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黄色瘤胃球菌木聚糖酶基因xynB的异源表达与酶学性质研究
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作者 毕海红 胡馨元 +5 位作者 王玉洁 翟圣君 张竞月 孙丽萍 王琴 夏呈强 《现代畜牧科技》 2024年第2期1-5,共5页
该试验以黄色瘤胃球菌基因组为模板,通过PCR扩增获得目的基因xynB,将xynB与表达载体PET28a连接,获得重组载体PET28a-xynB。用IPTG对含有重组载体的大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,镍离子层析柱纯化后检测其酶学性质。生物信息学分析表明... 该试验以黄色瘤胃球菌基因组为模板,通过PCR扩增获得目的基因xynB,将xynB与表达载体PET28a连接,获得重组载体PET28a-xynB。用IPTG对含有重组载体的大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,镍离子层析柱纯化后检测其酶学性质。生物信息学分析表明,XynB理论大小为47 kDa,预测等电点为4.49,不含信号肽,含有1个糖苷水解酶11家族结构域和1个碳水化合物结合结构域。酶学性质研究结果表明,该酶的最适pH值为5.0,最适反应温度为40℃,金属离子Mg^(2+)、Na^(+)、K^(+)和Ba^(2+)对木聚糖酶XynB有较好的激活效果。综上可知,黄色瘤胃球菌木聚糖酶XynB属于GH11家族,最适pH值为5.0,最适温度为40℃,酶比活力为62.94 U/mg。 展开更多
关键词 黄色瘤胃球菌 木聚糖酶 xynb 异源表达 酶学性质
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农杆菌介导的xynB基因转化苜蓿的初步研究 被引量:6
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作者 苏玉春 陈光 +1 位作者 白晶 韩微微 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2010年第4期113-116,共4页
构建了PBI121-xynB表达载体,利用农杆菌介导法进行紫花苜蓿遗传转化研究,将xynB基因的cDNA序列导入苜蓿。转基因植株生长发育良好,RT—PCR检测xynB基因已经导入到苜蓿中,DNS方法检测转基因植株的木聚糖酶活性为10.5 U/g鲜叶片。
关键词 木聚糖酶xynb基因 紫花苜蓿 转化
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木聚糖酶XYNB分子中折叠股B1和B2间的疏水作用对酶热稳定性的影响 被引量:10
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作者 杨浩萌 姚斌 +6 位作者 罗会颖 张王照 王亚茹 袁铁铮 柏映国 伍宁丰 范云六 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期414-419,共6页
对来源于Streptomycesolivaceoviridis的高比活木聚糖酶XYNB进行同源建模,并结合嗜热木聚糖酶氮末端芳香族氨基酸疏水作用的结构分析,设计了XYNB的T11Y定点突变,观察XYNB分子中折叠股B1和B2的疏水作用对酶的热稳定性的影响。将突变酶XYN... 对来源于Streptomycesolivaceoviridis的高比活木聚糖酶XYNB进行同源建模,并结合嗜热木聚糖酶氮末端芳香族氨基酸疏水作用的结构分析,设计了XYNB的T11Y定点突变,观察XYNB分子中折叠股B1和B2的疏水作用对酶的热稳定性的影响。将突变酶XYNB′在毕赤酵母中表达,表达的XYNB′经纯化后与原酶XYNB(同样经毕赤酵母表达后纯化)进行酶学性质比较,结果表明,XYNB′的耐热性比XYNB有明显的提高,但最适温度与原酶一样为6 0℃。另外,XYNB′的最适pH、Km值及比活性均有一定的改变。实验证实了木聚糖酶XYNB的氮端芳香族氨基酸之间的疏水相互作用与其热稳定性相关,为进一步的结构与功能研究提供了优良的基因材料。 展开更多
关键词 木聚糖酶xynb 定点突变 热稳定性
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链霉菌Streptomyces sp. S9木聚糖酶基因xynBS9的克隆表达及性质分析 被引量:1
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作者 姚国玉 李宁 +2 位作者 石鹏君 陈强 姚斌 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2009年第4期64-70,共7页
通过设计简并引物和构建基因组文库的方法从链霉菌Streptomycessp.S9中克隆得到-βl,4-木聚糖酶基因xynBS9。该基因全长1 023 bp,编码340个氨基酸。将不带原基因信号肽编码序列的xynBS9以正确阅读框架克隆到表达载体pET-22b(+)上,并在... 通过设计简并引物和构建基因组文库的方法从链霉菌Streptomycessp.S9中克隆得到-βl,4-木聚糖酶基因xynBS9。该基因全长1 023 bp,编码340个氨基酸。将不带原基因信号肽编码序列的xynBS9以正确阅读框架克隆到表达载体pET-22b(+)上,并在大肠杆菌BL2 l(DE3)中诱导表达。重组蛋白经硫酸铵分级沉淀和疏水柱纯化后达到电泳纯。酶学性质分析表明,重组木聚糖酶最适温度为60℃,最适pH为6.5,在碱性条件下具有良好的稳定性。 展开更多
关键词 链霉菌 木聚糖酶 xynbS9基因 原核表达
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木聚糖酶XynB-E18的重组表达纯化及酶学性质测定 被引量:1
