基于氧化应激及肠道菌群探讨逍遥补肾方对实验性自身免疫性甲状腺炎模型大鼠作用机制的影响

目的通过观察逍遥补肾方对实验性自身免疫性甲状腺炎模型(experimental autoimmune thyroiditis,EAT)大鼠氧化应激及肠道菌群的影响,探讨逍遥补肾方的疗效机制。方法将65只大鼠随机分为正常组10只,造模组55只。造模组采用高碘水喂养联合甲状腺球蛋白皮下注射复刻EAT大鼠模型,造模成功的EAT大鼠随机分为模型组、硒酵母组及逍遥补肾组,每组17只。硒酵母组予25.2 mg/(kg·d)硒酵母片水溶液,逍遥补肾组予11.79 g/(kg·d)逍遥补肾方溶液,正常组、模型组灌胃给予等体积的蒸馏水。连续灌胃8周后,采用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测各组大鼠血清游离三碘甲状腺原氨酸(free triiodothyronine3,FT3)、游离甲状腺素(free thyroxine,FT4)、促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)、甲状腺球蛋白抗体(thyroglobulin antibody,TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(thyroid peroxidase antibody,TPOAb)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malonic dialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)水平,采用免疫荧光检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。收集各组大鼠的粪便进行16S rDNA高通量测序,分析肠道菌群多样性和物种丰度的变化,通过相关性分析筛选逍遥补肾方改善EAT大鼠的相关菌群。结果与正常组相比,模型组大鼠血清TSH、SOD、SOD/MDA、GPx明显下降,TPOAb、TGAb、MDA水平明显升高,ROS的免疫荧光强度明显增强(P<0.01)。给予治疗药物后,逍遥补肾组及硒酵母组的上述指标均较模型组有一定改善(P<0.01或P<0.05)。16S rDNA测序结果显示,逍遥补肾方能够调节厚壁菌门、拟杆菌门等相对丰度调节EAT大鼠的肠道菌群紊乱。脱硫弧菌属及粪球菌属是逍遥补肾组的优势菌群。结论逍遥补肾方能够调节EAT大鼠血清TSH及甲状腺双抗体水平,改善氧化应激状态,其作用机制可能与调节多种肠道菌群失调有关。

补肾健脾方对去卵巢诱导大鼠骨质疏松的作用及其机制研究

目的研究补肾健脾方对去卵巢诱导(OVX)的大鼠骨质疏松的作用及其机制。方法 60只雌性大鼠平均分为6组:假手术组、模型组、中药-低剂量组、中药-中剂量组、中药-高剂量组和西药组。假手术切除大鼠腹腔少量脂肪,其余各组均去除双侧卵巢,其中模型组蒸馏水灌胃,中药组分别低、中、高3个剂量补肾健脾方灌胃,西药组阿仑膦酸钠灌胃。酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清雌二醇(E2)、I型胶原交联C-末端肽(β-CTX)、Ⅰ型前胶原氨基端原肽水平(PINP),双能X线法检测大鼠腰椎骨密度,压缩实验检测腰椎生物力学,苏木素伊红(HE)染色观察腰椎组织形态学,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测腰椎破骨调控因子MMP9、CTSK mRNA及成骨调控因子RUNX2、OPG mRNA相对表达。结果模型组大鼠血清E2明显低于假手术组,而β-CTX、PINP明显高于假手术组,中药-高剂量组和西药组β-CTX、PINP均明显低于模型组。模型组大鼠腰椎骨密度、压缩强度均明显低于假手术组,而中药-高剂量组和西药组骨密度、压缩强度均明显高于模型组。模型组MMP9、CTSK表达较假手术组明显上调,中药-高剂量组和西药组MMP9、CTSK表达较模型组均明显下调;模型组RUNX2、OPG表达较假手术组明显下调,中药-高剂量组RUNX2表达较模型组明显上调。结论补肾健脾方可有效防止OVX诱导的大鼠骨量丢失,其机制可能与下调MMP9、CTSK mRNA,上调RUNX2有关。

