神经肽Y基因多态性及其与小尾寒羊产羔数的关系

本研究旨在阐明神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)基因的多态性及其与小尾寒羊产羔数的关系,为绵羊多羔性的标记辅助选择提供科学依据。采用PCR-SSCP技术检测NPY基因全部3个外显子在小尾寒羊、湖羊、特克塞尔和多赛特羊中的单核苷酸多态性,分析该基因对小尾寒羊多羔性的影响。仅引物P1扩增片段存在多态性,在小尾寒羊中检测到5种基因型,在湖羊和多赛特羊中检测到3种基因型,而在特克塞尔羊中仅检测到1种基因型;测序分析显示,在小尾寒羊中存在CR、TR和TW 3种等位基因,在湖羊和多赛特羊中存在CR和TR 2种等位基因,而在特克塞尔中仅存在CR 1种等位基因。TR与CR相比在绵羊NPY基因编码区第93 bp处发生了1个C→T的单碱基突变;TW与CR相比除发生C93T的单碱基突变外,还在130和131 bp发生了GA→AT的双碱基突变,该突变引起绵羊NPY成熟肽第16位氨基酸由天冬氨酸变为异亮氨酸。对于多态位点C/T,小尾寒羊3种基因型之间产羔数差异均不显著(P>0.05)。对于多态位点GA/AT,RW型小尾寒羊产羔数平均比RR型的多0.56只(P<0.05)。在小尾寒羊5种复合基因型中,TTRW和CTRW型小尾寒羊产羔数差异不显著(P>0.05);TTRR、CTRR和CCRR型小尾寒羊产羔数差异也不显著(P>0.05);TTRW和CTRW型小尾寒羊产羔数均显著高于其余3种基因型(P<0.05)。本研究结果初步表明NPY基因GA/AT突变位点的W等位基因是提高绵羊产羔数的1个潜在有效的DNA标记。

斑节对虾细胞周期蛋白Y基因克隆与原核表达

为了研究细胞周期蛋白Y（cyclin Y）在斑节对虾（Penaeus monodon）卵巢发育中的作用,从斑节对虾转录组数据中筛选获得cyclin Y基因部分序列,采用SMART-RACE方法克隆得到斑节对虾细胞周期蛋白Y （Pm-cyclin Y）基因cDNA全序列。Pm-cyclin Y基因cDNA全长1576 bp,其中包含108 bp的5′非编码区（5′UTR）和439 bp的3′非编码区（3′UTR）以及1029 bp的开放阅读框（ORF）,可编码342个氨基酸。生物信息学分析显示,其编码的氨基酸序列有1个保守的周期蛋白框（cyclin box）同源结构域（172~257 aa）,预测的分子量约为37.6 kD,理论等电点6.64。实时定量 PCR 显示其 mRNA 在卵巢的表达量显著高于其他组织（P〈0.05）；并且在卵巢5个不同发育期都有表达,在III期卵巢中的表达量最高。本研究通过原核表达方法对Pm-cyclin Y进行重组表达,为其蛋白质功能方面的研究奠定了基础。

催乳素和神经肽Y基因及基因聚合对白耳鸡产蛋数的遗传效应

采用PCR-SSCP方法检测白耳鸡催乳素(PRL)基因调控区和神经肽Y(NPY)基因转录起始区的多态性,并分析PRL、NPY基因单基因型和聚合基因型与72周龄产蛋数的关联程度。结果表明,PRL基因调控区基因型AA和NPY基因转录起始区基因型CC与72周龄的产蛋数显著相关(P<0.05),AA型对产蛋数的加性效应值为3.65,显性效应值为-0.24;CC型的加性效应值为3.22,显性效应值为-0.76。两种有利单基因型的聚合个体AACC型72周龄的产蛋数与其他基因型聚合个体(除ABCD型外)比较,差异显著(P<0.05)。但基因效应分析表明,两基因间的互作效应并不显著(P>0.05)。

