Interactions Between Thrombin and Natural Proudcts of Coreopsis tinctoria Nuttt. and Cistanche deserticola Ma. in Capillary Zone Electrophoresis

Aim A capillary zone electrophoretic method （CZE） was used to determine the interactions between natural products and thrombin. Methods Samples containing natural products and thrombin at various ratios were incubated at 25 ℃ and then were separated by CZE with Tris-acetate buffer at pH 7.2. Each run could be accomplished within 5 min. Results In CZE, the peak width broadened due to the affinity interaction between natural products and thrombin. Compared with positive and negative control, the natural products （CB-1, CB-2） from Coreopsis tinctoria Nuttt. interacted with thrombin; CB-3 from Coreopsis tinctoria Nuttt. and HC-1, HC-2, HC-3 from Cistanche deserticola Ma. did not bind to thrombin. Both qualification and quantification characterizations of the binding were determined. Conclusion The established method is capable of sensitive and fast determination of natural products and thrombin interactions, it can be employed as an alternative method.

乳酸菌发酵对雪菊体外活性的影响研究

目的:为对比研究乳酸菌发酵前、后雪菊水提取物体外抗氧化活性、XOD抑制活性、抑菌活性的变化情况。方法:运用紫外-可见分光光度法测定发酵前、后水提物清除DPPH·和ABTS+能力、抑制黄嘌呤氧化酶能力;к-B法检测发酵前、后水提物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌能力。对比研究乳酸菌发酵对雪菊水提物体外活性的影响。结果:乳酸菌发酵后雪菊水提物在0.15mg/ml DPPH·和ABTS+清除率较发酵前有明显增加。发酵前、后0.5mg/mL雪菊水提物对XOD抑制率分别为43.16%,62.19%。发酵前、后雪菊水提物对大肠杆菌的抑制性均强于金黄色葡萄球菌。相同浓度下,发酵后抑菌效果高于发酵前。结论:对乳酸菌发酵前、后雪菊水提物体外活性对比研究显示,经乳酸菌发酵后其体外抗氧化活性、抑制XOD活性、抑菌活性均增强,这为初步筛选治疗痛风的药物奠定理论基础。

两色金鸡菊提取物对四氯化碳诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

目的探讨两色金鸡菊提取物对四氯化碳(CCl4)诱导小鼠急性肝损伤的保护作用及其作用机制。方法通过正交试验得到两色金鸡菊的最佳提取工艺,利用LC-MS分析两色金鸡菊提取物的活性成分;应用CCl4诱导小鼠急性肝损伤模型,考察两色金鸡菊提取物对急性化学性肝损伤的保护作用;利用HE染色观察对肝脏组织损伤情况,考察小鼠体内ALT(谷丙转氨酶)、AST(谷草转氨酶)、SOD(超氧化物歧化酶)、MDA(丙二醛)、TNF-α(肿瘤坏死因子-α)、IL-6(白介素-6)及IL-1β(白介素-1β)等指标的变化情况。结果LC-MS分析结果显示,两色金鸡菊提取物中含有32种主要活性成分。动物试验结果显示,与空白组比较,模型组小鼠肝脏有明显病理性改变,两组小鼠ALT、AST、MDA、SOD、TNF-α、IL-6及IL-1β水平比较差异具有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,两色金鸡菊给药组小鼠肝脏病理性改变及生化指标均有所改善,其中,ALT、AST、TNF-α、IL-6及IL-1β显著降低(P<0.01或P<0.05),MDA的含量显著下降(P<0.01或P<0.05),SOD的活力显著上升(P<0.01或P<0.05)。结论两色金鸡菊提取物对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤具有明显的保护作用,作用机制可能与其抗炎、抗氧化作用相关。

两色金鸡菊降血脂活性部位筛选研究

目的:研究两色金鸡菊降血脂活性部位。方法:采用溶剂法通过降血脂活性筛选确定较佳的提取溶剂,并对提取物精制纯化进行降血脂活性考察。结果:两色金鸡菊水提物在高剂量下能显著降低高血脂小鼠血清中TC和LDL-C含量;水提物精制部位在低剂量下可显著降低血清TC和LDL-C含量;水提物和水提物经大孔吸附树脂30%乙醇洗脱部位高剂量下均可显著降低血清TC和LDL-C蛋白含量。结论:两色金鸡菊的最佳提取溶剂为水,大孔吸附树脂30%乙醇洗脱部位为活性部位。