健脾补肾温阳方治疗老年糖尿病肾病综合征的疗效及对中医证候评分、血肌酐、尿素氮指标的影响

目的探析健脾补肾温阳方在老年糖尿病肾病综合征患者中的治疗效果,分析该方对中医证候评分、血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)指标的影响。方法选取该院2019年2月—2020年2月收治的82例老年糖尿病肾病综合征患者,根据不同疗法将其分为A组与B组,每组41例,A组予以前列地尔治疗,B组予以前列地尔联合健脾补肾温阳方治疗,对比两组患者的中医证候评分、临床疗效、肾功能指标(SCr、BUN)、血糖水平(空腹血糖、餐后2 h血糖、糖化血红蛋白数)以及不良反应发生情况(恶心、头晕、腹泻、皮疹、发热)。结果 B组治疗后的中医证候评分(12.32±2.18)分,低于A组(15.74±2.71)分,P<0.05;B组的总有效率(90.24%,37/41)高于A组(75.61%,31/41),P<0.05;B组治疗后的SCr、BUN水平(141.16±25.01)μmol/L、(8.03±3.99)mmol/L均低于A组(175.33±26.82)μmol/L、(10.15±4.31)mmol/L,P<0.05;B组治疗后的空腹血糖、餐后2h血糖、糖化血红蛋白水平(7.15±1.85)mmol/L、(8.03±1.74)mmol/L、(6.38±1.16)%均低于A组(8.22±2.03)mmol/L、(10.67±2.16)mmol/L、(7.52±1.23)%,P<0.05;B组的不良反应发生率(12.20%,5/41)与A组(9.76%,4/41)相近,P>0.05。结论健脾补肾温阳方在老年糖尿病肾病综合征患者中的治疗效果显著,可快速缓解患者的临床症状,改善肾功能指标,降低血糖水平,且与单纯西药治疗相比未新增不良反应,值得临床推行。

补肾健脾壮骨方联合唑来膦酸对绝经后骨质疏松症骨代谢及预后的影响探究

目的分析补肾健脾壮骨方联合唑来膦酸对绝经后骨质疏松症患者骨代谢及预后的影响。方法按照入排条件,对2016年12月—2018年12月在医院就诊的绝经后骨质疏松的患者进行筛选入组,共纳入70例患者按入组顺序随机均分为两组,每组35例。对照组使用唑来膦酸,观察组在此基础上服用补肾健脾壮骨方汤治疗。比较两组疗效,分别于治疗前后测定比较两组患者骨密度、骨代谢标志物水平及两组生存质量评分。结果观察组总有效率94.29%(33/35)显著高于对照组(77.14%,27/35)(P<0.05),观察组L2-4及股骨颈BMD较治疗前有升高,且观察组明显高于对照组(P<0.05)。治疗后观察组BGP、PINP明显升高(P<0.05),β-CTX及NTX水平明显降低(P<0.05)。治疗后观察组BGP、PINP明显高于对照组(P<0.05),β-CTX及NTX水平明显低于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组患者SF-36评分表中的各项评分均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论补肾健脾壮骨方联合唑来膦酸对绝经后骨质疏松症患者骨代谢具有良好的改善作用,并能显著改善患者预后。

益气化瘀补肾方联合西药治疗肾虚血瘀型腰椎退行性骨关节炎伴骨质疏松临床观察

目的 探讨益气化瘀补肾方联合西药对腰椎退行性骨关节炎伴骨质疏松患者血清炎性因子、骨代谢标志物、骨密度、定量CT(QCT)的影响及临床疗效。方法 选取2018年10月—2021年10月温岭市中医院门诊及住院的120例肾虚血瘀型腰椎退行性骨关节炎伴骨质疏松患者,随机分为两组,对照组予塞来昔布胶囊、硫酸氨基葡萄糖胶囊、阿法骨化三醇胶囊、碳酸钙D3片、阿仑膦酸钠片治疗,研究组在对照组药物基础上加用益气化瘀补肾方治疗。1个月为1个疗程,共3个疗程。分别在治疗前、后观察患者中医证候评分、视觉模拟(VAS)评分、日本骨科协会评估治疗分数(JOA)评分、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、骨代谢标志物、骨密度、QCT,同时评定患者临床疗效。结果 治疗后,研究组临床疗效优于对照组(P<0.05);研究组TNF-α、IL-6指标低于对照组(P<0.05);研究组β-胶原特殊序列(β-CTX)、总Ⅰ型胶原氨基端延长肽(PINP)、N-端骨钙素(N-MID)指标低于治疗前(P<0.05),低于对照组(P<0.05);研究组BMD、QCT测量值高于对照组(P<0.05)。结论 益气化瘀补肾方联合西药治疗腰椎退行性骨关节炎伴骨质疏松患者安全有效,具有改善炎性反应、抑制骨吸收、改善骨密度等作用。

