解郁之功效。该方及以其为基础变化的方药被广泛应用于肿瘤的各个阶段。该研究对近10年来小柴胡汤在肿瘤领域的国内外研究进行总结,探究小柴胡汤在阻断癌前病变、控制恶性肿瘤发展、降低干预后不良反应发生、缓解常见并发症上的作用及机制,以期拓展临床用药思路。

小柴胡汤加味对慢性束缚抑郁模型大鼠海马谷氨酸转运体EAATs,VGLUTs表达的影响

目的:观察小柴胡汤加味对慢性束缚抑郁模型大鼠海马谷氨酸膜转运体(EAATs)及囊泡转运体(VGLUTs)表达的影响,探讨小柴胡汤加味基于谷氨酸转运的抗抑郁机制。方法:120只SD大鼠随机分为正常组、模型组、小柴胡汤加味组低、中、高剂量组、利鲁唑组,每组20只。除正常组外,其余各组采用束缚应激制备大鼠抑郁模型,小柴胡汤加味低、中、高剂量组分别灌胃(ig)小柴胡汤加味6.5,13,26 g·kg-1;利鲁唑组腹腔注射利鲁唑20 mg·kg-1;正常组和模型组ig等量生理盐水;1次/d,共干预21 d。采用强迫游泳实验(FST)和悬尾实验(TST)评价大鼠的抑郁行为;采用高效液相色谱法(HPLC)检测海马组织中谷氨酸含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠海马中EAAT1,EAAT2和EAAT3 mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马组织EAAT1,EAAT2,EAAT3,VGLUT1,VGLUT2蛋白表达;用尼氏染色法观察大鼠海马神经元形态,免疫组化(IHC)检测海马CA1区EAAT1,EAAT2和NeuN蛋白在神经细胞中的定位表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠悬尾和强迫游泳不动时间均显著延长(P<0.01),海马内EAAT1,EAAT2,EAAT3 mRNA和蛋白表达均显著下降(P<0.01),VGLUT1和NeuN蛋白表达均显著降低(P<0.01);而谷氨酸水平和VGLUT2表达均显著增高(P<0.01)。与模型组比较,小柴胡汤加味中、高剂量组大鼠悬尾和强迫游泳不动时间明显缩短(P<0.05,P<0.01),海马内EAAT1,EAAT2和EAAT3mRNA和蛋白表达量均显著增加(P<0.01),VGLUT1和NeuN蛋白表达均显著增强(P<0.01),谷氨酸水平和VGLUT2表达显著回降(P<0.01),海马神经元结构明显复原。结论:小柴胡汤加味有明显的抗抑郁作用,其机制可能与其上调大鼠海马内EAAT1,EAAT2,EAAT3基因和VGLUT1蛋白表达。

和肝颗粒治疗肝郁脾虚型非糜烂性反流病疗效及对5-HT,VIP的影响

目的:观察和肝颗粒治疗肝郁脾虚型非糜烂性反流病患者的临床疗效及对患者生活质量,5-羟色胺(5-HT),血管活性肠肽(VIP)水平的影响。方法:将肝郁脾虚型非糜烂性反流病患者随机分为治疗组32例和对照组33例,治疗组采用和肝颗粒10 g/袋,每次1袋,每日2次,餐后口服。对照组采用奥美拉唑肠溶片20 mg/粒,每日2次,餐前口服。两组疗程均为8周。观察两组治疗前后中医症状总积分及SF-36健康量表评分及5-HT,VIP水平。结果:两组患者中医疗效比较,治疗组、对照组中医疗效总有效率分别为87. 5%,81. 8%,治疗组优于对照组(P <0. 05);治疗后治疗组在特殊症状、次要症状方面改善优于对照组(P <0. 05);在主要症状方面两组疗效相当;治疗后治疗组SF-36健康量表在生理职能、总体健康、活力、社会功能、情感职能、心理健康6个维度评分均较高于对照组(P <0. 05);治疗后两组患者5-HT,VIP水平均降低,治疗组低于对照组(P <0. 05)。结论:和肝颗粒治疗肝郁脾虚型非糜烂性反流病患者具有较好的临床疗效,能够改善患者的中医症状,并能提高患者的生活质量,降低食管内脏敏感性。