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作者 宋迎 鲁芳 +7 位作者 严孝金 张蓓 刘永 张立 孟昆 杨培龙 姚斌 高伟 《山东农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2018年第2期320-325,共6页
为了测定木聚糖酶Xyn B-E18的活性以及酶学特征,采用大肠杆菌原核表达系统对来源于青贮饲料菌群的木聚糖酶Xyn B-E18进行重组表达纯化。在16℃180 r·min-1条件下表达,并通过Ni亲和层析和分子排阻层析的方法进行纯化,用DNS显色法测... 为了测定木聚糖酶Xyn B-E18的活性以及酶学特征,采用大肠杆菌原核表达系统对来源于青贮饲料菌群的木聚糖酶Xyn B-E18进行重组表达纯化。在16℃180 r·min-1条件下表达,并通过Ni亲和层析和分子排阻层析的方法进行纯化,用DNS显色法测定其酶学性质。得到的重组蛋白能在大肠杆菌中获得高效表达,纯化后的蛋白溶液纯度达90%以上,蛋白分子量约为38k Da,酶活力可达1782 U,最适反应p H为6.5,在中性偏碱性条件下酶的稳定性较好,最适反应温度为50℃,在50℃以下酶的热稳定性保持较好。实验结果表明Xyn B-E18具有良好的稳定性,可具有更大应用潜力。 展开更多
关键词 xynb-E18 重组表达 分离纯化 酶学特性
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耐热木聚糖酶xynB_(64)和红色荧光蛋白Dsred2的融合表达及其应用 被引量:1
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作者 白羽 申宁 《安徽农业科学》 CAS 2012年第7期3891-3893,共3页
[目的]耐热木聚糖酶xynB64的表达研究,探讨利用红色荧光蛋白Dsred2标签简便快捷地检测包涵体复性的效率。[方法]构建重组质粒pET42a-xynB64和pET42a-xynB64-Dsred2,利用宿主菌Rosetta(DE3)进行表达,DNS法测定酶活,并检测其荧光强度和尿... [目的]耐热木聚糖酶xynB64的表达研究,探讨利用红色荧光蛋白Dsred2标签简便快捷地检测包涵体复性的效率。[方法]构建重组质粒pET42a-xynB64和pET42a-xynB64-Dsred2,利用宿主菌Rosetta(DE3)进行表达,DNS法测定酶活,并检测其荧光强度和尿素复性的包涵体。[结果]红色荧光蛋白Dsred2促进了目的蛋白可溶性表达,重溶包涵体经激发后发射光波长在583 nm,光强度与可溶性大致成正比。[结论]研究表明红色荧光蛋白Dsred2在包涵体复性中可作为报告蛋白,该结果为工业化复性包涵体提供了检测依据。 展开更多
关键词 耐热木聚糖酶xynb64 红色荧光蛋白Dsred2 原核表达 包涵体
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木聚糖酶基因xynB在不同大肠杆菌表达系统中的表达比较 被引量:3
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作者 李飞 李迅 +2 位作者 孙静 王飞 赵林果 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期100-103,共4页
从黑曲霉(Aspergillus niger)nl-1中克隆获得木聚糖酶基因xynB.该基因全长745 bp,含有67 bp内含子,与公布的黑曲霉xynB基因有较高的同源性.将PCR扩增的木聚糖酶成熟肽基因和含有信号肽的基因分别连接到表达载体肠杆菌Top10 F'、DH10... 从黑曲霉(Aspergillus niger)nl-1中克隆获得木聚糖酶基因xynB.该基因全长745 bp,含有67 bp内含子,与公布的黑曲霉xynB基因有较高的同源性.将PCR扩增的木聚糖酶成熟肽基因和含有信号肽的基因分别连接到表达载体肠杆菌Top10 F'、DH10B和两种BL21宿主中获得重组菌株.通过IPTG诱导,xynB基因在重组菌株中获得特异性表达.表达产物以胞内可溶性蛋白和不溶性包涵体形式存在.诱导4 h,重组菌株pTrc-99a-xynB[BL21 condon plus(DE3)]表达量最高,胞内酶活达到299 IU/L.重组质粒pTrc-99a-xyn B(S)在不同宿主胞内和胞外均能分泌目的蛋白,诱导10 h,胞外酶活pTrc-99a-xynB(S)[BL21 condon plus(DE3)]达到347 IU/L.而pET-20b-xynB(S)在两种BL21宿主中均不表达.经SDS-PAGE分析,以pTrc-99a和pET-20b作为表达载体时,重组蛋白相对分子质量分别约为45×103和30×103.与pET-20b相比,pTrc-99a以及自身信号肽的引导更有利于重组木聚糖酶的表达. 展开更多
关键词 木聚糖酶 xynb基因 大肠杆菌 重组表达 信号肽 黑曲霉
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具有高比活性的新木聚糖酶XYNB的酶学性质研究及其编码基因的克隆和表达 被引量:4
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作者 张红莲 姚斌 +2 位作者 王亚茹 张王照 袁铁铮 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第4期364-368,共5页
纯化了橄榄绿链霉菌Al产生的胞外木聚糖酶XYNB,并对其酶学性质进行了测定,XYNB具有优良的酶学性质,最适pH为5.2,最适温度为60℃,比活性高达2869.78 U/mg,对金属离子及EDTA和SDS等具有较好的抗性,根据木聚糖酶成熟蛋白N端氨基酸序列测序... 纯化了橄榄绿链霉菌Al产生的胞外木聚糖酶XYNB,并对其酶学性质进行了测定,XYNB具有优良的酶学性质,最适pH为5.2,最适温度为60℃,比活性高达2869.78 U/mg,对金属离子及EDTA和SDS等具有较好的抗性,根据木聚糖酶成熟蛋白N端氨基酸序列测序结果设计引物,克隆了此酶的成熟蛋白编码基因xynB,基因全长576 bp,(G+C)含量为64.3%,编码191个氦基酸,理论分子量为20.839kD,是一种新的木聚糖酶基因.构建了xynB表达载体并在大肠杆菌中得到了表达,表达产物具有正常的生物学活性. 展开更多