能量水平对文昌鸡开产前后NPY基因mRNA表达以及开产性状的影响

为研究不同能量水平日粮对文昌鸡开产性状和开产前后(15、20和25周龄)NPY基因在下丘脑和卵巢组织中表达的影响,根据文昌鸡各生长阶段能量需要量的95%、100%、105%分别设置为低(Ⅰ)、中(Ⅱ)、高(Ⅲ)3个能量组进行饲养,每组5个重复,每个重复40只,并准确记录开产日龄、开产体重和开产蛋重,同时运用RT-PCR方法分别分析各能量组鸡只在开产前后下丘脑和卵巢NPY基因mRNA的表达量。结果表明,高能促进文昌鸡开产日龄提前;15、20和25周龄,低能组NPYmRNA表达量均高于中能组和高能组;15、20和25周龄低、中、高能组卵巢中NPYmRNA表达量变化不大,无显著差异。结果提示,能量水平的改变能够调节文昌鸡下丘脑和卵巢NPY基因mRNA表达和性成熟时间。

非典型抗精神病药致体质量增加与神经肽Y基因关联性的研究

目的:探讨非典型抗精神病药致患者体质量增加与神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)基因多态性的关系。方法:选取2015年10月—2016年4月深圳市精神卫生中心收治的精神分裂症患者124例作为研究对象,分为观察组和对照组,每组各62例。观察组为服用抗精神病药1年内体质量较服药前增加≥7%的患者,对照组为服用抗精神病药1年内体质量增加<7%的患者,2组患者治疗时间相差≤2个月。采用聚合酶链反应及基因测序技术,测定2组患者NPY基因启动子-399 T/C(rs16147)多态性。结果:2组患者NPY基因型及等位基因频率的差异均无统计学意义(P>0.05)。但TT基因型的患者经抗精神病药治疗后体质量增加的程度明显小于携带TC/CC基因型的患者,差异有统计学意义(t=-2.328,P<0.05)。结论:NPY基因启动子-399 T/C(rs16147)多态性对抗精神病药治疗后患者体质量增加程度有影响。

东兰乌鸡神经肽Y基因对300日龄产蛋数的影响

采用PCR-RFLP技术检测135只东兰乌鸡中NPY基因的多态性,并分析其对300日龄产蛋数的影响。结果表明,在该东兰乌鸡群体中发现了NPY基因的3种基因型(AA、AB、BB),不同基因型对300日龄产蛋数影响显著(P<0.05),AA型个体的产蛋数显著高于BB型个体(P<0.05)。因此,该NPY基因多态位点可以作为影响东兰乌鸡产蛋数的分子标记。

MUC1及同种型MUC1/Y基因mRNA在膀胱癌中的表达及临床意义

目的:探讨肿瘤相关抗原MUC1及同种型MUC1/Y粘蛋白基因在膀胱癌中mRNA的表达及其临床意义。方法:22例膀胱癌的组织样本(实验组)和10例正常膀胱组织样本(对照组)中提取总RNA,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测两组样本中MUC1及同种型MUC1/Y粘蛋白基因mRNA表达水平。结果:膀胱癌组织的MUC1mRNA水平较正常膀胱组织显著增高(P<0.01);Ⅲ-Ⅳ期膀胱癌组织的MUC1/YmRNA水平较Ⅰ-Ⅱ期膀胱癌组织显著增高(P<0.01)。结论:MUC1及同种型MUC1/Y粘蛋白基因mRNA表达水平与膀胱癌有关,对膀胱癌的诊断和治疗有临床意义。

上海地区汉族人群神经肽Y基因T1128C多态性的检测

目的了解上海地区汉族人群中神经肽Y(NPY)基因信号肽部位T1128C(Leu7Pro)单核苷酸多态性(SNP)的分布频率。方法利用聚合酶链反应(PCR)-连接酶检测反应(LDR)技术检测了867例上海地区汉族人群的NPY基因多态性。参照待测多态性位点所在DNA序列设计并合成1对引物及3条探针,先通过PCR获得含有待检测突变位点的基因片段,再进行PCR产物的LDR,根据测序电泳结果所显示的含荧光标记的LDR产物的片段长度来判断基因型别。结果 867例研究对象均显示NPY基因型为T1128T(Leu7Leu),未出现T1128C(Leu7Pro)或C1128C(Pro7Pro)。结论 NPY基因多态性存在明显的种族和地理差异,上海地区汉族人中不存在NPY T1128C(Leu7Pro)基因多态性,NPY基因T1128C多态性与上海地区汉族人群冠心病的发生、发展无相关关系。