HPLC测定不同煎煮方法小柴胡汤中9种成分的含量

目的:考察去滓再煎法、不去滓煎法、两次煎法3种煎煮方法对小柴胡汤中9种成分含量的影响。方法:采用Welch Ultimate XB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱,柱温26℃,流速1.0 m L·min^(-1),检测波长203,252,280 nm。结果:去滓再煎法中柴胡皂苷a的含量比不去滓煎法、现代两次煎法分别提高了62.41%,49.01%,柴胡皂苷d的含量比其他2种煎法分别提高了59.47%,28.71%,柴胡皂苷b1的含量比其他2种煎法分别提高了41.93%,16.14%。去滓再煎法中人参皂苷Re的含量比不去滓煎法提高了33.96%,比两次煎法提高了0.20%。去滓再煎法中黄芩苷,人参皂苷Rb1,甘草酸单铵盐,甘草苷4种成分的含量略低于两次煎法,高于不去滓煎法。不去滓煎法中各种成分的含量是3种煎法中最低的(6-姜辣素除外)。结论:该结果可有效反映不同煎煮方法的质量差异。在3种煎法中,去滓再煎的方法明显提高了柴胡在水煎液中有效成分的溶出,从一定程度上提升了小柴胡汤的临床功效,为张仲景《伤寒论》中对小柴胡汤采用去滓再煎的方法及质量评价提供了良好的实验依据。

小柴胡汤加味治疗亚急性甲状腺炎46例临床观察

目的：观察小柴胡汤加味治疗亚急性甲状腺炎（subacute thyroiditis,SAT）的临床疗效、复发率及安全性。方法：将符合要求的90例SAT患者随机分为治疗组（46例）及对照组（44例）,治疗组给予小柴胡汤加连翘汤剂口服,1剂/d,对照组给予醋酸泼尼松口服,疗程12周。观察两组患者临床疗效、疼痛的减轻、消失时间、热退时间、复发率及不良事件、远期甲减发生率。结果：与本组治疗前比较,治疗组与对照组治疗后2周血沉均显著下降（P〈0.01）,治疗组血沉略高于对照组,组间比较无统计学差异,12周后两组血沉与本组治疗前比较均显著下降（P〈0.01）,治疗组血沉与对照组比较明显下降（P〈0.05）;治疗组疼痛减轻时间高于对照组（P〈0.05）;疼痛消失时间短于对照组,但无统计学差异,治疗组退热时间略低于对照组,组间比较无统计学差异,治疗组临床总有效率97.83%,高于对照组的83.33%（P〈0.05）。治疗组不良事件发生率2.17%,略低于对照组6.82%,但组间比较无统计学差异;疗程结束后6月,治疗组复发率2.17%,低于对照组的14.29%（P〈0.05）;治疗组亚临床甲减发生率4.35%,略低于对照组的9.52%,组间比较无统计学差异。结论：小柴胡汤加味连翘治疗SAT与醋酸泼尼松相比疗效显著,依从性好、复发率低、安全性高。