关键词 比活性 木聚糖酶 xynb 酶学性质 编码基因 橄榄绿链霉菌A1 基因克隆 基因表达
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Characterization, gene cloning and expression of new xylanase XYNB with high specific activity 被引量:6
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作者 ZHANG Honglian, YAO Bin, WANG Yaru, ZHANG Wangzhao & YUAN Tiezheng Feed Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China Correspondence should be addressed to Yao Bin(email: yao-bin@public3.bta.net.cn) 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2003年第8期761-765,共5页
Extracellular xylanase XYNB from Streptomy-ces olivaceoviridis A1 has been purified and characterized. The optimal pH value and temperature of XYNB for its ac-tivity are 5.2 and 60℃, respectively. The specific activi... Extracellular xylanase XYNB from Streptomy-ces olivaceoviridis A1 has been purified and characterized. The optimal pH value and temperature of XYNB for its ac-tivity are 5.2 and 60℃, respectively. The specific activity of XYNB is as high as 2869.78 U/mg. Metal cations, EDTA and SDS have no effects on enzyme activity of XYNB. The gene xynB coding mature protein of XYNB has been cloned by PCR. The forward oligonucleotide primer used in the PCR reaction was synthesized based on the N-terminal amino acid sequence of XYNB mature protein, and the reverse oligonu-cleotide primers are random oligonucleotide. The cloned gene xynB is 576 bp long and its G+C content is 64.3%. The xynB encodes 191 amino acid residues, and the putative mo-lecular weight of XYNB is 20.839 kD. The xynB has been expressed in E. coli, and the expressed xylanase has normal bioactivity. 展开更多
关键词 基因克隆技术 基因表达 木聚糖酶 xynb 比活度
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木聚糖酶-甘露聚糖酶融合酶基因Linker优化及其在猪肾pK15细胞中共表达 被引量:5
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作者 张献伟 张冠冠 +8 位作者 吴珍芳 孟繁明 刘德武 张茂 许卫华 郑恩琴 贺晓燕 李真 李紫聪 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第22期4774-4783,共10页
[目的]构建木聚糖酶(XynB)与甘露聚糖酶(ManA)的融合酶基因,使其能在哺乳动物表达系统中表达并分泌兼有木聚糖酶和甘露聚糖酶活性的双功能融合酶。[方法]利用基因融合技术(SOE—PCR),把11条Linker融合到木聚糖酶(XynB)和甘露... [目的]构建木聚糖酶(XynB)与甘露聚糖酶(ManA)的融合酶基因,使其能在哺乳动物表达系统中表达并分泌兼有木聚糖酶和甘露聚糖酶活性的双功能融合酶。[方法]利用基因融合技术(SOE—PCR),把11条Linker融合到木聚糖酶(XynB)和甘露聚糖酶(ManA)基因间,构建真核表达载体,经转染猪肾细胞(pKl5)收集细胞培养液,用DNS法测定其酶活并进行酶学分析。[结果]经表达分析12条不同Linker构建的融合酶与亲本酶酶活,发现用Linkera3、pS3和具有“自我剪切”能力T2A构建的融合酶在木聚糖酶和甘露聚糖酶活性都显著高于两亲本酶。融合酶XynB-a3-ManA的木聚糖酶和甘露聚糖酶酶活比亲本酶XynB和ManA分别提高了54.06%和104.40%;该融合酶在酸性环境3.0—7.0起作用,对pH3.08.0具有一定的耐受力。[结论]首次获得可在哺乳动物系统表达分泌的增强型双功能XynB—ManA融合酶。 展开更多
关键词 木聚糖酶 甘露聚糖酶 LINKER 融合酶 酶活测定
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In vitro gastrointestinal digestion study of two wheat cultivars and evaluation of xylanase supplementation 被引量:2