昆仑雪菊标志性黄酮化合物的分离与鉴定

本研究以总黄酮含量和1,1-二苯基-2-硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率为指标,结合高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)分析,对3种昆仑雪菊进行溶剂提取和参数优化。结果表明,最佳萃取溶剂为甲醇,黄酮得率最高的昆仑雪菊品种为1号,所得提取物的总黄酮含量为65.01 mg/g,DPPH自由基清除率为73.59%。HPLC-质谱(mass spectrometry,MS)初步鉴定了昆仑雪菊中含量最高的10种黄酮类化合物,利用大孔树脂、减压柱层析、常压柱层析和凝胶层析分离纯化提取物得到8个单体化合物,利用MS和核磁共振等技术鉴定出这8个化合物分别为木犀草素、7,8,3’,4’-四羟基二氢黄酮、二氢槲皮素、奥卡宁、槲皮素、槲皮万寿菊素、黄诺马苷和马里苷,并通过HPLC分析和DPPH自由基清除活性确定昆仑雪菊中的标志性黄酮化合物为奥卡宁。

基于肠道菌群探讨黄诺玛苷对脾虚泄泻小鼠肠道功能的影响

目的基于肠道菌群探讨黄诺玛苷对脾虚泄泻小鼠肠道功能的影响。方法将小鼠随机分为空白组和造模组,造模组采用大黄水煎液灌服结合潮湿环境法建立脾虚泄泻模型;随后造模组随机分为模型组、黄诺玛苷组、阳性对照组,空白组和模型组灌服蒸馏水,给药组分别灌服相应药物。观察小鼠一般体征指标和结肠组织病理学变化,测定炎症因子水平,16S基因测序技术分析肠道菌群,利用1H-NMR技术检测小鼠粪便短链脂肪酸(SCFA)水平。结果黄诺玛苷会上调脾虚泄泻小鼠Bacteroidota、Muribaculaceae、Eubacterium-coprostanoligenesgroup等肠道优势有益菌群的丰度及肠道菌群多样性和丰富度,下调Firmicutes、Proteobacteria、Campilobacterota、Helicobacter、Ruminococcus-torques-group、Colidextribacter等肠道优势有害菌群的丰度,使肠道优势菌群丰度趋于空白组小鼠。肠道优势有益菌群跟脾虚泄泻小鼠血清白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管活性肠肽(VIP)成负相关,与白细胞介素10(IL-10)、胃泌素(GAS)成正相关;肠道优势有害菌群跟之相反。结论黄诺玛苷可能是通过调节脾虚泄泻小鼠肠道微生态平衡,发挥抑制血清和肠道炎症、保护及修复肠黏膜、提升免疫功能、改变肠道SCFA水平作用,有效抑制小鼠脾虚泄泻的发生与恶化。

药桑、两色金鸡菊、刺山柑提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用研究

以三种新疆特色食药两用资源药桑、两色金鸡菊、刺山柑为研究对象,以临床糖尿病常用的药物阿卡波糖为阳性对照,用经典α-葡萄糖苷酶活性测定方法,对其水提物及醇提物进行酶抑制活性筛选,并对其中抑制作用最强的提取物进行了酶促反应动力学分析。药桑、两色金鸡菊、刺山柑提取物对α-葡萄糖苷酶均有明显的抑制作用,药桑醇提物IC_(50)为2.636μg·mL^(-1)、药桑水提物IC50为7.948μg·mL^(-1)、两色金鸡菊醇提物IC_(50)为0.000645μg·mL^(-1)、两色金鸡菊水提物IC_(50)为6.962μg·mL^(-1)、刺山柑醇提物IC_(50)为78.11μg·mL^(-1)、刺山柑水提物IC50为88.5μg·mL^(-1)、阿卡波糖IC_(50)为24.68μg·mL^(-1);由酶动力学实验结果得到,两色金鸡菊醇提物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用表现为可逆竞争性抑制。两色金鸡菊及药桑的水及醇提物具有较好的α-葡萄糖苷酶抑制活性,可作为潜在的抑制α葡萄糖苷酶、降低餐后血糖的食药两用资源,具有较高的研究价值。