小柴胡汤对CFA大鼠滑膜组织NF-κB信号通路作用的探讨

目的:观察小柴胡汤治疗后弗氏完全佐剂(CFA)大鼠滑膜组织核转录因子(NF)-κB信号通路中肿瘤坏死因子受体相关死亡结构域(TARDD),NF-κB抑制蛋白α(IκBα),IκB激酶-α(IKKα),NF-κB p65蛋白的表达。方法:将SPF级健康成年雌性Wistar大鼠应用弗氏完全佐剂和牛Ⅱ型胶原制备CFA动物模型。根据随机数字表,将大鼠随机分为正常组、模型组、小柴胡汤低、中、高剂量组、雷公藤多苷组。各组于造模后7 d开始灌胃给药,正常组及模型组均予注射用水,小柴胡汤低、中、高剂量组(5. 94,11. 88,23. 76 g·kg-1),雷公藤多苷片(0. 006 3 g·kg-1),分别2 mL/次,每天3次灌胃,连续给药28 d后观察实验大鼠踝关节组织病理学及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测NF-κB信号通路中TARDD,IKKα,IκBα,NF-κB p65蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠右后踝关节组织病理评分显著增加(P <0. 01),NF-κB信号通路中TARDD,IKKα,IκBα,NF-κB p65蛋白表达显著增高(P <0. 01)。与模型组比较,随着小柴胡汤剂量的增加,实验大鼠右后踝关节组织病理评分显著减少(P <0. 01),在大鼠踝关节组织标本NF-κB信号通路中TARDD,IKKα,IκBα,NF-κB p65关键蛋白的表达上,小柴胡汤低剂量组蛋白表达明显减低(P <0. 05),而小柴胡汤中剂量组、小柴胡汤高剂量组、雷公藤多苷组蛋白表达显著减低(P <0. 01)。结论:研究显示小柴胡汤随着剂量的增加,可以有效地改善滑膜炎症,抑制NF-κB炎症信号通路中关键蛋白的表达,从而阻止炎症而抑制骨侵蚀。

小柴胡汤合五苓散对维持性腹膜透析患者残余肾功能的保护及对腹膜纤维化、微炎症状态的影响

目的:观察小柴胡汤合五苓散对维持性腹膜透析(PD)患者残余肾功能的保护及对腹膜纤维化、微炎症状态的影响。方法:选取重庆市中医院自2016年6月至2017年6月收治的65例PD患者作为观察对象,按照随机数字表法分为对照组32例,研究组33例。对照组给予常规治疗,研究组给予常规治疗+小柴胡汤合五苓散治疗,治疗前、治疗3个月采空腹静脉血,测定血肌酐(SCr),尿素氮(BUN)水平。采集尿液,记录24 h尿量,使用比色法检测24 h尿蛋白定量水平(24 h UP),计算肾小球滤过率(e GFR),残余肾功能(RRF),其中RRF采用残余肾肌酐清除率表示。使用化学发光法检测炎症因子,包括白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清Janus激酶(Janus Kinase,JAK) 2,信号传导及转录激活因子(STAT) 3水平。采用蛋白免疫印迹法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin),α-肌动蛋白(α-SMA)水平。结果:治疗前两组RRF比较差异均无统计学意义,治疗后研究组RRF明显优于对照组(P<0. 05)。治疗后研究组24 h UP低于对照组,日均尿量高于对照组(P<0. 05)。治疗后研究组IL-6,IL-8,TNF-α水平均明显低于对照组(P<0. 05),研究组JAK2,STAT3水平均低于对照组(P<0. 01)。对照组腹透液中的上皮细胞E-cadherin蛋白表达量较本组治疗前显著降低(P<0. 01),α-SMA蛋白表达量较本组治疗前显著升高(P<0. 01),研究组治疗前后E-cadherin,α-SMA蛋白表达量无明显变化。结论:小柴胡汤合五苓散能够保护PD患者的残余肾功能,其机制可能与其改善腹膜纤维化进程,减轻机体的微炎症状态有关,具有较高的应用价值。

