基于UPLC特征图谱的苦杏仁、桃仁及甜杏仁药材鉴别研究

目的采用超高效液相色谱法建立3种蔷薇科种子类药材的特征图谱,并结合化学计量学进行分析,为甜杏仁、苦杏仁、桃仁的鉴别及质量控制提供依据。方法选择Agilent ZORBAX SB-Aq(2.1 mm×100 mm,1.8μm)为色谱柱,以乙腈为流动相A,0.2%磷酸溶液为流动相B进行梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(-1),柱温为25℃,检测波长为210 nm,共采集3种蔷薇科药材35批,建立特征谱图并进行相似度评价,结合聚类分析、正交偏最小二乘法判别分析对苦杏仁、甜杏仁、桃仁的化学成分进行研究。结果3种蔷薇科种子类药材的特征图谱具有明显差异,可通过峰2、峰4区分苦杏仁、甜杏仁和桃仁;采用质谱指认结合相关文献研究初步指认了特征图谱中的5种成分,并通过对照品对比进一步指认其中2种成分为苦杏仁苷和野黑樱苷;通过聚类分析能准确区分3种药材,且其种内相似度较高,种间相似度较低;正交偏最小二乘判别分析结果与特征图谱分析、聚类分析一致,并筛选出苦杏仁苷为3种药材的差异性标志物。结论建立的分析方法操作简便,可快速、准确区分苦杏仁、甜杏仁、桃仁,为3种蔷薇科药材的鉴别及质量控制提供参考。

苦杏仁的药理作用和临床应用研究概况

苦杏仁是中医治疗中一味常用的中药,具有止咳、平喘、化痰等功效,对肺系疾病具有良好的疗效。其药理作用广泛,包括止咳化痰、免疫调节、抗炎、抗肿瘤等。临床与动物实验研究显示,其有效成分、药对以及方剂均对呼吸系统疾病具有显著的治疗作用,现基于以上几点对目前苦杏仁治疗呼吸系统疾病的研究概况进行综述,为其临床治疗及研究提供参考。

基于网络药理学与分子对接及实验验证探讨苦杏仁-桔梗药对治疗肺癌的作用机制

目的:运用网络药理学方法及分子对接初步预测苦杏仁-桔梗药对治疗肺癌的主要靶点及其作用机制,再通过体外实验验证部分关键靶点及其通路。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、SwissTargetPrediction、GeneCard数据库获取活性成分和靶点,利用UniProt数据库将靶点标准化,通过在线veny2.1绘制韦恩图。运用STRING数据库绘制靶点的PPI网络图,使用Cytoscape3.8.2软件建立“药物-成分-靶点”“核心蛋白-蛋白”网络关系图,利用Matescape数据库进行GO和KEGG通路富集分析。通过PyMOL、AutoDockTool 1.5.6软件进行分子对接。用不同浓度的小鼠含药血清培养Lewis肺癌细胞,CCK8检测细胞活性,流式细胞Annen V-FITC/PI标记法检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR技术、Western Blot检测Lewis肺癌细胞中SRC蛋白表达水平。结果:获得苦杏仁-桔梗有效活性成分23个,靶点为227个,关键靶点为SRC,KEGG富集程度较高的为PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路等。分子对接显示结合能良好。体外实验显示苦杏仁-桔梗药对可抑制Lewis肺癌细胞增殖,诱导其凋亡,并能下调SRC蛋白表达水平。结论:苦杏仁-桔梗药对能抑制SRC的表达,可能通过调控PD-1和PD-L1通路、Ras信号通路、PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路降低肿瘤细胞的侵袭、迁移、增殖、分化等能力,增强机体免疫力,从而治疗肺癌。

麻黄-杏仁药对配方颗粒指纹图谱的建立与多成分含量测定

建立麻黄-杏仁药对配方颗粒的HPLC指纹图谱及指标性成分含量测定方法。采用Zorbax SB-C18(4.6 mm×150.0 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾(0.1%磷酸+0.1%三乙胺)溶液为流动相,梯度洗脱,流速为1 mL/min,检测波长为210 nm,柱温为25℃。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)”建立10批样品的HPLC指纹图谱,并进行相似度评价及4个指标性成分的含量测定。结果显示,建立的指纹图谱及多指标成分含量测定方法符合方法学考察要求。指纹图谱共标定了9个色谱峰,指认了其中4种成分;10批麻黄-杏仁药对配方颗粒与对照图谱的相似度均大于0.900,其中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、盐酸甲基麻黄碱和苦杏仁苷4种成分的平均含量分别为56.09μg/g、44.28μg/g、51.69μg/g及5.96μg/g。本研究建立的HPLC指纹图谱及4种成分同时测定的方法稳定可靠、重现性好,可用于麻黄-杏仁药对配方颗粒的质量控制。