补肾益气活血化痰方治疗老年全身麻醉后认知障碍及对血清E2、T、Aβ、BNP的影响

目的研究补肾益气活血化痰方治疗老年全身麻醉后认知障碍及对患者血清雌二醇(E2)、睾酮(T)、Tβ-淀粉样蛋白(Aβ)、脑钠肽(BNP)的影响。方法选择医院2017年10月—2018年9月诊治的老年全身麻醉后认知障碍96例作为研究对象,遵照知情同意原则并按照随机数字表法分为两组,每组48例。对照组采用常规西医治疗,观察组在常规西医治疗基础上采用补肾益气活血化痰方治疗。比较两组患者的治疗效果,简易精神状态量表(MMSE)与蒙特利尔认知评估量表(MoCA),患者血清E2、T、Aβ、BNP水平以及不良反应发生情况。结果观察组总有效率显著高于对照组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前两组患者的MMSE、MoCA评分差异无统计学意义(P>0.05),两组治疗后1周、2周MMSE、MoCA评分均有改善,治疗后1周两组间MMSE、MoCA评分差异无统计学意义(P>0.05),治疗后2周观察组MMSE、MoCA评分显著优于对照组(P<0.05)。治疗前两组患者的血清E2、T、Aβ、BNP差异无统计学意义(P>0.05),治疗后1周、2周两组患者的血清E2、T、Aβ、BNP均有改善,但治疗后1周两组间各指标差异无统计学意义(P>0.05),治疗后2周观察组的血清E2、T显著高于对照组,血清Aβ、BNP显著低于对照组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。观察组不良反应发生率为12.5%(6/48),对照组为10.4%(5/48),组间无显著性差异(P>0.05)。结论补肾益气活血化痰方治疗老年全身麻醉后认知障碍可获得满意的临床效果,能够降低患者的血清Aβ、BNP水平、升高血清E2、T水平,改善患者的认知功能,是有效安全的治疗方案。

补肾活血方联合常规西药治疗射血分数中间值心衰气虚血瘀证患者129例随机对照临床观察

目的评价补肾活血方治疗射血分数中间值心衰(HFmrEF)气虚血瘀证的临床疗效。方法将HFmrEF气虚血瘀证患者277例随机分为治疗组139例、对照组138例,对照组给予常规西药治疗,治疗组在对照组基础上加用补肾活血方,两组均治疗8周。比较治疗前后两组患者左心室射血分数(LVEF)、N末端B型利钠肽原(NT-pro BNP)水平、心功能分级、明尼苏达心力衰竭生活质量评分、焦虑评分、抑郁评分,以及治疗后6个月主要不良心血管事件发生率、再住院率情况。结果治疗组脱落10例、对照组脱落6例,实际完成治疗组129例、对照组132例。与本组治疗前比较,两组患者治疗后LVEF升高、NT-pro BNP水平降低(P<0.05);治疗后治疗组与对照组比较,LVEF升高、NT-pro BNP水平降低(P<0.05)。治疗组心功能分级改善总有效率(97.67%,126例/129例)高于对照组(84.09%,111例/132例)(P<0.05)。治疗后两组患者明尼苏达心力衰竭生活质量评分、焦虑评分、抑郁评分均较治疗前降低(P<0.05),且治疗组上述评分均低于对照组(P<0.05)。治疗后6个月两组患者均无死亡事件发生,治疗组主要不良心血管事件发生率(25.58%,33例/129例)与对照组(33.33%,44例/132例)比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗组再住院率(14.73%,19例/129例)低于对照组(30.30%,40例/132例)(P<0.05)。结论补肾活血方可增加HFmrEF气虚血瘀证患者的LVEF,降低NT-pro BNP,提高生活质量,改善患者焦虑抑郁状态,降低再住院率。

补肾健脾方对乙肝病毒感染者免疫功能的影响

目的:观察乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)感染对机体免疫功能的影响,研究补肾健脾方对HBV感染者免疫功能的影响。方法:(1)将招募的慢性HBV感染者及健康志愿者分为实验组和对照组,采集各组研究对象的外周血,分离血清,ELISA法检测两组血清中γ干扰素(IFN-γ)、α干扰素(IFN-α)、白细胞介素-2(IL-2)、IL-12、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC),流式细胞术(FCM)检测两组的PBMC中自然杀伤细胞(NK)、辅助性T细胞1(Th1)、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)数量及胞内IFN-γ、IFN-α、IL-2、IL-12、TNF-α、干扰素基因刺激蛋白(STING)、T盒子转录因子(T-BET)、信号传导转录激活因子4(STAT4)蛋白表达水平。(2)制备大鼠含药血清,通过WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒筛选含药血清干预PBMC的安全剂量;以HBV感染者PBMC为实验对象将其分为3个组,空白对照组、空白血清组和含药血清组,干预48 h后,ELISA法检测细胞培养上清中细胞因子IFN-γ、IFN-α、IL-2、IL-12、TNF-α含量,FCM检测各组PBMC中CTL、Th1、NK细胞数量及胞内细胞因子水平;RT-qPCR法检测各组细胞因子mRNA表达。结果:(1)与健康志愿者相比,HBV感染者血清中IFN-γ、IL-12含量和PBMC中CTL、Th1、NK细胞数量明显降低(P<0.05);HBV感染者PBMC胞内IFN-γ、IL-12、TNF-α、STAT4、T-BET较健康志愿者合成减少(P<0.05)。(2)与空白血清组相比,补肾健脾方含药血清组PBMC细胞培养上清中IFN-γ、IL-12含量明显升高(P<0.05);补肾健脾方含药血清组PBMC中CTL、Th1、NK细胞数量以及胞内IFN-γ蛋白表达水平较空白血清组明显升高(P<0.05);与空白血清组相比,补肾健脾方含药血清可明显上调Ifnγ、IL2、Il12、TnfαmRNA表达(P<0.05)。结论:补肾健脾方可通过上调CTL、Th1、NK细胞数量,促进IL-12分泌,进而促进IFN-γ的合成与分泌,从而恢复HBV感染者PBMC的免疫功能。

