消痰通腑方对结肠癌SW480细胞磷脂酶A2、环氧合酶2表达及细胞生物学行为的影响

目的观察消痰通腑方对结肠癌SW480细胞增殖、迁移的影响,探讨其分子作用机制。方法采用不同浓度消痰通腑方作用结肠癌SW480细胞,CCK8法和平板克隆形成实验检测细胞增殖,Transwell小室实验检测细胞迁移能力,RT-q PCR检测磷脂酶A2(PLA2)和环氧合酶2(COX-2)m RNA表达,Western blot检测PLA2和COX2蛋白表达,RNA干扰技术沉默SW480细胞株中PLA2基因表达。结果消痰通腑方低、高剂量组较对照组结肠癌SW480细胞增殖能力明显减弱(P<0.05),克隆形成率及迁移能力明显下降(P<0.05,P<0.01),PLA2、COX-2 m RNA和蛋白表达均明显下调(P<0.05),并呈浓度依赖性;与质粒对照组和对照组比较,PLA2 sh RNA干扰组细胞PLA2和COX2蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论消痰通腑方可抑制结肠癌SW480细胞增殖和迁移,其机制可能与PLA2及COX-2的表达下调有关。

基于UHPLC-Q-TOF/MS技术快速分析消痰通腑方化学成分

目的探明消痰通腑方的主要化学成分,为方剂药效物质基础研究和临床治疗提供科学依据。方法采用超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱法(UHPLC-Q-TOF/MS)对消痰通腑方化学成分进行鉴定,色谱条件为Waters ACQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱(2.1mm×100 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,柱温30℃,流速0.3 ml/min,进样量1μl,检测波长254 nm;质谱条件为电喷雾离子源(ESI),正、负离子全扫描模式采集质谱数据,根据对照品、自建质谱数据库和在线获得的化合物质谱数据库对色谱峰进行物质鉴定。结果初步鉴定出55个化合物,分别来自黄连、重楼、大黄、天南星、法半夏。结论本文所建立的UHPLC-Q-TOF/MS方法能系统、准确地鉴别消痰通腑方的化学成分,可为该方剂的质量标志物筛选和有效成分研究提供参考。