心痛泰含药血清干预PI3K/Akt/HIF-1α通路抑制兔主动脉平滑肌细胞凋亡的作用机制

目的通过生信分析和细胞实验探讨心痛泰含药血清干预PI3K/Akt/HIF-1α对兔主动脉平滑肌细胞(Aortic vascular smooth muscle cell,VSMC)凋亡的作用机制。方法采用ox-LDL诱导实验兔主动脉平滑肌细胞凋亡,构建动脉粥样硬化的细胞模型。采用细胞增殖与活性检测(Cell counting Kit8,CCK8)法筛选心痛泰含药血清最佳作用浓度。在中药药理数据分析平台中收集心痛泰的主要化学成分,通过PubChem数据库收集各活性化合物成分信息,SwissTargetPrediction数据库预测活性化合物相关靶点,通过GeneCards和DisGeNET数据库收集“动脉粥样硬化”、“细胞凋亡”的作用靶点,STRING平台构建蛋白质-蛋白质相互作用(Protein-protein interaction network,PPI)网络,DAVID在线分析GO分析和KEGG分析。VSMC分为空白血清组、模型组、心痛泰含药血清组、磷脂酰肌醇3激酶(Phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)抑制剂(LY294002)组、心痛泰含药血清+LY294002组。分别采用原位末端标记(TdT mediated dUTP Nick End Labeling,TUNEL)法和流式细胞术检测VSMC凋亡,计算凋亡率;聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)法测定PI3K、丝/苏氨酸蛋白激酶(Phospho-Alpha serine/threonine-protein kinase,Akt)、缺氧诱导因子(Hypoxia-Inducible factor 1-Alpha,HIF-1α)、caspase-3、caspase-9的mRNA表达;蛋白质免疫印迹(Western blot)法测定磷酸化的PI3K(p-PI3K)/PI3K、磷酸化的Akt(p-Akt)/Akt、HIF-1α、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9的蛋白表达;细胞免疫荧光法检测VSMC中收缩型特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的荧光定量。结果CCK-8筛选出最佳干预浓度为20%心痛泰中剂量含药血清;TUNEL法和流式细胞术表明,与空白组相比,模型组的VSMC凋亡阳性细胞百分比、早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率均明显升高(P<0.01),PI3K、Akt、HIF-1α、caspase-3、caspase-9 mRNA表达明显增加(P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、HIF-1α、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白表达明显增加(P<0.01),α-SMA明显减少(P<0.01)。与模型组相比,心痛泰含药血清组、LY294002组、心痛泰含药血清+LY294002组的VSMC凋亡阳性细胞百分比、早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率均降低(P<0.01或P<0.05),PI3K、Akt、HIF-1α、caspase-3、caspase-9 mRNA表达减少(P<0.01或P<0.05),p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、HIF-1α、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白表达下调(P<0.01或P<0.05),α-SMA明显增加(P<0.01或P<0.05)。与心痛泰含药血清组比,心痛泰含药血清+LY294002组的VSMC凋亡阳性细胞百分比、早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率均无明显差异(P>0.05),PI3K、Akt、HIF-1α、caspase-3、caspase-9的mRNA表达,以及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、HIF-1α、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白表达无差异(P>0.05),α-SMA的荧光强度无差异(P>0.05)。结论心痛泰含药血清可能通过下调PI3K/Akt/HIF-1α信号通路及下游的凋亡相关因子,改善ox-LDL诱导的VSMC凋亡,从而达到稳定动脉易损斑块的作用。

郭志华教授运用心痛泰治疗冠心病临证经验

冠心病即冠状动脉粥样硬化性心脏病,其发病率呈逐年上升趋势,已成为我国严重的疾病经济负担之一。冠心病属中医“胸痹”范畴,中医论胸痹多以气滞血瘀为基本病机。郭志华教授在此基础上提出“双心共病”理论,认为冠心病患者常合并有心理障碍疾病。该类患者除胸闷、心痛等心脏疾病症状外,还兼有失眠、心烦、焦躁等心神不安症状,故郭志华教授自拟心痛泰一方,该方由丹参、川芎、葛根、郁金、木香、栝楼皮等药物组成,以行气活血为基本治法,同时辨证加用酸枣仁、首乌藤、合欢花等药物以安心神,双心兼顾,效果显著。