补肾愈骨方辅助治疗肝肾不足、筋脉失养证慢性踝关节外侧不稳术后功能康复患者20例回顾性队列研究

目的分析补肾愈骨方辅助治疗肝肾不足、筋脉失养证慢性踝关节外侧不稳(CLAI)术后功能康复患者的有效性及安全性。方法回顾性收集40例接受外踝韧带修复手术治疗的肝肾不足、筋脉失养证CLAI患者的临床资料。根据是否服用补肾愈骨方分为治疗组和对照组各20例,对照组患者术后进行功能康复,治疗组在此基础上于术后第3、4周服用补肾愈骨方汤剂。分别于术前、术后3个月记录患者术侧踝关节美国足踝协会(AOFAS)量表评分,术侧踝关节屈伸活动度、内外翻活动度,术侧踝关节磁共振影像学评分,中医证候评分。检测患者术前及术后4周的肝肾功能,并记录治疗期间不良事件。结果与术前比较,两组患者术后3个月AOFAS量表评分升高、中医证候评分均降低(P<0.01),治疗组术侧踝关节内外翻活动度、影像学评分均升高(P<0.05或P<0.01),对照组术侧踝关节屈伸活动度降低(P<0.05)。术后3个月,治疗组AOFAS量表评分高于对照组,中医证候评分低于对照组(P<0.05或P<0.01)。治疗组报告胃肠道反应2例,停药后自行缓解,肝肾功能指标未见异常。结论补肾愈骨方可以促进肝肾不足、筋脉失养证CLAI患者术后踝关节功能康复,改善临床症状,且安全性较好。

补肾活血方对帕金森病模型小鼠回肠组织TLR/NF-κB通路及肠道菌群的影响

目的从肠道菌群探讨补肾活血方治疗帕金森病(PD)的可能作用机制。方法将72只雄性C57/BL6J小鼠随机分为空白组、模型组、美多芭组及补肾活血方低、中、高剂量组,每组12只。空白组小鼠腹腔注射10 ml/kg生理盐水,其余各组小鼠采用腹腔注射浓度为3 mg/ml的1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)30 mg/kg诱导PD小鼠模型,均每天1次,连续7天。造模成功后,补肾活血方低、中、高剂量组分别给予补肾活血方7.5、15、30 g/(kg·d)灌胃,美多芭组给予多美多芭片112.5 mg/(kg·d)灌胃,空白组和模型组予15 ml/(kg·d)蒸馏水灌胃,均每天灌胃1次,连续14天。采用爬杆实验、转棒实验、抓力实验和负重游泳实验评估小鼠行为学指标;16S rRNA高通量测序技术分析各组小鼠肠道菌群改变;Western Blot法测定小鼠回肠组织Toll样受体(TLR)/核因子κB(NF-κB)通路炎症因子[包括Toll样受体2(TLR2)、Toll样受体4(TLR4)、NF-κB、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素17(IL-17)]蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组小鼠爬杆触底时间延长,抓力减小,转棒持续时间和游泳持续时间缩短,回肠组织中TLR2、TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-17蛋白表达均升高(P<0.01)。与模型组比较,美多芭组和补肾活血方低、中、高剂量组爬杆触底时间缩短,抓力增加,美多芭组和补肾活血方高剂量组转棒持续时间延长,回肠组织TLR2、TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-17蛋白表达均降低,而仅有补肾活血方高剂量组游泳持续时间延长(P<0.05或P<0.01)。与补肾活血方低剂量组比较,补肾活血方中、高剂量组爬杆触底时间缩短(P<0.05或P<0.01);补肾活血方高剂量组抓力增加,TLR2、TLR4、IL-17蛋白表达降低(P<0.05或P<0.01)。肠道菌群结果显示,与空白组比较,模型组Dominance指数、Pielou_e指数、Shannon指数、Simpson指数差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,美多芭组Shannon指数、Chao1指数、Observed_otus指数,以及补肾活血方高剂量组Chao1指数、Observed_otus指数、Dominance指数、Pielou_e指数、Shannon指数、Simpson指数差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。在门水平上,各组差异具有统计学意义的菌门相对丰度类别包括变形菌门、拟杆菌门、厚壁菌门(P<0.05或P<0.01);在属水平上,各组差异具有统计学意义的菌属相对丰度类别包括Muribaculaceae、阿克曼菌属、幽门螺杆菌(P<0.05或P<0.01)。结论补肾活血方治疗PD的可能作用机制是通过重构紊乱的肠道菌群结构,减轻炎症反应进而达到改善PD运动功能的目的。