磁转染MUC1/Y基因入树突状细胞抗膀胱肿瘤的免疫效应研究

目的:研究体外磁转染人MUC1/Y基因至人树突状细胞(DC)的可行性,以及在体外诱导特异性抗MUC1/Y膀胱癌的免疫效应。方法:以葡聚糖磁性纳米颗粒(DMN)作为载体,在多聚赖氨酸(PLL)的辅助下,通过静电作用结合MUC1/Y基因的真核表达载体pEGFP-C1-MUC1/Y,在铜-硼-锡磁块的固定磁场作用下转染至人DC中,荧光显微镜下以及流式细胞仪观察其转染效率;再将这种转基因DC与自体T细胞共培养,观察其致敏的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对MUC1/Y特异性抗膀胱癌(膀胱肿瘤BIU87细胞系)的杀伤活性,即分别用LDH释放法检测CTL杀伤活性和透射电镜观察CTL诱导靶细胞凋亡情况;ELISA法测定基因修饰后的DC刺激自体T细胞分泌IFN-γ的能力。结果:pEGFP-C1/-MUC1/Y转染效率为15%左右,荧光显微镜下可观察到明显绿色荧光蛋白的表达;与自体T细胞混合培养后能诱导出显著的MUC1/Y特异性的CTL,对BIU87细胞的杀伤实验表明T-DC-MUC1的杀伤活性约为52%,显著高于对照组T-DC诱导的CTL;在透射电镜下也可以清楚的观察到部分BIU87膀胱肿瘤细胞出现了细胞核核仁消失,染色质浓集于核膜周围等早期凋亡表现;基因修饰后的DC能刺激自体T细胞分泌高水平的IFN-γ,与未转染的DC相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:葡聚糖磁性纳米颗粒(DMN)在固定磁场的作用下成功将MUC1/Y基因转入DC,并可有效诱导出特异性的抗MUC1/Y膀胱癌的免疫效应。

山羊神经肽Y基因外显子克隆及序列分析

采用PCR-SSCP技术检测神经肽Y（neuropeptide Y，NPY）基因全部3个外显子在高繁殖力山羊品种（济宁青山羊）、中等繁殖力山羊品种（波尔山羊）和低繁殖力山羊品种（内蒙古绒山羊和安哥拉山羊）中的单核苷酸多态性，分析该基因对济宁青山羊高繁殖力的影响；并对济宁青山羊NPY基因3个外显子进行克隆测序，推导出编码的氨基酸序列，同时将济宁青山羊核苷酸和氨基酸序列与绵羊、牛、人、大鼠、小鼠和鸡6个物种的序列进行比较。结果表明，在4个山羊品种中未检测到NPY，基因3个外显子的多态性；这7个物种的核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为71．6％-99．7％和81．4％～100％；与牛、人等6物种相比，济宁青山羊NPY，基因氨基酸序列38位存在特有突变（E38D）。可见，物种间NPY基因保守性强，NPY，基因可能不是影响山羊高繁殖力的主效基因。

用母体外周血中胎儿游离DNA检测胎儿SRY基因的研究

目的探索从孕妇外周血浆中检测胎儿躲y基因的高灵敏性及高准确性方法。方法应用PcR、实时荧光定量PcR、PEP—PcR技术，检测33例妊娠8～14周的正常孕妇血浆中游离胎儿DNA的脓y基因。组织标本躲y基因检测结果作为性别判定的标准。结果33例孕妇血浆标本检测职y基因，普通PcR检出的灵敏性为58．82％，特异性100％。PEP—PCR的灵敏性为88．24％，特异性100％。荧光定量PCR的灵敏性为88．24％，特异性100％。结论PEP—PCR技术和荧光定量PcR技术均可以提高胎儿游离DNA检测的灵敏度及准确性．可用于进一步染色体疾病的无创性产前筛查研究。