心痛泰对冠心病大鼠肾素-血管紧张素-醛固酮系统及血管重塑的调控作用

目的从肾素-血管紧张素-醛固酮系统切入,探讨心痛泰对冠心病血管重塑的调控作用。方法将95只SD大鼠随机抽取17只为正常组,其余78只采用喂饲高脂饲料并腹腔注射垂体后叶素的方法制备冠心病大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组,心痛泰低、中、高剂量组和卡托普利组。各组分别予相应的药物灌胃,正常组和模型组以同等体积的蒸馏水灌胃,每日1次,连续28 d。采用HE染色观察大鼠冠状动脉病理变化,ELISA法检测大鼠血浆肾素(PRA)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)的含量。结果治疗4周后,与冠心病模型组比较,心痛泰低、中、高剂量组和卡托普利组心脏指数、左心室质量指数、右心室质量指数降低,冠状动脉管壁变薄,管壁厚度/管腔直径、管壁面积/管腔面积降低,血浆PRA、AngⅡ、ALD水平下降(P<0.05)。心痛泰中、高剂量组和卡托普利组各项指标组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论心痛泰可调节肾素-血管紧张素-醛固酮系统,延缓甚至逆转心血管重构,从而改善冠心病大鼠心肌供血和心功能,且心痛泰中、高剂量组疗效优于低剂量组。

心痛泰抑制动脉粥样硬化兔炎症反应的作用机理研究

目的观察心痛泰对动脉粥样硬化兔Toll样受体4(TLR4)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、髓过氧化物酶(MPO)、Ras基因家族成员A(Rho A)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)表达的影响,探讨心痛泰治疗动脉粥样硬化的可能作用机制。方法采用高脂饲料喂养联合免疫损伤建立兔动脉粥样硬化模型,分别予生理盐水、瑞舒伐他汀、心痛泰高、中、低剂量进行干预,采用Western blotting、RT-PCR检测胸主动脉TLR4、p38 MAPK、MPO、Rho A、e NOS蛋白及m RNA的表达水平。结果与空白组比较,模型组TLR4、p38 MAPK、MPO、Rho A蛋白、m RNA的表达均升高,e NOS蛋白、m RNA的表达降低,差异有显著统计学意义(P<0.01);与模型组比较,心痛泰低剂量组MPO蛋白、MPO m RNA、Rho A蛋白、m RNA、p38MAPK m RNA表达均降低,e NOS蛋白、e NOS m RNA表达均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,心痛泰中剂量组p38MAPK、MPO、Rho A蛋白、m RNA及TLR4 m RNA表达均降低,e NOS蛋白、m RNA表达均升高,差异有显著统计学意义(P<0.05);与模型组比较,心痛泰高剂量组TLR4、p38 MAPK、MPO、Rho A蛋白、m RNA的表达均降低,e NOS蛋白、e NOS m RNA的表达均上升,差异有显著统计学意义(P<0.01);阳性组与心痛泰高剂量组比较,TLR4、p38 MAPK、MPO、Rho A、e NOS蛋白及其m RNA的表达虽有差异,但均无统计学意义(P>0.05)。结论心痛泰可能通过降低TLR4、p38 MAPK、MPO、Rho A蛋白及其m RNA的表达,上调e NOS蛋白、e NOS m RNA的表达,抑制血管内炎症,保护主动脉血管内皮,达到治疗动脉粥样硬化的目的 。

心痛泰对动脉硬化兔主动脉NF-κBp65、TNF-α、IL-10的影响

目的:观察心痛泰对动脉粥样硬化(AS)兔的血脂及主动脉组织NF-κB-p65、TNF-α和IL-10的影响。方法:120只清洁级日本大耳白兔随机分为6组,空白组、模型组、心痛泰高剂量、中剂量及低剂量组、瑞舒伐他汀钙组,采用高脂喂养加免疫损伤造模,造模同时予以相应药物灌胃。60 d后,采血测定血脂,取胸主动脉用免疫组化法测定TNF-α、IL-10,用Rt-PCR法测定NF-κB-p65的m RNA表达,Western Blot法测定NF-κB-p65的蛋白表达。结果:心痛泰各组和瑞舒伐他汀钙组降低血脂的差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,心痛泰中、高剂量组和瑞氟伐他汀钙组动脉组织中的NF-κB-p65、TNF-α、IL-10的变化的差异有统计学意义(P<0.01)。结论:心痛泰能减轻AS炎症反应,作用机制可能是通过降低血脂、减少NF-κB-p65和TNF-α的表达,提高抗炎因子IL-10,从而减轻血管炎症,达到治疗AS的目的。