电子束辐照灭菌对苦杏仁和桔梗有效成分及微生物负载的影响

目的研究不同剂量电子束辐照处理苦杏仁和桔梗的灭菌效果及对其有效成分的影响。方法采用不同剂量0、5、10、15、20 kGy电子束辐照处理苦杏仁碎和桔梗粉,并分别贮藏于普通仓库和万级洁净环境,观察其灭菌效果、灭菌效果稳定性及对其有效成分的影响。结果苦杏仁碎和桔梗粉分别经5 kGy和10 kGy电子束辐照处理后符合卫生学标准要求;在普通仓库和洁净区贮藏9个月苦杏仁碎和桔梗粉灭菌效果稳定性均较好;经20 kGy电子束辐照处理,苦杏仁碎和桔梗粉所含有效成分均无明显变化。结论实际生产应用中,当苦杏仁碎初始含菌量≤10^(6)cfu/g,桔梗粉初始含菌量≤10^(7)cfu/g时,建议电子束辐照剂量分别为5 kGy和10 kGy,该剂量既不会对有效成分产生影响,且存放9个月仍符合卫生学标准要求。

《金匮要略》杏子汤考

《金匮要略·水气病脉证并治》论述了水邪致病之症状及治法,但在杏子汤条文中,杏子汤有名而无方。吴谦、刘渡舟、魏荔彤、李今庸等认为杏子汤为麻黄杏仁甘草汤;林亿、高保衡、宋奇等认为,杏子汤为麻杏甘石汤;曹颖甫、何任等认为,杏子汤为麻杏薏甘汤;胡希恕认为,杏子汤为大青龙汤。风水是由于人体阳气不足,风邪侵袭腠理,导致汗孔功能失司,水液代谢异常的疾病,病位在肌表,为虚实夹杂之证,有完整的病程进展:第一个阶段病机为风寒湿郁于表,阳气闭而化热,治疗当以祛邪为主,用大青龙汤,以麻黄、桂枝等外散风水,用石膏内透里热;第二阶段病机为表气闭郁,内热炽盛,治疗当选越婢汤,发越肌腠郁阳,宣肺行水;第三个阶段病机为表虚水停,里阳不足,治疗当塞源节流,以防己黄芪汤疏风利水,健脾实表。故杏子汤实际为方剂合集,即大青龙汤、越婢加杏仁汤、防己黄芪加杏仁汤的统称。

《神农本草经》与经方应用之苦杏仁篇

《神农本草经》载苦杏仁功效为“主咳逆上气,雷鸣,喉痹,下气,产乳,金疮,寒心,奔豚”。以《神农本草经》为纲、《伤寒杂病论》之经方为目,探讨苦杏仁的不同功效与配伍。苦杏仁主咳逆上气,常配伍桂枝、麻黄、厚朴,以桂枝加厚朴杏子汤、麻黄汤为代表方;主雷鸣,常配伍干姜、细辛、五味子,以厚朴麻黄汤为代表方;主喉痹,常配伍当归、桂枝,以续命汤为代表方;主下气,常配伍石膏、甘草,以麻黄杏仁甘草石膏汤为代表方;主产乳,乳汁不下,苦杏仁能通之;主金疮,金伤成疮,苦杏仁能敛之;主寒心奔豚,苦杏仁主通肺气,水为金之子,金母可训子逆。除《神农本草经》记载的功效外,张仲景运用杏仁配伍不同药物亦有新的发挥,如配伍白术、薏苡仁、赤小豆以祛湿行水,代表方为麻黄加术汤、麻黄杏仁薏苡甘草汤、麻黄连翘赤小豆汤;配伍火麻仁、枳实以润肠通便,代表方为麻子仁丸;配伍大黄、虫、矾石以润燥养血,代表方为大黄虫丸、矾石丸。

炮制对甘遂、牛膝、苦杏仁特殊毒性及药效的影响

炮制前后毒理学研究表明，经炮制可降低甘遂、牛膝、苦杏仁对ＥＢ病毒早期抗原的激活作用，降低甘遂的皮肤刺激作用、二阶段皮肤肿瘤促进作用及峻泻作用。减毒同时可保留药效或增效。

