消渴通痹方含药血清对高糖损伤后HUVEC细胞骨架及RhoA/ROCK信号通路的影响

目的:观察消渴通痹方含药血清对高糖损伤后人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells, HUVEC)F肌动蛋白(F-actin)、Ras基因家族成员A(Ras homolog gene family member A,RHOA)、Rho相关蛋白激酶(Rho-associated coiled-coil containing kinase, ROCK)蛋白表达的影响。方法:将高糖损伤后HUVEC模型分为高糖模型组、22.5 g/kg消渴通痹方5%、10%、15%含药血清组,另设正常对照组,应用免疫荧光法检测F-actin的动态变化,Western blot检测F-actin、ROCK、p-ROCK和RhoA蛋白表达。结果:高糖刺激HUVEC骨架蛋白F-actin聚集到细胞中央,形成大量的应力纤维;22.5 g/kg消渴通痹方5%、10%含药血清干预后能够改善F-actin的聚集状态,使F-actin重新分布在细胞周边。与正常对照组比较,高糖模型组F-actin积分光密度值升高,F-actin、p-ROCK、RHOA蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01),ROCK蛋白表达明显下调(P<0.05);与高糖模型组比较,22.5 g/kg消渴通痹方5%含药血清组F-actin积分光密度值明显降低,F-actin、p-ROCK、RHOA蛋白表达明显下调(P<0.05),ROCK蛋白表达明显上调(P<0.05);10%含药血清组F-actin积分光密度值明显降低、F-actin蛋白表达明显下调(P<0.01或P<0.05),RHOA、ROCK蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论:益气活血中药消渴通痹方可能通过抑制RHOA/ROCK信号通路的异常激活稳定或保护内皮细胞骨架。

消渴方对2型糖尿病模型大鼠胰腺组织Ca^(2+)/CaN/NFAT信号通路的影响

目的探讨消渴方治疗2型糖尿病的可能作用机制。方法采用高脂高糖饲料联合2%链脲佐菌素-柠檬酸缓冲液35mg/kg腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型,造模成功40只大鼠随机分为模型组、抑制剂组、消渴方组、消渴方+抑制剂组,每组10只,另取10只SD大鼠作为正常组。造模后消渴方组大鼠予消渴方17g/(kg·d)灌胃,抑制剂组予VIVIT 0.5mg/(kg·d)尾静脉注射,消渴方+抑制剂组予消渴方水煎剂灌胃联合VIVIT尾静脉注射,模型组及正常组给予1.9 ml生理盐水灌胃。5周后检测空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、糖化血清蛋白(GSP)水平及胰腺组织钙离子(Ca^(2+))、钙调磷酸酶(CaN)水平;HE染色观察胰岛病理形态学改变;检测胰腺组织胰岛素及活化T细胞核因子c1(NFATc1)蛋白表达水平及神经元素3(Ngn3)和胰腺十二指肠同源盒因子1(PDX-1)mRNA表达。结果与正常组比较,模型组FBG、GSP水平升高,FINS、CaN、Ca^(2+)、NFATc1、Ngn3 mRNA、PDX-1 mRNA表达均降低(P<0.01),HE染色显示胰岛内细胞数量明显减少,形状不规则,间质增多,部分胰岛组织结构甚至完全萎缩、崩解。与模型组比较,消渴方组各指标均明显改善(P<0.01),HE染色显示胰岛数量明显增多,胰岛呈完整团块状分布,且胰岛内细胞质较丰富。与消渴方组比较,消渴方+抑制剂组FBG、GSP升高,FINS、CaN、Ca^(2+)、NFATc1、Ngn3 mRNA、PDX-1 mRNA表达降低(P<0.05或P<0.01)。结论消渴方可调节血糖、保护胰岛β细胞,其作用机制可能与调节胰腺组织Ca^(2+)/CaN/NFAT信号通路,提高β细胞再生相关转录因子表达有关。