心痛泰对动脉粥样硬化兔血清IL-1、TNF-α及主动脉MPO表达的影响

目的:探讨心痛泰对动脉粥样硬化(AS)兔血清IL-1、TNF-α及主动脉髓过氧化物酶(MPO)表达的影响。方法:120只兔随机分为空白组、模型组、瑞舒伐他汀组、心痛泰高剂量组、心痛泰中剂量组和心痛泰低剂量组,每组20只。除空白组外,其余各组均采用高脂饲料喂养联合免疫损伤复制AS模型,在施以造模因素的同时,心痛泰高、中、低剂量组和瑞舒伐他汀组予以药物干预,空白组与模型组灌服同等体积的生理盐水,共8周。观察主动脉组织的病理形态学变化,并检测血清IL-1、TNF-α含量及主动脉MPO蛋白和MPO mRNA的表达量。结果:模型组兔血清IL-1、TNF-α含量及主动脉MPO蛋白及MPO mRNA的表达明显高于空白组(P<0.01)。各给药组兔血清IL-1、TNF-α含量及主动脉MPO蛋白及MPO mRNA的表达明显低于模型组(P<0.05或P<0.01)。心痛泰中、高剂量组和瑞舒伐他汀组兔血清IL-1、TNF-α含量及主动脉MPO蛋白及MPO mRNA的表达明显低于心痛泰低剂量组(P<0.05或P<0.01);心痛泰高剂量组和瑞舒伐他汀组兔血清IL-1、TNF-α含量及主动脉MPO蛋白及MPO mRNA的表达与心痛泰中剂量组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:心痛泰颗粒可通过下调动脉粥样硬化兔主动脉MPO蛋白及MPO mRNA表达,抑制炎症反应,改善动脉粥样硬化。

心痛泰颗粒对冠心病大鼠血脂、纤溶系统及心肌影响的研究

目的观察心痛泰颗粒对冠心病大鼠血清中血脂、纤溶系统的影响及心肌组织形态学改变,并探讨心痛泰对冠心病大鼠的治疗作用及机制。方法将95只4周龄SD大鼠随机抽取17只作为空白组。其余78只SD大鼠进行造模(灌胃高脂饲料12周),造模后随机抽取75只分为模型组、心痛泰高剂量组、心痛泰中剂量组、心痛泰低剂量组、卡托普利组,每组各15只。第13周开始,各组分别予相应药物灌胃治疗,正常组和模型组以等体积的蒸馏水灌胃,每日1次,连续灌胃4周。于实验后,采用腹主动脉取血,化学发光法检测甘油三酯(TAG)、胆固醇(TC)水平。使用ELISA法检测血浆纤溶酶原激活剂(t-PA)和纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)水平;取血结束后迅速活体取出心脏观察病理组织结构。结果1)心痛泰低剂量组与模型组比较TC降低(P<0.05),心痛泰高剂量组、心痛泰中剂量组与模型组比较TC均明显降低(P<0.01)。2)心痛泰低剂量组与模型组比较TAG降低(P<0.05),心痛泰高剂量组、心痛泰中剂量组与模型组比较TAG均明显降低(P<0.01)。3)模型组大鼠PAI-1高脂饲料喂养后明显高于空白组(P<0.01),模型组大鼠t-PA明显低于空白组(P<0.01)。4)心痛泰低剂量组与模型组比较,PAI-1降低(P<0.05),心痛泰高剂量组、心痛泰中剂量组、卡托普利组与模型组比较,PAI-1明显降低(P<0.01)。5)心痛泰低剂量组与模型组比较,t-PA升高(P<0.05),心痛泰高剂量组、心痛泰中剂量组、卡托普利组与模型组比较,t-PA明显升高(P<0.01)。6)心痛泰低剂量组:心肌纤维分布大致整齐,心肌细胞间质稍增宽,且未见显著炎性细胞浸润,水肿属于轻度。心痛泰中剂量组:心肌纤维排列整齐度一般,心肌细胞间质轻度增宽,且未见明显炎性细胞浸润,水肿属于轻度。心痛泰高剂量组:心肌纤维排列较前几组整齐,心肌细胞间质稍增宽,且未见明显炎性细胞浸润,水肿属于轻度。卡托普利组:心肌纤维排列大致整齐,偶有少许炎性细胞浸润,心肌细胞有轻度水肿,间质稍增宽。结论心痛泰颗粒可显著降低冠心病大鼠PAI-1、TC、TAG水平,同时升高t-PA水平;心痛泰颗粒能改善冠心病大鼠心肌损伤,减慢心肌纤维化进程。其作用机制可能与冠心病大鼠血清PAI-1、TC、TAG的降低和血清t-PA量升高有关。

