Xist基因抑制对牛SCNT早期胚胎发育的影响

Xist是与X染色体失活相关的非编码基因,它在合子期基因组开始表达,是胚胎发育早期表达的第一个印记基因。探讨了特异性抑制Xist的TALER-REPRESSOR(TALER)载体转染到胎牛成纤维细胞对Xist基因的抑制作用,并以抑制Xist基因表达的细胞作为核供体制作克隆胚胎,研究Xist基因抑制对牛克隆胚早期发育的影响。结果显示,与对照组细胞相比,TALER载体将Xist相对表达量下调了93.85%,说明本试验设计的载体转染系统能够有效抑制Xist基因的表达。选取Xist抑制表达阳性的转染细胞用于体细胞核移植试验,克隆胚胎发育结果显示,试验组和对照组的卵裂率、8细胞发育率、桑葚胚发育率和囊胚发育率分别为78.8%vs 75.1%(P>0.05,无显著差异)、54.4%vs 50.6%(P>0.05,无显著差异)、12.3%vs 27.8%(P<0.01,差异极显著)、0 vs 26.6%(P<0.01,差异极显著)。综上所述,试实验设计的特异性抑制Xist表达的TALER载体可有效抑制雌性胎牛成纤维细胞中Xist的表达。供体细胞Xist这种基因下调可使克隆胚胎2-8细胞率略有提升,但囊胚期和桑葚胚率明显降低。因此,其机制尚待于进一步探讨。

LncRNA XIST、miR-204及FN1在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的:探讨LncRNA XIST,miR-204及FN1在PTC组织和癌旁组织及LncRNA XIST在PTC细胞系中的表达及意义。方法:应用Real-time PCR技术检测20例甲状腺乳头状癌和其癌旁组织中LncRNA XIST,miR-204及FN1的表达情况,应用QPCR检测3株甲状腺癌细胞系(BCPAP, TPC-1, KTC-1) LncRNA XIST、miR-204-5p的表达水平,应用荧光原位杂交(FISH)检测PTC细胞系BCPAP中LncRNA XIST的表达定位,应用双荧光素酶报告基因检测人293T细胞的LncRNA XIST、miR-204及FN1相互作用。结果:与癌旁组相比,PTC癌组织组的LncRNA XIST的表达水平显著上调(p 【0.05),PTC癌组织组的FN1的表达水平极显著上调(p 【0.01),而PTC癌组织组的miR-204-5p的表达水平极显著下调(p 【0.01),差异均具有统计学意义;BCPAP细胞的LncRNA XIST的表达水平最高,且miR-204-5p的表达水平最低;LncRNA XIST主要在细胞质中表达;LncRNA XIST与miR-204有相互作用(p 【0.05),FN1与miR-204有相互作用(p 【0.05)。结论:LncRNA XIST在甲状腺乳头状癌中高表达,miR-204在甲状腺乳头状癌中低表达,FN1在甲状腺乳头状癌中高表达;LncRNA XIST,miR-204及FN1相互作用,参与甲状腺乳头状癌的发生发展,并可为甲状腺乳头状癌潜在诊断标志物和治疗靶点的寻找提供理论依据,LncRNA XIST可能是甲状腺乳头状癌诊断和治疗的一个新靶点。

非编码的mRNA

非编码的ｍＲＮＡ是近年发现的一类不含典型ＯＲＦ的ｍＲＮＡ．目前已发现或克隆的这类基因主要有：Ｈ１９基因，ＸＩＳＴ基因，ＸＬＳＩＲＴ基因，Ｈｉｓ１基因，ｂｉｃ基因，ｒｏｘ１和ｒｏｘ２基因等．它们与胚胎发育，肿瘤发生及Ｘ染色体失活密切相关．

X染色体失活的研究进展

在胚胎发育过程中,哺乳动物雌性细胞的两条X染色体中有一条会通过X染色体失活机制随机失活。X染色体失活中心(X chromosome inactivation center,XIC)是X染色体失活的主要调控区域,而位于XIC中Xist基因已被证明为X染色体失活的主要调节基因。Xist与Tsix的相互调控机制已被多方研究和证实,两者共同参与了胚胎早期发育过程中的X染色体失活的生理过程。X染色体失活异常与许多临床疾病相关,且X染色体失活的机制作为一个良好的表观遗传学研究模型,吸引越来越多研究者的关注,然而现有的关于X染色体失活机制的研究多零散且片段,现本文现将近年来关于X染色体失活机制的研究进展作一综述。

人类X染色体失活

多年来X连锁基因的作用一直是遗传学的一个难题。女性两个X染色体上每个基因的两个代表(等位基因)所形成的产物,为什么不比只有一个X染色体半合子的男性的相应基因的产物多?为什么某一X连锁的突变基因纯合女性的病情并不比半合子的男性严重?这就涉及到X染色体的失活。正常女性细胞中的两个X染色体中的一个在遗传上是失活的,并在间期形成可见的Barr小体,这个X染色体的浓缩过程称为X失活(X-inactivation)。“X失活中心”调控着X失活,而XIST基因可能就起到了“X失活中心”的作用。

Xist敲降可以改善孤雄单倍体囊胚质量

单倍体胚胎干细胞研究一直以来吸引着研究者们的注意,它可以用作基因修饰的工具或是用于药物筛选。随着孤雄胚胎干细胞系的成功建立,更扩展了单倍体胚胎干细胞的应用前景。但单倍体孤雄胚胎发育率低,胚胎质量差,制约着孤雄单倍体胚胎干细胞的建系。为改善孤雄单倍体胚胎发育潜能及胚胎干细胞建系效率低的问题,我们检测了小鼠(Mus musculus domesticus)孤雄单倍体胚胎的体外发育过程和该过程中Xist基因表达情况。结果发现,孤雄单倍体胚胎囊胚发育率只有10%~14%,发育至囊胚所需时间差异较大,从3.5~5.5 d不等。通过核糖核酸荧光原位杂交实验(RNA-FISH)跟踪Xist基因表达情况,发现其在发育至囊胚阶段的胚胎中呈抑制状态,而在早期胚胎中多呈表达状态。通过si RNA扰低Xist表达,虽然没有改变孤雄单倍体胚胎发育到囊胚的比例,但显著提高了囊胚质量,并提高了接种胚胎内细胞团(ICM)后建立细胞系的效率。结果说明,Xist基因的表达可能是导致小鼠孤雄单倍体胚胎质量差、干细胞建系率低的原因之一。