补肾健脾方含药血清对乙型肝炎病毒感染后树突状细胞亚群的影响

目的 探讨补肾健脾方对不同载量乙型肝炎病毒(HBV)感染后树突状细胞(DC)亚群抑制状态的影响。方法 分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),采用SD大鼠制备空白及补肾健脾方含药血清,采用HepG 2.2.15细胞株制备HBV病毒液。分为低病毒刺激(病毒浓度为1×10^(5)IU/孔)和高病毒刺激(病毒浓度为1×107IU/孔)实验。低病毒刺激实验每组设6个复孔,每孔细胞为1×10^(6),分为正常组一、低病毒组(病毒浓缩液1μl)、空白血清组一(病毒浓缩液1μl+10%空白血清200μl)、补肾健脾方含药血清组一(病毒浓缩液1μl+10%补肾健脾方含药血清200μl);高病毒刺激实验每组设6个复孔,每孔细胞为1×10^(6),分为正常组二、高病毒组(病毒浓缩液100μl)、空白血清组二(病毒浓缩液100μl+10%空白血清200μl)、补肾健脾方含药血清组二(病毒浓缩液100μl+10%补肾健脾方含药血清200μl)。两个实验均在干预12、24、36、48 h时采用流式细胞仪检测各组DC亚群髓样树突状细胞(mDC)和浆细胞样树突状细胞(pDC)含量。结果低病毒刺激实验中,补肾健脾方含药血清组一各时间mDC、pDC含量均高于同时间点空白血清组一、低病毒组(P<0.05);补肾健脾方含药血清组一mDC含量本组各时间点比较差异均无统计学意义(P>0.05),pDC含量12 h、24 h时较本组36 h、48 h低(P<0.05)。高病毒刺激实验中,补肾健脾方含药血清组二各时间mDC、pDC含量均高于同时间点空白血清组二和高病毒组(P<0.05);补肾健脾方含药血清组二pDC含量12 h、24 h时较本组36 h、48 h低(P<0.05),mDC含量36 h时较12 h、24 h低,48 h时较12 h低(P<0.05)。不同载量HBV刺激12、24、36、48 h时,高病毒组及低病毒组mDC、pDC含量均随干预时间延长而降低(P<0.05);高病毒组各时间mDC含量均低于同时间点低病毒组(P<0.05),pDC含量仅12 h时低于低病毒组(P<0.05)。结论 补肾健脾方含药血清可改善HBV对DC亚群的抑制,提高mDC、pDC含量进而增强机体对HBV的免疫应答。

补肾益髓方对帕金森病模型小鼠脑组织NLRP3炎症小体激活相关蛋白表达的影响

目的观察补肾益髓方对帕金森病(PD)模型小鼠运动症状的影响并探讨其可能的作用机制。方法34只C57BL/6J小鼠随机选取10只作为正常组,其余24只予MPTP溶液30 mg/(kg·d)连续5天腹腔注射制备PD模型,将造模成功的24只小鼠随机分为模型组和补肾益髓方组各12只。补肾益髓方组小鼠予补肾益髓方配方颗粒水溶液(浓度0.22 g/ml)0.1 ml/10 g灌胃,正常组及模型组小鼠予等体积生理盐水灌胃,各组均每天1次,连续14天。各组小鼠采用转棒疲劳试验进行行为学评价,尼氏染色观察中脑黑质纹状体病理学形态,免疫组化检测中脑黑质纹状体酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞表达,Western Blot法检测小鼠脑组织NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体激活相关蛋白[包括NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、信号转接凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]表达。结果与正常组比较,模型组小鼠在转棒上停留时间显著缩短,中脑黑质纹状体TH阳性细胞表达减少,脑组织中IL-1β、TNF-α、NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达升高(P<0.01);尼氏染色结果显示,模型组小鼠黑质纹状体区神经元减少、萎缩、紊乱,胞体变小,尼氏小体减少。与模型组比较,补肾益髓方组小鼠转棒上停留时间延长,黑质纹状体TH阳性细胞表达增多,脑组织中IL-1β、TNF-α、NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达下降(P<0.05);尼氏染色结果显示,补肾益髓方组小鼠黑质纹状体区大部分神经元细胞结构完备,核固缩、破裂现象减少,尼氏小体数量增多。结论补肾益髓方可改善PD的运动症状,其作用机制可能与调节NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡有关。