心痛泰对不稳定型心绞痛气滞血瘀证患者P-选择素、TXB_2的影响

目的:观察心痛泰对不稳定型心绞痛气滞血瘀证患者P-选择素、TXB_2的调节作用。方法:将60例心绞痛气虚血瘀证患者随机分为2组,对照组予西药基础治疗,观察组在西药治疗基础上加用心痛泰治疗,疗程3个月。评价疗效并于治疗前后检测2组患者血P-选择素和TXB_2水平。结果:治疗后2组患者P-选择素和TXB_2水平均降低,与治疗前比较差异均有显著统计学意义(P<0.01);与对照组比较,观察组P-选择素和TXB_2值降低幅度更明显,差异均有显著统计学意义(P<0.01)。结论:心痛泰能明显改善不稳定型心绞痛气滞血瘀证患者的临床疗效,降低P-选择素和TXB_2的水平。

心痛泰颗粒对动脉粥样硬化小鼠血脂及ICAM-1、VCAM-1的影响

目的:探讨心痛泰颗粒对动脉粥样硬化小鼠血脂及ICAM-1、VCAM-1影响的研究。方法:将Apo E-/-小鼠造模后随机分为模型组、心痛泰低、高剂量组和他汀组,每组10只,分别予以生理盐水、心痛泰低、高剂量及阿托伐他汀钙片灌胃;野生型小鼠作为空白对照组,予普通饲料正常喂养。治疗8周后检测血浆TC、TG、LDL-C、HDL-C,血清ICAM-1、VCAM-1变化情况。结果:心痛泰颗粒低、高剂量组、他汀组TC、TG、LDL-C水平均低于模型组,且心痛泰颗粒高剂量组低于心痛泰低剂量组,差异均有统计学意义(P<0.05);心痛泰颗粒低剂量组、高剂量组、他汀组ICAM-1、VCAM-1水平均低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05),且高剂量组、他汀组ICAM-1、VCAM-1水平低于心痛泰低剂量组(P<0.05),他汀组低于高剂量组(P<0.05);心痛泰颗粒低、高剂量组、他汀组ICAM-1、VCAM-1阳性表达率均低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05),且心痛泰高剂量组、他汀组低于心痛泰低剂量组(P<0.05),他汀组低于心痛泰高剂量组(P<0.05)。结论:心痛泰颗粒可调节血脂,控制炎症反应,调控ICAM-1、VCAM-1的阳性表达率,干预动脉内斑块形成,从而发挥防治AS的作用。

心痛泰颗粒对大鼠抗急性心肌缺血保护作用的实验研究

目的探讨心痛泰颗粒对大鼠抗急性心肌缺血的保护作用的研究。方法将大鼠随机分成6组,除假手术组10只外,余大鼠予以结扎大鼠冠状动脉左前降支造成大鼠急性心肌缺血损伤模型,成模大鼠随机分为模型组、心痛泰高、中、低剂量组及麝香保心丸组。分别给以蒸馏水、心痛泰低、中、高剂量及麝香保心丸进行灌胃2周后,观察3个时间点模型动物心电图ST段变化;采用ELISA法检测血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量;采用TTC染色测定心肌梗死面积;采用HE染色法观察心肌坏死组织病理变化。结果与假手术组比较,模型组大鼠心电图S-T段抬高明显(P<0.01)提示模型复制成功,模型组血清CK、LDH和MDA的浓度明显升高(P<0.01),血清SOD浓度明显降低(P<0.01);与模型组比较,各给药组有拮抗大鼠急性心肌缺血心电图S-T段抬高的作用(P<0.05),且能明显降低血清CK、LDH活性和MDA浓度,升高血清SOD活性(P<0.01),明显缩小心肌梗死范围,保护心肌组织(P<0.01)。结论心痛泰颗粒抗急性心肌缺血心肌损伤的效果显著,对急性心肌缺血损伤大鼠有明显的保护作用。