基于网络药理学和实验验证探讨小柴胡汤治疗阿尔茨海默病的作用机制

目的:运用网络药理学结合生物信息学探讨小柴胡汤治疗阿尔茨海默病(AD)的潜在作用机制。方法:利用中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)筛选小柴胡汤的可能活性化合物及其潜在治疗靶标,从基因表达综合数据库(GEO)中获取与AD相关的差异表达基因,取交集筛选出小柴胡汤可能的靶点;对交集靶点基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析;构建化合物—靶点网络、蛋白互作(PPI)网络,进行KEGG和GO富集分析。采用β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)诱导PC12细胞制备AD细胞模型,以小柴胡汤干预处理后,细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测细胞活率,4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察细胞形态、细胞膜电位检测、流式细胞术检测细胞凋亡、细胞荧光免疫检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)/Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达,初步验证网络药理学预测结果。结果:小柴胡汤共收集到190个化学成分和41个AD相关靶点,包括丁子香萜,槲皮素,小檗碱,原卟啉,24-Ethylcholest-4-en-3-one,β-D-呋喃核糖苷等关键化合物及Sigma非阿片类细胞内受体1(SIGMAR1),细胞周期检测点激酶1(CHEK1),非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶6(PTPN6),蛋白激酶C(PRKCH),核转录因子κB激酶亚单位β抑制蛋白(IKBKB),组织蛋白酶D(CTSD),半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3),Bax,Bcl-2样蛋白1(Bcl-2L1)等核心靶点。GO富集分析获得302个条目(P<0.05),主要与调控神经元细胞凋亡相关;KEGG通路富集获得相关通路73条(P<0.05),涉及的主要通路和生物过程包括细胞凋亡通路、脂质和动脉粥样硬化相关通路、癌症相关通路等。细胞实验表明,与空白组比较,模型组细胞活率降低(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05)、线粒体膜电位降低,Bcl-2/Bax下调;与模型组比较,小柴胡汤组细胞活率升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05)、线粒体膜电位升高,Bcl-2/Bax上调,验证了预测结果的可靠性。结论:本研究揭示了小柴胡汤治疗AD多成分、多靶点、多途径的作用特点,为进一步阐释其物质基础和机制奠定了一定基础。

小柴胡汤及其寒热减方对结肠癌细胞增殖、脂肪及碱性磷酸酶的影响

目的：观察小柴胡汤及其寒热减方对HCT116结肠癌细胞增殖、脂肪及碱性磷酸酶的影响,探讨其作用机制。方法：分别取小柴胡汤、小柴胡汤去柴胡、小柴胡汤去黄芩、小柴胡汤去半夏、小柴胡汤去生姜煎液不同质量浓度（0.5,1.0,1.5 g·L^-1）培养HCT116细胞,另设不加药空白组和秋水仙碱（1.0,2.5,10.0μmol·L^-1）组。采用噻唑蓝（MTT）比色法检测HCT116细胞的增殖活力,苏丹红Ⅳ染色法检测脂肪,碱性磷酸酶试剂盒检测酶活性,热稳定实验区分组织特异性碱性磷酸酶和组织非特异性碱性磷酸酶（TNAP）,肠型碱性磷酸酶特异抑制剂（L-苯丙氨酸）抑制实验,区分组织特异性碱性磷酸酶中的肠碱性磷酸酶（IAP）。结果：与空白组比较,小柴胡汤及其寒热减方对HCT116结肠癌细胞增殖均有不同程度的抑制作用,小柴胡汤的抑制作用更明显,秋水仙碱组细胞抑制作用最为明显。空白组脂肪累积细胞率显著高于小柴胡汤及其寒热减方5组（P〈0.01）,小柴胡汤组脂肪累积细胞率最低（P〈0.05）,小柴胡汤去柴胡组脂肪累积细胞率显著低于小柴胡汤去半夏组和小柴胡汤去生姜组（P〈0.01）,小柴胡汤去黄芩组脂肪累积细胞率显著低于小柴胡汤去半夏组和小柴胡汤去生姜组（P〈0.01）,秋水仙碱组无脂肪累积。小柴胡汤及其寒热减方5组细胞内IAP酶活性高于TNAP活性（P〈0.01）;培养液中TNAP酶活性高于IAP酶活性（P〈0.01）。小柴胡汤去柴胡组细胞内IAP酶活性高于小柴胡汤去半夏组和小柴胡汤去生姜组,小柴胡汤去黄芩组细胞内IAP酶活性高于小柴胡汤去半夏组和小柴胡汤去生姜组（P〈0.01）;在培养液中,小柴胡汤去半夏组和小柴胡汤去生姜组TNAP酶活性均高于小柴胡汤去柴胡组（P〈0.05）和小柴胡汤去黄芩组。结论：小柴胡汤及其寒热减方均抑制HCT116癌细胞增殖,小柴胡汤寒热并用全方抑制作用最强。寒药减方与热药减方对脂肪累积和碱性磷酸酶的影响不同。小柴胡汤中寒药和热药并用,分别作用于TNAP和IAP,调节脂肪转运代谢,从而抑制癌细胞生长。