健脾补肾方对辐射损伤模型小鼠脾脏自噬小体及PI3K/Akt/mTOR通路的影响

目的探讨健脾补肾方对辐射所致免疫功能损伤的影响和可能作用机制。方法50只昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、胸腺肽组和健脾补肾方大、小剂量组,每组10只。除正常组外其余各组小鼠采用6.0 Gy X线一次性全身照射建立辐射损伤小鼠模型。造模成功后健脾补肾方小、大剂量组小鼠分别给予13 g/(kg·d)、26 g/(kg·d)健脾补肾方灌胃,胸腺肽组小鼠给予胸腺肽肠溶片11.7 mg/(kg·d)灌胃,正常组、模型组小鼠用0.9%氯化钠溶液0.1 ml/(10 g·d)灌胃。各组均每日灌胃1次,连续7天。最后一次灌胃后,小鼠称重,处死后分离小鼠脾脏,称重并计算脾脏指数;ELISA法检测脾脏组织干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)含量;透射电镜观察脾脏自噬小体;实时荧光定量PCR检测脾脏磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)mRNA表达水平;Western blot法检测并计算脾脏PI3K、Akt、mTOR蛋白表达及自噬相关蛋白微管相关轻链蛋白3(LC3)、Beclin1、p62蛋白表达。结果与正常组比较,模型组小鼠体质量、脾脏指数均显著下降(P<0.01),脾脏IFN-γ、IL-2含量显著降低(P<0.01),脾脏PI3K、Akt、mTOR mRNA及蛋白表达水平均显著下降(P<0.01),Beclin1蛋白表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值显著升高(P<0.01),p62蛋白表达水平显著下降(P<0.01),透射电镜显示脾脏自噬小体数量明显增多,细胞结构损伤程度重。与模型组比较,各药物干预组小鼠上述各指标均显著改善(P<0.05或P<0.01),健脾补肾方大剂量组小鼠脾脏线粒体可见部分完整脊,自噬体较多;健脾补肾方小剂量组、胸腺肽组小鼠脾脏线粒体结构较完整,自噬体较少。健脾补肾方小剂量组各指标改善效果优于健脾补肾方大剂量组(P<0.05或P<0.01),且与胸腺肽组各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论健脾补肾方可能通过增强脾脏PI3K/Akt/mTOR信号通路,抑制辐射诱导的自噬过度活化,从而减轻脾脏结构损伤,促进免疫功能的恢复,并以小剂量效佳。

补肾助孕方对黄体功能不全模型大鼠垂体PKC/MAPK/ERK信号通路及黄体功能的影响

目的探讨补肾助孕方治疗黄体功能不全(LPD)的可能作用机制。方法 40只雌性育龄SD大鼠随机分为正常组、模型组、补肾助孕方组、H-7组、H-7+补肾助孕方组,每组8只。除正常组外,其余各组大鼠均给予米非司酮混悬液建立LPD模型。补肾助孕方组(2.4g/100g灌胃)、H-7组(0.005mg/只腹腔注射)、H-7+补肾助孕方组(给药同补肾助孕方组和H-7组)均于第4个性周期(D13)开始,于D13、D17的16:00,及D14、D18的8:00给药,模型组、正常组均于以上给药时间点灌胃(1.2ml/100g)和腹腔注射(20μl/只)生理盐水。末次给药6h后,用ELISA法检测血清促黄体生成素(LH)、促卵泡生成素(FSH)含量,并计算FSH/LH值;HE法观察卵巢组织病理及卵泡、黄体数;Western blot法检测垂体组织蛋白激酶C(PKC)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白酶(p-p38MAPK)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)蛋白水平。结果与正常组比较,模型组和H-7+补肾助孕方组大鼠卵巢组织闭锁卵泡增多,黄体细胞发育不良,血清LH含量升高(P<0.05),卵巢组织卵泡数及黄体数,血清FSH含量及FSH/LH值,垂体组织PKC、p-p38MAPK、p-ERK1/2蛋白水平均降低(P<0.05);与模型组和H-7+补肾助孕方组比较,补肾助孕方组大鼠卵巢内闭锁卵泡减少,黄体细胞发育有所改善,血清LH含量降低(P<0.05),卵巢组织卵泡数及黄体数,血清FSH含量及FSH/LH值,垂体组织PKC、p-p38MAPK、p-ERK1/2蛋白水平升高(P<0.05)。结论补肾助孕方可激活垂体组织PKC/MAPK/ERK通路,促进血清FSH分泌,从而改善黄体功能。