心痛泰干预心肌缺血大鼠心肌中Notch1、Dll4蛋白表达的研究

目的:通过构建急性心肌缺血模型,探讨心痛泰对急性心肌缺血大鼠新生血管密度、缺血心肌中Notch1、Dll4蛋白表达的影响。方法:100只SD大鼠,除假手术组10只外,其余大鼠予以结扎大鼠冠状动脉左前降支造成急性心肌缺血损伤模型,成模大鼠随机分为模型组,心痛泰低、中、高剂量组及麝香保心丸组。分别给以蒸馏水,心痛泰低、中、高剂量及麝香保心丸进行灌胃2周后,采用免疫组化法测新生微血管密度及缺血区心肌组织Notch1、Dll4蛋白的表达情况。结果:模型组大鼠的缺血心肌微血管密度、缺血心肌中的Notch1、Dll4蛋白表达均高于假手术组(P<0.05);心痛泰各剂量组及麝香保心丸组大鼠缺血心肌微血管密度、缺血心肌中的Notch1、Dll4蛋白表达均高于模型组(P<0.05)。结论:心痛泰具有保护缺血心肌的作用,这可能与其能激活Notch信号通路,上调Notch1、Dll4蛋白在缺血区的表达,促进血管新生有关。

心痛泰颗粒对动脉粥样硬化小鼠血脂及PDGF-B作用的实验研究

目的:探讨心痛泰颗粒对动脉粥样硬化小鼠血脂及PDGF-B作用的研究。方法:将ApoE-/-小鼠随机分成4组,予以高脂饲料喂养;野生型小鼠作为空白对照组,予以普通饲料喂养。将成模ApoE-/-小鼠随机分为模型组、心痛泰低、高剂量组和他汀组。分别予以生理盐水、心痛泰低、高剂量及阿托伐他汀钙片连续灌胃8周后,运用酶法检测TC、TG,比色法检测LDL-C、HDL-C,免疫组化法观察PDGF-B。结果:与空白组比较,模型组和心痛泰各组均能显著降低TC、TG、LDL-C(P<0.05),升高HDL-C(P<0.05),下调PDGF-B的阳性表达,且心痛泰高剂量组、他汀组优于低剂量组(P<0.05),但心痛泰颗粒高剂量组与他汀组组间无差异(P>0.05)。结论:心痛泰可调节血脂,调控PDGF-B的阳性表达,干预动脉内斑块形成,从而发挥防治AS的作用。

心痛泰颗粒治疗气滞血瘀证稳定型心绞痛的效果及对心肌能量代谢的影响

目的探讨心痛泰颗粒治疗气滞血瘀证稳定型心绞痛的临床效果及对患者心肌能量代谢的影响。方法选取2018年6月—2020年6月湖南中医药大学第一附属医院和湖南中医药大学第二附属医院门诊及住院部收治的气滞血瘀证稳定型心绞痛患者60例,按照随机数字表法将其分为观察组和对照组,每组各30例。观察组采用心痛泰颗粒联合西医规范治疗,对照组采用盐酸曲美他嗪联合西医规范治疗。治疗4周后,评价两组临床疗效,并于治疗前后检测两组心肌能量消耗水平和血清游离脂肪酸含量。结果观察组心绞痛、心电图疗效的总有效率高于对照组,差异均统计学意义(均P<0.05)。观察组停减率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组心肌能量消耗水平、血清游离脂肪酸含量均较治疗前降低,且观察组低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论心痛泰颗粒联合西医规范治疗运用于气滞血瘀证稳定型心绞痛临床治疗效果显著,其作用机制可能与心肌能量消耗水平和血清游离脂肪酸含量降低有关。