苦杏仁和桔梗祛痰作用的配伍研究

目的研究苦杏仁、桔梗及其配伍的祛痰作用,并确定其最佳配伍比例。方法将动物分为苦杏仁组、桔梗组以及不同配伍比例组。从大鼠气管插入毛细管,记录气管的排痰量;制备脂多糖致大鼠肺黏液高分泌模型,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定肺泡灌洗液(BLAF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-8(IL-8)水平,采用阿辛蓝-过碘酸雪夫染色(AB-PAS),镜下检测杯状细胞分泌黏蛋白,采用PV-6000二步法免疫组织化学染色(IHC),镜下和定量检测肺气道上皮细胞MUC5AC蛋白的表达。结果苦杏仁、桔梗及其配伍均能显著增加大鼠痰液分泌量(P<0.05或P<0.01);显著减轻脂多糖致大鼠肺黏液高分泌模型的气道上皮损伤,减少肺间质内炎症细胞浸润,降低黏蛋白的分泌,下调MUC5AC黏蛋白的表达(P<0.05或P<0.01);显著抑制BLAF中TNF-α和IL-8升高(P<0.05或P<0.01);配伍组上述作用不同程度地强于苦杏仁组或桔梗组,以1∶2配伍组作用最强。结论苦杏仁和桔梗有配伍增效作用,最佳配伍比例为1∶2。

苦杏仁挥发油化学成分的微波-同时蒸馏萃取GC-MS分析

报道了用微波照射 -同时蒸馏萃取法提取苦杏仁挥发性物质,测得苦杏仁挥发油的含量为4.5 %(w),利用GC -MS法分离确认出18种化学成分,用峰面积归一化法通过化学工作站数据处理系统得出各化学成分在挥发油中的相对含量;其中主要成分为苯甲醛,占总挥发油的89.1% ;又用加成分解法分离出苯甲醛,并用IR。

新疆地产苦杏仁及油的营养成分研究

为进一步研究和开发苦杏仁资源 ,采用常规及仪器分析方法对苦杏仁及油的主要营养成分、氨基酸组成、微量元素、脂肪酸组成和理化指标进行了分析测定。经测定苦杏仁含脂肪5 0 8% ,脂肪中含六种脂肪酸 ,其中不饱和脂肪酸含量高达 90 % ;蛋白质 2 3 7% ,水分 3 13% ,总糖3 97% ,维生素E 0 0 0 5 12 % ,氨基酸总量 2 1 32 % ,并含有多种微量元素 ;折光率 1 4 6 72 ,比重0 90 0 2 ,碘值 111 13,皂化值 191 4 3。测定结果表明 ,苦杏仁含有多种营养成分和活性物质 ,是一种理想的天然保健食品和药物 ,具有较好的开发利用前景。

苦杏仁药材质量评价法的研究

目的 :建立苦杏仁药材综合质量评价方法。方法 :用HPLC法测定了苦杏仁药材 14个市售样品、不同年度贮存品及自制炮制品中苦杏仁苷含量 ,并考察了市售药材的常规理化试验项目。结果 :市售药材生品的苦杏仁苷含量与炮制品间差异明显 ,且去皮品中含量均低于药典标准 ,但自制炮制品的含量均达到药典标准 ;不同贮存年度的市售药材生品带皮妥善保存 ,苦杏仁苷含量至少 10年内变化不大 ;市售药材的常规试验项目测定结果表明各种炮制品间的差异较大。结论 :炮制加工过程是影响苦杏仁药材质量的关键因素 ,同时有必要制订其常规理化试验项目 ,加强综合质量控制。

桃仁及苦杏仁提取液的高效液相分析及其毒性比较研究

[目的]分析桃仁及苦杏仁提取液的高效液相表现并比较其毒性。[方法]将桃仁提取液、苦杏仁提取液及苦杏仁苷标准液作高效液相分析,并把豚鼠作为实验对象,以过敏反应为指标,观察它们的毒性作用。[结果]桃仁提取液及苦杏仁提取液均有苦杏仁苷标准液同样的高效液相表现,并且存在不同程度的毒性反应。同时还测定到它们的安全使用剂量。[结论]桃仁提取液与苦杏仁提取液均具一定毒性作用,桃仁提取液较轻。安全剂量下不表现毒性作用。