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作者 Mickael Lafond Bernard Bouza +5 位作者 Sandrine Eyrichine Friedrich Rouffineau Luc Saulnier Thierry Giardina Estelle Bonnin Aurélie Preynat 《Journal of Animal Science and Biotechnology》 SCIE CAS CSCD 2015年第3期355-368,共14页
Background: The filamentous fungus Talaromyces versatifis is known to improve the metabolizable energy of wheat- based poultry diets thanks to its ability to produce a pool of CAZymes and particularly endo-β(1,4)-... Background: The filamentous fungus Talaromyces versatifis is known to improve the metabolizable energy of wheat- based poultry diets thanks to its ability to produce a pool of CAZymes and particularly endo-β(1,4)-xylanases. In order to appreciate their in vivo mode of action, the supplementation effect of two of its xylanases, XynD and XynB from families GH10 and GHll respectively, have been evaluated on two different wheat cultivars Caphorn and Isengrain, which were chosen amongst 6 varieties for their difference in non starch polysaccharides content and arabinoxylan composition. Results: Polysaccharides digestion was followed during 6 h along the digestive tract using the TNO gastrointestinal model-1, to mimic monogastric metabolism. Polysaccharide degradation appeared to occur mainly at the jejunal level and was higher with Isengrain than with Caphorn. For both cultivars, XynD and XynB supplementation increased notably the amount of reducing end sugars into the jejuno-ileal dialysates, which has been confirmed by a valuable increase of the soluble glucose into the jejunal dialysates. Conclusions: The amounts of arabinose and xylose into the dialysates and ileal deliveries increased consequently mainly for Caphorn, suggesting that XynD and XynB supplementation in wheat-based diet could alleviate the anti-nutritional effects of arabinoxylans by limiting the physical entrapment of starch and could increase the available metabolizable energy. 展开更多
关键词 in vitro TNO gastrointestinal model-1 Talaromyces versatilis Wheat cultivars xynb XynD
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响应面法优化木聚糖酶和α-葡萄糖醛酸酶联合水解桦木木聚糖工艺 被引量:1
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作者 董媛媛 李亚贤 +1 位作者 沈艺红 薛业敏 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第4期125-131,共7页
在单因素试验基础上应用响应面试验,优化重组耐热性木聚糖酶(Xyn B)和α-葡萄糖醛酸酶(Agu A)联合水解桦木木聚糖的条件。响应面法分析结果显示,4个影响因素的最佳组合为底物质量浓度4.2 g/100 m L、酶解温度80.66℃、p H 7.65、Xyn B/A... 在单因素试验基础上应用响应面试验,优化重组耐热性木聚糖酶(Xyn B)和α-葡萄糖醛酸酶(Agu A)联合水解桦木木聚糖的条件。响应面法分析结果显示,4个影响因素的最佳组合为底物质量浓度4.2 g/100 m L、酶解温度80.66℃、p H 7.65、Xyn B/Agu A加酶量60/9 U/g,此时还原糖释放量为17.82 mg/m L。利用木聚糖酶和葡萄糖醛酸酶共同作用木聚糖4 h所得低聚木糖中还原糖质量浓度为17.91 mg/m L,木二糖质量浓度为13.66 mg/m L。 展开更多
关键词 木聚糖酶 α-葡萄糖醛酸酶 木聚糖水解 响应面试验 优化
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