心痛泰颗粒对气滞血瘀型不稳定性心绞痛患者的治疗效果

目的研究心痛泰颗粒对气滞血瘀型不稳定性心绞痛患者的治疗效果。方法选取接诊的60例气滞血瘀型不稳定性心绞痛患者作为本次研究对象,随机分为观察组和对照组,给予对照组患者进行传统治疗,观察组在对照组上予心痛泰颗粒进行治疗,观察两组患者治疗后临床疗效。结果治疗后,观察组临床疗效总有效率93.33%(28/30)优于对照组60.00%(18/30),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论心痛泰颗粒对气滞血瘀型不稳定性心绞痛疗效显著。

心痛泰对痰瘀互结证腹主动脉易损斑块模型兔病理性血管新生及HIF-1α/VEGF/VEGFR2信号通路的影响

目的探讨心痛泰治疗动脉粥样硬化痰瘀互结证的可能作用机制。方法将60只清洁级兔随机分为假手术组、模型组、氟伐他汀组及心痛泰低、中、高剂量组,每组10只。除假手术组外,其余各组兔采用高脂喂养+腹主动脉球囊损伤法建立痰瘀互结证腹主动脉易损斑块模型。造模后心痛泰低、中、高剂量组分别给予心痛泰含生药1.87、3.73、7.46 g/(kg·d)灌胃,氟伐他汀组给予氟伐他汀钠缓释片1.87 mg/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组给予10 ml/d超纯水灌胃,各组均连续灌胃8周。采用HE染色观察易损斑块中病理性血管新生的变化;采用痰瘀互结证中医证候评分表进行证候评分并计算总积分;测定斑块成分(包括细胞外脂质、泡沫细胞、胶原成分、平滑肌细胞各占所在斑块面积的百分比),并计算斑块易损指数;免疫组化法测定斑块组织中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、血管生成素2(Ang-2)、成纤维细胞生长因子(FGF)阳性表达;蛋白免疫印迹法测定斑块组织中HIF-1α、VEGF、VEGFR2、Ang-2、FGF蛋白表达。结果HE染色显示,假手术组腹主动脉无斑块形成;模型组可见动脉弹力层破坏,形成易损斑块,内膜下有明显的泡沫细胞,斑块纤维帽破裂;与模型组相比,心痛泰各剂量组和氟伐他汀组斑块组织处的空泡化明显减轻,动脉内膜和斑块的结构更加稳定。与模型组比较,心痛泰各剂量组和氟伐他汀组各证候评分及总积分下降,细胞外脂质含量、泡沫细胞含量降低,胶原含量、平滑肌细胞含量增加,斑块易损指数降低,斑块组织中HIF-1α、VEGF、VEGFR2、Ang-2、FGF阳性表达及蛋白表达降低(P<0.05或P<0.01);且心痛泰中、高剂量组和氟伐他汀组各指标改善优于心痛泰低剂量组(P<0.01)。心痛泰中、高剂量组和氟伐他汀组组间两两比较,各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论心痛泰可能通过下调斑块组织HIF-1α/VEGF/VEGFR2信号通路,减少病理性血管新生,稳定易损斑块,从而改善动脉粥样硬化之痰瘀互结证。