雪菊质量标准及抗氧化活性研究

目的:建立雪菊的质量检验方法,评价不同产地雪菊的抗氧化活性。方法:对12批雪菊进行性状及显微鉴别;参照2020年版《中华人民共和国药典》方法测定水分、总灰分、浸出物含量;紫外-可见分光光度法(UV-Vis)测定雪菊总黄酮含量;测定12批雪菊的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率及对小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)浓度的影响;采用层次分析-变异系数法结合优劣解距离法评价不同产地雪菊抗氧化活性。结果:12批雪菊性状稳定,水分、总灰分为(6.92±0.02)%~(9.71±0.12)%、(5.90±0.03)%~(7.46±0.21)%,水溶性和醇溶性浸出物分别为(38.63±0.30)%~(45.78±0.07)%、(40.77±0.14)%~(46.55±0.24)%,雪菊总黄酮含量为(168.44±1.27)~(289.42±0.25)mg/g;12批雪菊抗氧化活性排序为S1(新疆克里阳)>S8(云南丽江)>S6(青海都兰)>S2(新疆库尔勒)>S7(云南昆明)>S12(西藏拉萨)>S5(青海西宁)>S9(云南丽江)>S3(新疆克里阳)>S4(青海西宁)>S11(西藏林芝)>S10(西藏林芝)。结论:初步拟定雪菊中水分、总灰分不超过12%、8%,水溶性浸出物、醇溶性浸出物均不少于30%,雪菊总黄酮含量不低于160 mg/g。S1(新疆克里阳)、S8(云南丽江)和S6(青海都兰)的雪菊抗氧化活性较好。

发酵型雪菊乳饮料的稳定性研究

以发酵型雪菊乳饮料为研究对象,分别加入黄原胶、羧甲基纤维素钠、卡拉胶、蔗糖酯、果胶5种稳定剂进行单因素试验,以沉淀率为评价指标,筛选出影响较大的因素进行正交试验,以期获得最佳复合稳定剂组合,从而提高其稳定性。结果表明,当稳定剂羧甲基纤维素钠的用量为0.10%,蔗糖酯的用量为0.35%,果胶的用量为0.35%时,雪菊乳饮料的稳定性最佳,其沉淀率为0.19%,色泽为黄绿色,未分层,牛奶香与花香和谐,香味浓厚,无异味,无黏稠感。

昆仑雪菊醇提物对不同模拟体系晚期糖基化终产物生成活性的影响

为了探讨昆仑雪菊醇提物对美拉德反应晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)生成的抑制作用,建立乳糖-酪蛋白和葡萄糖-赖氨酸-亚油酸两种模拟体系,以不同浓度昆仑雪菊醇提物作为抑制剂,研究其对AGEs生成的抑制作用。通过分析昆仑雪菊醇提物中总黄酮含量以及反应体系在热处理条件下荧光性AGEs的生成、酪蛋白羰基化程度、赖氨酸相对含量与葡萄糖余量,阐明昆仑雪菊醇提物对AGEs生成的抑制作用程度。结果表明:昆仑雪菊醇提物对AGEs具有显著的抑制作用,0.5 mg/mL醇提物在140℃条件下对AGEs的抑制率可达70.44%;昆仑雪菊醇提物处理后,反应体系中赖氨酸和葡萄糖余量显著高于对照组(P<0.05)。该研究证明,昆仑雪菊醇提物在食品加工过程中能够有效减少AGEs的生成,可为开发食品级的AGEs抑制剂提供数据参考和理论依据,使慢性病患者受益。

昆仑雪菊黄酮类提取物抗脂多糖诱导的小胶质细胞活化作用及网络药理学机制分析

目的:研究昆仑雪菊干预小胶质细胞功能的作用机制。方法:采用CCK-8法检测昆仑雪菊总黄酮对BV2细胞的增殖抑制活性,Griess法和ELISA检测细胞炎症因子一氧化氮(NO)、白细胞介素-6(IL-6)的分泌。借助自建昆仑雪菊成分-靶点数据集对昆仑雪菊中9个主要黄酮成分和相关作用靶点进行筛选。通过GeneCards、GENE、STRING数据库及R语言收集并筛选小胶质细胞功能靶点,筛选昆仑雪菊改善小胶质细胞功能的靶点,构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,并用Cytoscape软件的NetworkAnalyzer功能筛选核心靶点。利用基因集富集分析(GSEA)软件对分子特征数据库MSigDB中的相关靶点进行Hallmark基因分析。使用Bioconductor数据库进行基因本体(GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果:昆仑雪菊黄酮类提取物在4μg·mL–1时可以显著抑制小胶质细胞激活分泌NO和IL-6。昆仑雪菊黄酮类成分可能作用于蛋白激酶B(Akt)、肿瘤坏死因子(TNF)、IL-6、TP53、酪氨酸激酶C(SRC)、表皮生长因子受体(EGFR)、JUN、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、丝裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)、CTNNB1等靶点干预小胶质细胞的功能。涉及的通路包括磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-Akt信号通路、MAPK信号通路、TNF信号通路、信号转导子和转录激活子(JAK)-STAT信号通路等。结论:昆仑雪菊黄酮类成分可能通过参与调控PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、TNF信号通路、JAK-STAT信号通路等的相关靶点,实现调节胶质细胞活化的作用。