补肾活血方治疗早发性卵巢功能不全患者围绝经期症状的临床预测模型构建

目的构建补肾活血方治疗早发性卵巢功能不全(POI)患者围绝经期症状的临床预测模型。方法回顾性收集经补肾活血方治疗6个月的伴有围绝经期症状的POI患者临床资料,包括年龄、生育史(妊娠史、分娩史、流产史)、月经史(初潮年龄、月经周期、经期、经量)、婚姻状况、确诊年龄、病程、血清生殖内分泌指标[卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、催乳素(PRL)、孕酮(P)、睾酮(T)、抗苗勒管激素(AMH)]、超声检查相关指标[卵巢动脉收缩期血流峰值流速(PSV)、血流阻力指数(RI)]、临床症状等。运用改良库珀曼(Kupperman)评分将患者分为治疗有效组和无效组。采用最小绝对收缩选择算子(LASSO)回归分析筛选影响补肾活血方对POI患者围绝经期症状治疗结局的因素,并根据筛选结果构建多因素Logistic回归模型及筛选独立预测因子。通过Hosmer-Lemeshow检验评价模型拟合优度,并采用受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)、校准曲线、临床决策曲线(DCA)分别评价模型的区分度、校准度及临床影响。结果在接受补肾活血方治疗的204例伴有围绝经期症状的POI患者中,有效组152例,无效组52例。LASSO回归分析筛选出婚姻状况、病程、经期、FSH、LH、AMH、卵巢动脉PSV共7个变量为影响疗效的因素。通过多因素Logistic回归分析,初步判断病程(2.44±1.61)年、FSH水平25~40 U/L、AMH水平(0.85±0.28)ng/ml、卵巢动脉PSV[8.50(7.00,10.38)]cm/s、经期延长、经期缩短为补肾活血方治疗POI患者围绝经期症状的独立影响因素。构建出补肾活血方治疗POI患者围绝经期症状的临床预测模型,模型的AUC为0.78;DCA分析得到预测概率为60%时,则每100例患者接受治疗后,约有50人可获得较好疗效;校准曲线预测概率为30%~85%时,模型预测曲线与实际观测曲线较为接近。结论构建出的临床预测模型提示补肾活血方适合病程长、基础卵巢功能较好、经期紊乱的POI伴围绝经期症状患者。此模型有助于调整患者就医预期及区别优势人群,可为补肾活血方精准化治疗POI围绝经期症状提供思路。

补肾化痰方对肥胖型多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢组织NLRP3/ASC2/Caspase-1炎症小体信号通路的影响

目的探讨补肾化痰方治疗肥胖型多囊卵巢综合征(PCOS)的可能作用机制。方法采用来曲唑联合高脂乳剂制备肥胖型PCOS模型,并将造模成功的99只SD大鼠随机分为模型组19只,二甲双胍组及补肾化痰方低、中、高剂量组各20只,另设空白组23只。补肾化痰方低、中、高剂量组分别给予补肾化痰方16.65、41.63、83.25 g/(kg·d)灌胃,二甲双胍组给予盐酸二甲双胍片300 mg/(kg·d)灌胃,模型组和空白组给予5 ml/kg蒸馏水灌胃,各组均每日1次,共灌胃21天。观察各组大鼠卵巢组织病理情况,ELISA法检测血清睾酮(T)及游离脂肪酸(FFAs),Western blotting法检测卵巢组织NOD样受体蛋白3(NLRP3)、含CARD结构域的凋亡相关颗粒样蛋白2(ASC2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)蛋白表达水平,免疫组化染色法检测卵巢组织白细胞介素1受体(IL-1R)、核因子κB(NF-κB)阳性产物。结果与空白组比较,模型组大鼠卵巢内基本未见优势卵泡生长,血清T、FFAs,卵巢组织IL-1R、NF-κB平均光密度及Caspase-1、NLRP3、ASC2蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,补肾化痰方高、中剂量组及二甲双胍组大鼠卵巢可见明显的黄体或生长卵泡,卵巢组织NLRP3、Caspase-1、ASC2蛋白表达显著下调;二甲双胍组、补肾化痰方高剂量组血清T、FFAs含量显著降低,IL-1R、NF-κB平均光密度显著降低(P<0.05或P<0.01)。补肾化痰方各剂量组及二甲双胍组Caspase-1、NLRP3、ASC2蛋白表达及IL-1R、NF-κB平均光密度比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论补肾化痰方可能通过抑制卵巢组织NLRP3/ASC2/Caspase-1炎症小体信号通路治疗肥胖型PCOS,且对该通路的调节未见明显量效关系。