基于TLR4/p38MAPK/AP-1信号通路探讨心痛泰对兔动脉粥样硬化和血管重构的影响

目的:基于TLR4/p38MAPK/AP-1信号通路探讨心痛泰对兔动脉粥样硬化和血管重构的影响。方法:日本大耳白兔120只随机分为空白组,模型组,心痛泰低、中、高剂量组和瑞舒伐他汀组。采用前瞻性实验研究,造模的同时给予药物灌胃。8周后取胸主动脉,免疫组化法测定白介素-8(IL-8)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1);Masson染色观察胶原分解和平滑肌纤维;测定胸主动脉最大内膜厚度(MIT)、最小管腔直径(MLD)、管腔面积(LA)、内弹力膜围绕面积(IELa)、外弹力膜围绕面积(EELa),计算内膜面积(IA)、中膜面积(MA)、管腔狭窄百分比(LS);Western Blot法测定胸主动脉组织Toll样受体-4(TLR4)、丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、转录激活因子(AP-1)的蛋白表达。结果:与模型组比较,心痛泰各剂量组、瑞舒伐他汀组IL-8、MCP-1、MMP-9含量显著降低(P<0.01),TIMP-1含量显著升高(P<0.05,P<0.01),TLR4、p38MAPK、AP-1的蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01);与心痛泰低剂量组比较,心痛泰高剂量组及瑞舒伐他汀组IL-8、MCP-1、MMP-9显著降低(P<0.01),TIMP-1升高(P<0.01),TLR4、p38MAPK、AP-1的蛋白表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,心痛泰各剂量组、瑞舒伐他汀组的IA、MA、LS均显著降低(P<0.01)。与心痛泰低剂量组比较,心痛泰中、高剂量组和瑞舒伐他汀组的IA、MA、LS均显著降低(P<0.01)。Masson染色显示,模型组管壁变薄,胶原分解增多,平滑肌纤维排列紊乱,管腔直径扩大,管腔内血栓形成;与模型组比较,心痛泰各剂量组和瑞舒伐他汀组动脉管壁胶原纤维分解减少,平滑肌细胞排列较为整齐,管腔、管壁结构有所改善。结论:心痛泰可能是通过调控TLR4/p38MAPK/AP-1信号通路及下游的细胞因子,减少血管胶原分解、抑制纤维细胞增生,改善动脉粥样硬化和血管重构。

基于“心受气于脾”探讨心痛泰调控p38 MAPK/AP-1对动脉粥样硬化兔的中医证候和VSMC胶原纤维的影响

目的:基于"心受气于脾"探讨心痛泰调控p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)/转录激活因子-1(AP-1)对动脉粥样硬化兔的中医证候积分和血管平滑肌细胞(VSMC)胶原纤维的影响。方法:120只清洁级兔随机分为假手术组,痰瘀互结模型组,心痛泰低剂量组、中剂量组、高剂量组和瑞舒伐他汀组。采用高脂喂养+球囊损伤法,造成痰瘀互结病证结合动脉粥样硬化兔模型,造模后予以相应药物灌胃8周(心痛泰低、中、高剂量组和瑞舒伐他汀组的给药量分别为2.3,4.6,9.2 g·kg^(-1)和0.55 mg·kg^(-1))。给药周期结束时取腹主动脉,苏木素-伊红(HE)染色观察易损斑块的情况;免疫组化法(IHC)测定基质金属蛋白酶-9(MMP-9),组织基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1);马松(Masson)染色观察平滑肌细胞胶原纤维分解情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定主动脉组织p38 MAPK,AP-1蛋白的表达;采用中医证候评分表评价痰瘀互结证中医证候积分。结果:与模型组比较,心痛泰各剂量组、瑞舒伐他汀组MMP-9含量显著降低,TIMP-1含量显著升高,p38 MAPK蛋白的表达,AP-1的核转位显著降低(P<0.01);与心痛泰低剂量组比较,心痛泰中、高剂量组,瑞舒伐他汀组MMP-9明显降低,TIMP-1明显升高,p38 MAPK蛋白的表达,AP-1的核转位明显降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,心痛泰各剂量组、瑞舒伐他汀组的中医证候积分均明显改善(P<0.05,P<0.01);与心痛泰低剂量组比较,心痛泰中、高剂量组,瑞舒伐他汀组的中医证候积分均显著改善(P<0.01)。Masson染色显示,模型组平滑肌纤维排列紊乱,胶原分解增多,纤维帽变薄,斑块易损性增加;与模型组比较,心痛泰各组和瑞舒伐他汀组平滑肌细胞排列较为整齐,胶原纤维分解减少,斑块稳定性增加。结论:心痛泰可下调p38 MAPK,MMP-9的表达,提高TIMP-1的水平,减少AP-1核转位,减少平滑肌细胞胶原纤维的分解,改善痰瘀互结证的中医证候评分。心痛泰可能通过调控p38 MAPK/AP-1信号通路及下游的细胞因子,稳定易损斑块,改善动脉粥样硬化之痰瘀互结证。