两色金鸡菊中马里苷的肠道菌群代谢转化

该研究探讨了两色金鸡菊中马里苷的肠道菌群代谢情况,考察了马里苷代谢规律并探索其原型成分与代谢产物的相关性。采集健康SD大鼠新鲜粪便制备肠菌孵育液,建立大鼠肠道菌群体外孵育模型,与马里苷单体在厌氧环境下共孵育。采用超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间高分辨质谱(Ultrahigh Performance Liquid Chromatography Tandem Quadrupole Time-of-flight Mass Spectrometry,UHPLC-Q-TOF-MS/MS)技术对0、6、12、24、36 h的代谢产物进行定性分析。利用外标法对马里苷及其4种主要代谢产物黄诺马苷、异奥卡宁、异绿原酸B、奥卡宁不同时间段的含量进行测定,观察马里苷在肠道菌培养液中的代谢规律。最终在大鼠肠道菌群孵育液中共鉴定出11个代谢产物,发现马里苷在肠道菌群代谢过程中主要发生了异构化、葡萄糖醛酸化、环裂解、羟基化、乙酰化等反应。马里苷在肠道菌的作用下,6 h就已检测不到原型成分,12~24 h主要的代谢产物为异奥卡宁、奥卡宁、7,3',5'-三羟基黄酮、槲皮素等由马里苷代谢产生的苷元。综上,肠道菌加速了马里苷的水解脱糖,在代谢后期产生的代谢产物均为苷元。

基于高效液相色谱指纹图谱的不同产地不同采摘期昆仑雪菊的化学模式识别及抗氧化谱效关系探究

干燥、粉碎10批不同产地、不同采摘期的昆仑雪菊样品,分取0.2 g,用60%(体积分数)甲醇溶液50 mL超声提取30 min,过0.45μm滤膜,所得溶液(质量浓度为4000 mg·L^(-1))进入高效液相色谱仪,其中各组分在Agilent HC-C_(18)色谱柱上用不同体积比的0.4%(体积分数)乙酸溶液和乙腈的混合溶液进行梯度洗脱分离,在285 nm波长下检测。以中药色谱指纹图谱相似度评价系统建立指纹图谱,筛选共有组分并进行相似度评价。对绿原酸进行方法学考察,并以绿原酸为参照计算各共有组分的含量。以聚类分析和主成分分析等化学模式识别法对不同产地、不同采摘期的样品进行分类。分别采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除法测定10批样品的抗氧化活性,以灰色关联分析法建立共有组分峰面积数据和抗氧化活性的谱效关系。结果显示:10批样品指纹图谱以及它们与对照指纹图谱之间的相似度均大于0.900,共有组分有24个;两种化学模式识别法均将样品分为4类,推测分类结果和产地、采摘期有关。2种自由基清除法所得的关联度大于0.800的组分各有5个,可选作昆仑雪菊的药效控制点。

近红外光谱结合偏最小二乘回归所建模型快速预测雪菊的抗氧化活性

将10批不同产地的雪菊样品自然干燥,粉碎,过筛,分取0.2 g,加入50 mL 35%(体积分数)甲醇溶液,静置过夜,超声处理30 min,抽滤,收集滤液,采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)法和2,2′-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)法测定雪菊的抗氧化活性(参考值)。利用近红外光谱仪对100个雪菊粉末样品分别进行光谱扫描,采用近红外积分球漫反射模式进行光谱采集,分别采用标准正态变量(SNV)+连续小波变换(CWT)和CWT对原始近红外光谱数据进行预处理,结合偏最小二乘回归(PLSR),在4767~4960 cm^(-1)、5153~6966 cm^(-1)、7120~8813 cm^(-1)波段内建立DPPH抗氧化活性模型,在5153~7081 cm^(-1)、7660~8624 cm^(-1)波段内建立ABTS抗氧化活性模型。结果表明:DPPH抗氧化活性模型的交叉验证均方根误差(RMSECV)为0.772,相关系数(R)为0.948,预测残差值(RPD)为3.17;ABTS抗氧化活性模型的RMSECV为0.365,R为0.884,RPD为2.52。利用模型预测雪菊样品的DPPH和ABTS抗氧化活性,预测值和参考值基本一致,并且DPPH抗氧化活性模型的预测均方根误差(RMSEP)为0.705,ABTS抗氧化活性模型的RMSEP为0.377。

