基于TLR4/NF-κB/NLRP3通路介导滑膜细胞焦亡探讨宣痹通络膏对急性痛风性关节炎的作用机制

目的:探究宣痹通络膏对急性痛风性关节炎(AGA)大鼠滑膜细胞焦亡的作用及机制。方法:将40只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、宣痹通络膏组(36 g/kg)、秋水仙碱组(阳性对照药,0.3 mg/kg),每组各10只。除对照组大鼠外,其余各组大鼠均采取踝关节腔内注射尿酸钠构建AGA模型,并于造模成功后当天对大鼠进行分组灌胃给药干预,1次/d,连续3 d。分别于4、24、48 h测定各组大鼠踝关节肿胀指数;苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠踝关节滑膜组织病理学变化;TUNEL染色检测滑膜细胞焦亡指数;免疫组化及酶联免疫吸附法(ELISA)检测滑膜组织及血清IL-1β和IL-18表达;免疫荧光及Western blotting检测滑膜组织TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路相关蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠踝关节肿胀指数明显升高(P<0.05),滑膜组织明显增厚,并伴有炎性细胞大量浸润,滑膜细胞焦亡指数明显增加(P<0.05),且滑膜组织IL-1β、IL-18蛋白及TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路蛋白(TLR4、MyD88、NF-κB、NLRP3、ASC、Caspase-1)表达均明显升高(P<0.05),血清IL-1β和IL-18水平明显升高(P<0.05)。与模型组相比,宣痹通络膏组和秋水仙碱组大鼠踝关节肿胀指数明显降低(P<0.05),滑膜组织损伤减轻,滑膜细胞焦亡指数明显降低(P<0.05),且滑膜组织IL-1β、IL-18蛋白及TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路蛋白表达均明显下调(P<0.05),血清IL-1β和IL-18水平明显降低(P<0.05)。结论:宣痹通络膏可能通过调节TLR4/NF-κB/NLRP3通路,抑制滑膜细胞焦亡,从而发挥抗AGA的作用。

基于NLRP3相关炎症因子探讨宣痹通络膏治疗急性痛风性关节炎的作用机制研究

目的 观察宣痹通络膏对急性痛风性关节炎(Acute Gouty Arthritis, AGA)大鼠的作用机制及NLRP3相关蛋白的表达影响。方法 将40只SPF级Wistar大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、中药组、西药组,每组各10只。中药组给予宣痹通络膏3.2 g/(kg·d)灌胃;西药组给予苯溴马隆7 mg/(kg·d)灌胃;正常组和模型组20 ml/(kg·d)生理盐水灌胃。观察大鼠踝关节肿胀程度、干预48 h后血清血尿酸水平、ELISA检测IL-1β、WB检测滑膜组织中NLRP3、Caspase-1相关蛋白含量。结果 模型组大鼠踝关节肿胀度造模4 h后开始升高,模型组与正常组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。造模12 h后,模型组高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。造模24 h后中药组肿胀程度低于西药组、模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。造模48 h后,西药组、中药组肿胀程度均低于模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。与正常组比较,模型组血尿酸水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,西药组、中药组给药后尿酸水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与正常组比较,模型组血清IL-1β蛋白含量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,西药组、中药组血清IL-1β蛋白含量均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与西药组比较,中药组抑制IL-1β的表达接近,差异无统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,模型组滑膜组织NLRP3、Caspase-1表达均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,西药组、中药组滑膜组织NLRP3、Caspase-1表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05);中药组滑膜组织NLRP3、Caspase-1表达均优于西药组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 宣痹通络膏可能通过抑制NLRP3炎症体信号通路减少NLRP3、Caspase-1蛋白表达,抑制IL-1β分化成熟,从而抑制组织炎症。

宣痹通络膏对急性痛风性关节炎大鼠MyD88表达及踝关节滑膜组织形态的影响

目的:观察宣痹通络膏对急性痛风性关节炎(AGA)模型大鼠髓样分化因子88(MyD88)表达的影响。方法:将60只雄性Wistar大鼠随机分为6组:宣痹通络膏低、中、高剂量组(简称为低、中、高剂量组),秋水仙碱组,模型组,空白组,每组各10只。于大鼠踝关节局部注射尿酸钠晶体混悬液制备AGA模型,造模后当天开始进行药物干预,连续3 d。观察各组大鼠不同时间点的关节肿胀度,血清及滑膜组织中MyD88蛋白表达水平,踝关节滑膜组织病理形态学变化。结果:关节肿胀度比较,24 h时,模型组较空白组上升;48h时,高剂量组、秋水仙碱组较模型组降低;72 h时,各给药组均较模型组降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白组比较,模型组大鼠血清、滑膜组织MyD88含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组血清MyD88含量以及高、中剂量组和秋水仙碱组滑膜组织MyD88蛋白含量均降低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与模型组相比,各药物组的踝关节滑膜组织病理形态得到改善。结论:宣痹通络膏可能通过下调MyD88蛋白表达,从而改善AGA模型大鼠的踝关节滑膜损伤。