心痛泰颗粒预防性给药对动脉粥样硬化兔主动脉TLR4、p38 MAPK蛋白及mRNA表达的影响

目的探讨心痛泰颗粒预防性给药对动脉粥样硬化(AS)兔Toll样受体4(TLR4)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)蛋白及mRNA表达的影响。方法120只兔随机分为空白组(K),模型组(M),心痛泰颗粒高(G)、中(Z)、低(D)剂量组和瑞舒伐他汀组(R),每组20只。K组喂养基础饲料,其余各组均采用高脂饲料喂养联合免疫损伤复制AS模型。在造模同时,G、Z、D、R组每天给药剂量分别为1.44、0.72、0.36 g/kg及0.55 mg/kg,K组与M组灌服同等体积的生理盐水,共8周。观察主动脉组织的病理形态学变化,并检测血脂含量及主动脉TLR4、p38 MAPK蛋白及mRNA的表达量。结果M组内膜壁明显增厚,有大量的泡沫细胞聚集及炎性细胞浸润,中膜细胞排列疏松紊乱,各给药组均有不同程度的减轻,以Z、G、R组较为明显。与K组比较,M组血TC、TG、LDL含量及主动脉TLR4、p38 MAPK蛋白及mRNA的表达升高(P<0.01)。与M组比较,D组血TG含量及主动脉p38 MAPK mRNA表达明显降低(P<0.05),Z组、G组及R组血TC、TG、LDL含量及主动脉TLR4 mRNA、p38 MAPK蛋白及mRNA的表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论心痛泰颗粒通过下调TLR4、p38 MAPK蛋白及mRNA表达,调节血脂代谢,延缓动脉粥样硬化。

心痛泰颗粒对动脉粥样硬化小鼠血脂及VCAM-1、TNF-α的影响

目的:探讨心痛泰颗粒对动脉粥样硬化(AS)小鼠血脂及VCAM-1、TNF-α的影响。方法:将10只野生型小鼠予以普通饲料喂养作为空白对照组,将40只Apo E基因敲除(Apo E-/-)小鼠予以高脂饲料喂养造模,模型制备成功后,将其随机分为模型组、心痛泰低剂量组、心痛泰高剂量组和他汀组,每组各10只,分别予以0. 9%氯化钠注射液、心痛泰低剂量、心痛泰高剂量及阿托伐他汀钙片进行胃内给药,连续用药8周。检测各组小鼠用药前后的血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及血管细胞黏附分子(VCAM)-1、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平变化。结果:与模型组、空白对照组比较,心痛泰低、高剂量组及他汀组可明显降低TC、TG、LDL-C浓度,升高HDL-C血清浓度,控制VCAM-1、TNF-α浓度并减少其阳性表达率,差异均有统计学意义(P <0. 05);其中,心痛泰高剂量组、他汀组疗效优于心痛泰低剂量组,差异有统计学意义(P <0. 05),他汀组与心痛泰高剂量组在降脂疗效方面比较,差异无统计学意义(P> 0. 05),在降低VCAM-1、TNF-α浓度方面,他汀组优于心痛泰高剂量组(P <0. 05)。结论:心痛泰能够调节血脂、控制炎症,调节VCAM-1、TNF-α的阳性表达,从而干预动脉内斑块的形成及发展,起到预防AS的作用。

心痛泰对动脉粥样硬化兔主动脉NF-κB表达的影响

目的:观察心痛泰对动脉粥样硬化(AS)兔主动脉组织病理学改变和主动脉组织NF-κB表达的影响。方法:将120只新西兰大耳白兔随机分成6组,分别为正常对照组、模型组(均灌胃等体积0. 9%氯化钠注射液),心痛泰低、中、高剂量组(分别灌胃心痛泰2. 3g/kg、4. 6g/kg、9. 2g/kg),阿托伐他汀钙组(灌胃阿托伐他汀钙1. 1mg/kg),每组20只。通过高脂饲料喂养及免疫反应损伤法制备兔AS模型,造模的同时给予药物干预。8周后,光学显微镜观察兔主动脉组织病理学改变;采用Western bolt法分别检测兔主动脉组织细胞核及细胞浆中NF-κB的表达;采用RT-PCR法检测兔主动脉组织NF-κB m RNA的表达。结果:与模型组比较,各用药组主动脉内膜厚度变薄,内膜下泡沫细胞及炎性细胞的浸润均有不同程度的减轻,主动脉NF-κB核转位及NF-κB m RNA明显降低(P <0. 01或P <0. 05)。结论:心痛泰对AS兔主动脉组织有一定的保护作用,通过下调AS兔主动脉组织NF-κB核转位和NF-κB m RNA表达,抑制炎症反应,从而延缓动脉粥样硬化的形成。