雪菊与市售菊花活性成分的比较研究

采用Al(NO3)3-NaNO2分光光度比色法测定菊花中总黄酮的含量,采用高效液相色谱法测定菊花中多种活性成分的含量,研究比较了雪菊与市售菊花活性成分的差异。研究表明:雪菊和市售菊花中总黄酮的含量(DW)分别为117.15～153.04 mg/g和27.05～51.82 mg/g,绿原酸、金丝桃苷、黄芪苷、槲皮素和山奈素为雪菊和市售菊花共有单体成分,而邻苯二酚、香草酸、丁香酸、芦丁仅在雪菊中检测到,白藜芦醇则仅在市售菊花中检测到。雪菊中总黄酮含量显著高于市售菊花,且酚类化合物单体组成更加丰富,含量亦相对较高,是一种药用价值更高的菊花品种,具有较高的研究和开发价值。

雪菊化学成分分析、提取、鉴定及其生物活性研究进展

对目前国内外在雪菊(Coreopsis tinctoria)的有效化学成分分析、提取、鉴定及其生物活性等方面的研究进展进行综述,并提出一些建议,旨在为雪菊的深入研究和开发利用提供参考。

两色金鸡菊醇提物对自发性高血压大鼠尿液的代谢组学研究

目的研究两色金鸡菊醇提物对自发性高血压大鼠尿液内源性代谢产物的影响。方法将自发性高血压大鼠(SHR)分为模型组、两色金鸡菊醇提物高、中、低剂量组(3.2、1.6、0.8 g·kg-1)、卡托普利组(4 mg·kg-1)及杜仲平压片组(187.5 mg·kg-1),连续灌胃给药4周。采用无创血压计观察其对血压的影响;连续4周收集各组大鼠尿液,通过NMR核磁共振氢谱仪对尿液中内源性代谢物进行代谢谱分析,使用SIMCA-P软件进行PLS-DA分析。结果干预4周后,各给药组大鼠血压均明显下降(P<0.01);给药组与对照组相比,大鼠尿液代谢物异亮氨酸、肌酸酐、β-葡萄糖、鲨肌醇等有明显变化。结论两色金鸡菊醇提物灌胃对自发性高血压大鼠机体代谢产生了影响,而通过代谢组学发现的差异物质,可以作为标志物进一步阐释两色金鸡菊的药性研究工作并提供实验依据。

两色金鸡菊化学成分和药理作用研究进展

两色金鸡菊原产于美国,主要作为景观植物栽培,后分布于世界各地。在我国新疆地区野生资源丰富,两色金鸡菊含有黄酮类、挥发油类、多酚类、苯丙素类、皂苷类、氨基酸类、糖类以及脂肪酸类等化学成分,具有抗炎、抗氧化、降血压、调血脂、改善凝血功能、抑制α-葡萄糖苷酶、恢复糖耐量受损情况、降低血糖和抗菌等生物活性,具有很好的开发应用前景。本文对两色金鸡菊化学成分和药理作用的研究文献进行综述,为其开发利用提供参考。

顶空固相微萃取气质联用分析比较雪菊与市售菊花的挥发性成分

采用顶空固相微萃取(HS-SPME)结合气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)对不同种类菊花的挥发性成分进行分析鉴定,用面积归一法计算其相对含量。结果表明:鉴定出8种菊花的挥发性成分共52个,发现雪菊和市售菊花中挥发性成分较复杂,雪菊中挥发性成分主要以萜烯类、醛酮类、醇类化合物为主,市售菊花中挥发性成分主要以萜烯类、芳烃衍生物为主。雪菊中挥发性成分的种类较市售菊花种类要多,总的相对百分含量也较市售菊花要高,说明菊花品种不同,其化学成分也有一定的差异。HS-SPME结合GC-MS方法能准确反映菊花中的挥发性组分,为雪菊的进一步开发利用提供了理论依据。

响应面分析昆仑雪菊水溶性黄酮类化合物的提取工艺

以新疆昆仑山产雪菊为原料,采用水作为萃取剂提取黄酮类化合物,研究提取温度料液比、提取时间和粒度大小4因素对生物黄酮含量的影响,进行响应面试验设计分析。以黄酮类化合物含量为指标,通过响应面法对提取工艺条件进行优化,最终确定水溶液萃取法提取黄酮的最优条件为提取温度90℃、料液比1:90(g/mL)、提取时间60min、粒度40目,在此条件下昆仑雪菊的水溶性黄酮含量为24.85%。