基于网络药理学探讨小柴胡汤抗肺癌作用机制

目的:运用网络药理学方法构建小柴胡汤多成分-多靶点-多通路的相互作用网络,探究其抗肺癌的作用机制。方法:利用中药系统药理数据库和分析平台(TCMSP)中药分子机制综合数据库(TCMID)和文献获取小柴胡汤的有效活性成分;运用PharmMapper的反向药效团匹配方法对潜在靶标进行预测,利用自开发软件TCMKD1.0进行“肘点法”筛选优化,通过检索药物靶标数据库(TTD),人类孟德尔遗传数据库(OMIM),GeneCards等数据库及查阅文献筛选出肺癌相关靶点;进而构建化合物-靶点网络、蛋白互作(PPI)网络、靶点-通路网络;通过STRING数据库进行靶点信息的注释;通过Cytoscape 3.6软件构建小柴胡汤成分-靶点-通路网络。结果:得到小柴胡汤中162个有效活性成分,涉及71个抗肺癌靶点和11个相关通路;拓扑网络分析后得到槲皮素(quercetin),人参皂苷Rh2(ginsenosideRh2),芒柄花黄素(formononetin),β-谷甾醇(β-sitosterol)等96个重要成分,表皮生长因子受体(EGFR),血管内皮生长因子(KDR),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),丝裂原活化蛋白激酶(MAPK1),肝细胞生长因子(MET)等28个关键靶点,非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer),小细胞肺癌(small cell lung cancer),ErbB信号通路(ErbB signaling pathway),VEGF信号通路(VEGF signaling pathway)等61条核心通路。结论:研究结果表明小柴胡汤抗肺癌的活性成分可能是槲皮素,人参皂苷Rh2,6-姜烯酚,芒柄花黄素,β-谷甾醇等,其作用机制可能与ErbB signaling pathway,MAPK signaling pathway,VEGF signaling pathway等通路有关,该研究为深入阐述小柴胡汤抗肺癌作用机制提供依据。

小柴胡颗粒激活Nrf2通路抗TAA致大鼠急性肝损伤的机制探讨

目的:观察小柴胡颗粒对硫代乙酰胺(TAA)致大鼠急性肝损伤(ALI)的治疗作用,探讨核转录因子(NF)-E2相关因子2(Nrf2)抗氧化损伤通路在其中的作用。方法:SD大鼠随机分为空白组,模型组,小柴胡颗粒低、中、高剂量组(1,2,4 g·kg-1),大鼠给予250 mg·kg-1TAA腹腔注射2 d制备肝损伤模型,从第3天各组分别给予等量双蒸水和不同剂量小柴胡颗粒,灌胃2周。末次给药后24 h取材,肝组织行苏木素-伊红(HE)染色;比色法测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性及组织中总超氧化物歧化酶(T-SOD),丙二醛(MDA)水平;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Nrf2通路相关mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Nrf2通路相关蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组ALT,AST,MDA水平显著增高,T-SOD活性明显降低(P <0. 05,P <0. 01),病理学呈现大片炎性浸润表现,肝脏组织Nrf2,Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1),醌氧化还原酶1(NQO1),血红素加氧酶-1(HO-1),谷氨酸半胱氨酸合成酶催化亚基(GCLC),谷氨酸半胱氨酸合成酶调节亚基(GCLM) mRNA及蛋白表达水平均明显下降(P <0. 05,P <0. 01);与模型组比较,小柴胡颗粒各剂量组ALT,AST,MDA水平均明显降低,T-SOD活性明显升高(P <0. 05,P <0. 01),病理结果示大鼠肝脏病变范围与严重程度均有不同程度改善,肝脏组织Nrf2,Keap1,NQO1,HO-1,GCLC,GCLM的mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P <0. 05,P <0. 01)。结论:小柴胡颗粒可能通过上调Nrf2信号通路上下游分子的表达,对TAA致急性肝损伤大鼠起到治疗作用。