麻杏石甘汤体外抗A型流感病毒作用靶点的研究

目的研究麻杏石甘汤体外抗A型流感病毒的作用靶点。方法运用细胞培养技术、血凝试验和MTT法检测麻杏石甘汤在4种给药方式中对流感病毒血凝滴度和流感病毒感染的MDCK细胞活性的影响。结果在直接灭活病毒作用中,麻杏石甘汤在3.19￣31.25 mg/mL浓度范围内的血凝滴度低于病毒对照组,在15.63￣31.25mg/mL时病毒血凝滴度低于利巴韦林组;在干预病毒吸附作用中,麻杏石甘汤在1.95￣31.25 mg/mL浓度范围内病毒血凝滴度低于病毒对照组,在7.81￣31.25 mg/mL时病毒血凝滴度低于利巴韦林组;在保护宿主细胞作用中,麻杏石甘汤在3.19￣31.25 mg/mL浓度范围内病毒血凝滴度低于病毒对照组,在7.81￣31.25 mg/mL时病毒血凝滴度低于利巴韦林组,差异均有统计学意义(P<0.01￣0.05)。在这3种给药方式中,麻杏石甘汤对流感病毒感染的MDCK细胞的治疗指数高于利巴韦林。在抑制病毒增殖的作用中,麻杏石甘汤在7.81￣31.25 mg/mL浓度范围内病毒血凝滴度显著低于病毒对照组,差异有统计学意义(P<0.01￣0.05)。与利巴韦林组比较,检测的麻杏石甘汤5个浓度点的作用不明显,在给药方式中,麻杏石甘汤对MDCK细胞的治疗指数也低于利巴韦林组。结论麻杏石甘汤通过直接杀伤病毒、干预病毒吸附、抑制病毒增殖、保护宿主细胞而发挥抗流感病毒作用,该方直接杀伤病毒、干预病毒吸附和保护宿主细胞的作用优于利巴韦林片,抑制病毒增殖的作用不及利巴韦林片。

正交试验法优选蒸苦杏仁炮制工艺

目的优选蒸苦杏仁的最佳炮制工艺。方法以灭酶程度和含苦杏仁苷量为评价指标,采用蒸汽流量、蒸制时间和厚度四因素、三水平L9(34)正交试验法,优选苦杏仁的最佳蒸制工艺。结果蒸苦杏仁最佳炮制工艺为杏仁厚度铺置3～5 cm,以大流量蒸汽蒸制30 min。结论确定的苦杏仁蒸制工艺稳定可行,对于规范蒸杏仁的炮制工艺具有一定的意义。

FAAS法测定苦杏仁和甜杏仁中的13种金属元素

采用硝酸、高氯酸(V/V=4/1)常压微沸条件下消解苦杏仁和甜杏仁样品,火焰原子吸收法测定苦杏仁和甜杏仁中的金属元素:Mn、Ca、K、Mg、Na、Zn、Cu、Fe、Co、Cd、Ni、Pb、Cr的含量,研究了测定不同元素仪器的最佳工作条件、方法的准确度和精密度。结果表明:苦杏仁中Mn、Ca、K、Mg、Na、Zn、Cu、Fe、Co、Cd、Ni和Pb的含量分别为11.756,1614.167,5153.191,238.478,97.668,274.836,16.844,546.316,9.952,3.474,5.979,2.143μg.g-1,Cr未检出,方法回收率(n=9)在97.32%—102.57%之间,RSD(n=9)在0.14%—2.22%之间;甜杏仁中Mn、Ca、K、Mg、Na、Zn、Cu、Fe、Co、Cd、Ni和Pb的含量分别为6.622,1937.503,8663.824,216.956,257.546,77.961,12.483,372.183,7.990,3.666,2.268,3.214μg.g-1,Cr未检出,方法回收率(n=9)在97.23%—102.43%之间,RSD(n=9)在0.47%—2.14%之间。该法快速,简单,准确度和精密度均较高,能达到分析要求。

麻黄与杏仁混合汤剂红外光谱分析

测试了单味药麻黄、杏仁及麻黄+杏仁混合汤剂的红外光谱。经分析:在麻黄+杏仁汤剂中保留了麻黄、杏仁单味药物汤剂中的某些吸收峰,见麻黄+杏仁光谱1402和1076 cm-1处等;麻黄、杏仁光谱中的某些吸收峰并未在麻黄+杏仁光谱中出现,见麻黄+杏仁光谱1394和682 cm-1处等;在麻黄+杏仁汤剂光谱中,出现了新的吸收峰,见麻黄+杏仁光谱688和1187 cm-1处等。同时,因吸收峰位置的改变,说明各基团在麻黄、杏仁、麻黄+杏仁汤剂中所处的化学环境不同,汤剂中生化物质的结构发生了变化,或麻黄+杏仁汤剂中可能新生成了麻黄、杏仁单味药物汤剂中所没有的化学成分。麻黄+杏仁汤剂所包含的药物成分并非是单味麻黄、杏仁汤剂所含药物成分的简单相加。