补肾泄浊化瘀通络方调控膜性肾病足细胞转分化保护肾功能机制研究

目的:研究补肾泄浊化瘀通络方对阳离子化牛血清白蛋白(Cationized Bovine Serum Albumin,C-BSA)诱导的膜性肾病(Membranous Nephropathy,MN)大鼠肾保护作用及对MN足细胞转分化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)的调节作用。方法:SD大鼠采用C-BSA尾静脉注射法制备MN大鼠模型,造模成功后随机分为模型对照组、盐酸贝那普利10 mg/kg组、补肾泄浊化瘀通络方10.2、21.3、42.6 g/kg组,另设正常对照组,各组灌胃给药相应药物或蒸馏水,1次/d,给药4 w后取材检测。采用光镜(MASSON染色、PAS染色)、电镜、IgG免疫荧光进行肾组织病理观察;记录大鼠24 h尿蛋白定量(24-UTP)、血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)含量;应用免疫组化及Real-time PCR法检测肾组织突触足蛋白(Synaptopodin)、转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白及mRNA的表达情况。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠出现较为明显的肾组织病理损伤,肾小球基底膜不均匀增厚,上皮下免疫复合物沉积伴特有的“钉突”样改变,IgG弥漫性、条带状沉积于基底膜区;24-UTP、TG、TC含量明显升高(P<0.05),血清TP、ALB含量明显降低(P<0.05),肾组织足细胞标志物Synaptopodin蛋白及mRNA表达下调,EMT相关标志物TGF-β1蛋白及mRNA表达上调(P<0.05);与模型对照组比较,补肾泄浊化瘀通络方10.2、21.3、42.6 g/kg组明显减轻MN模型大鼠肾组织损伤程度,明显降低24-UTP、TG、TC含量(P<0.05),增加血清TP、ALB含量(P<0.05),上调肾组织Synaptopodin蛋白及mRNA表达,下调TGF-β1蛋白及mRNA表达。结论:补肾泄浊化瘀通络方对C-BSA致MN大鼠具有肾保护作用,可能与其能够上调肾组织中Synaptopodin表达,下调TGF-β1表达,抑制足细胞EMT、修复足细胞损伤有关。

郑玉玲运用补肾护骨方治疗恶性肿瘤骨转移经验

总结郑玉玲教授运用补肾护骨方治疗恶性肿瘤骨转移的临证经验。认为虚、毒、痰、湿、瘀是本病主要发病因素,肾精亏虚、癌毒凝骨为其核心病机。晚期肿瘤患者正气大衰,肾精亏虚,骨髓失养,癌毒、痰湿、瘀血相互搏结,乘虚而入,聚于骨骼,发为骨转移。临证运用自拟补肾护骨方补肾填精、护骨解毒,并根据病证特点加以化裁,疗效确切。

健脾补肾清肠方对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠组织IL-6/JAK2/STAT3信号通路的影响

目的探讨健脾补肾清肠方治疗溃疡性结肠炎的可能作用机制。方法采用三硝基苯磺酸+乙醇灌肠法建立溃疡性结肠炎大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组和健脾补肾清肠方低、中、高剂量组,另设正常组,每组10只。造模后健脾补肾清肠方低、中、高剂量组分别给于健脾补肾清肠方混悬液3.4、6.8、13.6g/(kg·d)灌胃,正常组和模型组给予蒸馏水1ml/(100g·d)灌胃。10天后取结肠组织进行病理学观察,ELISA法检测血清和结肠组织白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量,RT-qPCR法检测结肠组织IL-6 mRNA表达,Western blot法检测结肠组织Janus激酶2(JAK2)、信号转导及转录激活因子3(STAT3)蛋白及其磷酸化蛋白的表达水平。结果病理结果显示,正常组大鼠结肠组织黏膜结构完整,腺体排列整齐;模型组结肠黏膜结构破坏严重,腺体排列紊乱或缺失,可见大量炎性细胞浸润;健脾补肾清肠方高剂量组结肠腺体破坏较轻,结构基本恢复正常,而健脾补肾清肠方中、低剂量组黏膜少量恢复,有部分炎性细胞的浸润。与正常组比较,模型组大鼠结肠组织及血清中IL-6、IL-1β、IL-8和TNF-α含量,结肠组织IL-6 mRNA表达,p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3值均显著增高(P<0.01);与模型组比较,健脾补肾清肠方低、中、高剂量组上述指标均不同程度降低(P<0.05或P<0.01),且以健脾补肾清肠方高剂量组各指标改善最明显(P<0.05或P<0.01)。结论健脾补肾清肠方能够减轻溃疡性结肠炎大鼠结肠组织炎症反应,修复受损黏膜,抑制结肠组织IL-6/JAK2/STAT3信号通路可能是其作用机制之一。

益气健脾补肾生血方联合小剂量铁剂治疗小儿缺铁性贫血患儿的临床疗效

目的探讨益气健脾补肾生血方联合小剂量铁剂治疗小儿缺铁性贫血患儿的临床疗效。方法选取2019年1月至2020年1月就诊于保定华医中医医院的120例小儿缺铁性贫血患儿作为研究对象,按随机数字表法分为对照组与观察组,各60例。对照组患儿采用右旋糖酐铁口服液治疗,观察组患儿在对照组治疗基础上采用益气健脾补肾生血方治疗,比较两组治疗效果。结果观察组治疗有效率93.33%,显著高于对照组83.33%,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患儿治疗前血红蛋白(Hb)、红细胞(RBC)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组Hb、RBC、MCV、MCHC明显升高,且观察组患儿Hb、RBC、MCV、MCHC显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患儿治疗前转铁蛋白饱和度(TSAT)、血清铁(SI)比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组TSAT、SI明显升高,且观察组患儿TSAT、SI优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患儿不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论益气健脾补肾生血方联合小剂量铁剂治疗小儿缺铁性贫血临床疗效显著。