苦杏仁油的超声提取

目的 :从苦杏仁中提取脂肪油。方法 :运用超声技术提取 ,并对提取的苦杏仁油进行理化常数的检测。结果 :用超声技术提取苦杏仁油的出油率为 4 7.0 8%。结论 :用超声技术从苦杏仁中提取苦杏仁油 ,可提高提取率 。

基于p38MAPK/NF-κB信号通路探讨麻黄-苦杏仁药对治疗支气管哮喘大鼠的机制

目的探讨麻黄-苦杏仁药对对支气管哮喘大鼠气道炎症的影响,以及对p38MAPK/NF-κB信号通路的调控作用。方法将48只大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组及麻黄-苦杏仁药对A组(9 g∶6 g)、B组(12 g∶6 g)、C组(9 g∶9 g),每组8只。采用4%卵清蛋白(OVA)致敏复制哮喘大鼠模型,持续造模4周后开始给药,麻黄-苦杏仁药对组(5 g·kg^(-1))、地塞米松组(1 mg·kg^(-1))按相应剂量灌胃给药,正常组及模型组给予等剂量生理盐水,每天1次,持续14 d。检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素4(IL-4)、IL-5、IL-6、IL^(-1)3和γ-干扰素(IFN-γ)水平;采用Diff-Quick染色后对BALF进行炎性细胞分类计数;采用免疫组化法检测肺组织p-p38MAPK、NF-κBp65蛋白表达;Western Blot法检测肺组织p38MAPK、p-p38MAPK及NF-κBp65蛋白表达;qRT-PCR法检测肺组织p38MAPK、p-p38MAPK及NF-κBp65 mRNA表达。结果与正常组比较,模型组大鼠BALF中的细胞总数及各炎性细胞数量均显著升高(P<0.01);BALF中的IL-4、IL-5、IL-6、IL^(-1)3水平显著升高(P<0.01),IFN-γ水平显著降低(P<0.01);p-p38MAPK、NF-κBp65蛋白及mRNA表达显著上调(P<0.01)。与模型组比较,麻黄-苦杏仁药对组大鼠BALF中的细胞总数及各炎性细胞数量均显著降低(P<0.01);BALF中的IL-4、IL-5、IL-6、IL^(-1)3水平显著降低(P<0.01),IFN-γ水平显著升高(P<0.01);p-p38MAPK、NF-κBp65蛋白及mRNA表达显著下调(P<0.01)。结论麻黄-苦杏仁药对可能通过抑制p38MAPK/NF-κB信号通路,减少Th2细胞因子生成,减轻哮喘大鼠气道及周围的炎性反应和高气道反应,从而发挥控制哮喘的作用。

麻黄汤不同配伍对苦杏仁和甘草有效成分的影响

目的:评价麻黄汤不同配伍对苦杏仁和甘草有效成分的影响。方法:制备苦杏仁苷对照品溶液和甘草酸单铵盐对照品溶液和不同配伍方式的麻黄汤水煎液供试品溶液,以正交设计8中不同配伍的麻黄汤组方,苦杏仁有效成分研究中以A-H进行标识;甘草有效成分研究中以A1-H1对8中不同配伍方式进行标实。最终结果根据国家药典委员会提出的中药指纹图谱相似度评价系统2004A进行相似度分析,采用MATLAB软件进行数据处理和统计。结果:苦杏仁和甘草色谱条件能够分别将苦杏仁苷和甘草酸清晰的分离出来,无其他杂质峰,基线稳定,具有可比性。麻黄汤不同配伍方式中对苦杏仁有效成分苦杏仁苷每剂含量未见明显差异,进行方差分析后结果显示,麻黄汤不同配伍中麻黄、桂枝、甘草对苦杏仁苷的影响差异无统计学意义(P>0.05)。麻黄汤不同配伍方式中以H1单纯甘草中甘草酸含量为最高,而麻黄汤全方A1中的甘草酸含量为最低;不同配伍中麻黄、桂枝和苦杏仁均降低麻黄汤中甘草酸的含量(P<0.05)。结论:麻黄汤不同配伍中麻黄、桂枝、甘草对苦杏仁中有效成分苦杏仁苷未见明显影响;而不同配伍中麻黄、桂枝和苦杏仁均降低麻黄汤中甘草有效成分甘草酸的含量。