Usp9y基因在不同发育阶段小鼠睾丸组织和睾丸相关细胞系中的表达特征

目的明确Usp9y基因在不同发育阶段小鼠睾丸组织和睾丸相关细胞系中的表达与定位并探究Usp9y的功能。方法利用生物信息学分析结合RT-PCR方法检测小鼠睾丸相关细胞系和C57BL/6J小鼠各个组织(子宫,睾丸,心,肝,脾,肺,肾,大脑,小脑,眼球)中Usp9y基因表达的特异性;利用q PCR法检测不同日龄小鼠睾丸中Usp9y基因的表达差异性。结果生物信息学分析结果显示Usp9y基因在成年小鼠睾丸中特异性表达(P <0. 05)。RT-PCR结果证实Usp9y在小鼠睾丸组织中特异性表达(P <0. 05)。usp9y在小鼠睾丸间质细胞(TM3)中特异性表达,在小鼠精原细胞(GC-1)和小鼠睾丸支持细胞(15P-1)中未检测到表达。q PCR结果显示相比其他日龄小鼠,18日龄的小鼠睾丸Usp9y表达显著升高(P <0. 05)。结论通过RT-PCR的方法确定Usp9y基因在TM3细胞中特异性表达;小鼠Usp9y基因在小鼠出生后18 d表达明显增高,上述结果表明Usp9y基因在精子发生早期发挥着不可替代的作用。

神经肽Y基因在精神分裂症中的研究进展

神经肽Y基因在中枢神经系统中广泛存在,参与调节许多生理功能。分子遗传学的研究发现,神经肽Y基因与精神分裂症的发病机制有关。本文对神经肽Y基因与精神分裂症发病机制的假设做了简单综述,提出神经肽Y基因可以作为精神分裂症的候选基因;同时对近年有关神经肽Y基因多态性与精神分裂症的关联研究进行了综述。

某类遗传环境下的两性分支过程:有关伴Y基因的灭绝概率问题

本文在文献[2]的基础上研究了另一类遗传环境下的两性分支过程(其中配对单元类型多于一种且有一种类型的配对单元数仅由雌性数目决定)并得到了有关它们灭绝概率的一些结果。

不同妊娠状态下母体循环中胎儿游离DNA—SRY基因的定量检测

目的依据孕妇血浆中存在游离胎儿DNA的理论，从孕妇外周血浆中分离出胎儿DNA并加以鉴定，预防X连锁遗传病患儿的出生。方法从孕早期、中期及晚期共80名孕妇外周血浆中分离胎儿DNA，采用实时荧光定量PCR（real-time fluorescence quantitative polymerase chain—reaction，FQ—PCR）方法对不同妊娠状态下孕妇外周血中游离的胎儿DNA（fDNA）进行定量分析，初步探讨游离fDNA在不同妊娠状态下的浓度变化，为尽早应用于临床提供科学依据。结果早孕组28例血浆标本中有25例检测到SRY基因，其平均浓度为58．82copies／ml，实测浓度范围为33．7～126．2copies／ml；中孕组20例血浆标本中均检测到SRY基因，其平均浓度为152．08copies／ml，实测浓度范围为37．7～390．2copies／ml；晚孕组32例血浆标本中均检测到SRY基因，其平均浓度为212．34copies／ml，实测浓度范围为87．90～493．56copies／ml。组间两两比较，差异有统计学显著性意义（P〈0．01）。结论用实时荧光定量PCR的方法最早在孕62d的孕妇外周血浆中就可以检测到胎儿sRY基因，随孕周的增加，母血中胎儿DNA的量也在逐渐增加。实时荧光定量PCR技术在进行无创性产前诊断中有重要的价值。

具有Y基因的大麦品种抗条锈性附加基因的鉴定

国外已鉴定到大麦对条锈菌小种24的3个隐性基因,这些基因命名为 yrl(品种Abyssinizn14),yr2(品种 Abed Binder)和 yr3(品种Ⅰ.5);Johnson(1968)又报道品种 Cambrinus 中具有对小种23的一个显性基因,并命名为 Yr4。另一方面,印度的 Bakshi 和 Luthra 发现了 EB410、EB438和 EB145中抗5个小种的8个抗性位点,并命名为 Ps1—Ps8.但是关于 P^s 基因与 Y(?)基因的关系仍未明确.本文报道了3个可知具 Yr 基因的大麦品种,即 Abyssinian14.Ⅰ·5和 Cambrin-

柴达木牛和蒙古牛Y染色体基因组遗传多样性与父系起源研究

旨在从基因组水平探究柴达木牛和蒙古牛的父系遗传多样性和起源进化关系。本研究采用全基因组重测序技术对柴达木牛品种5个不同地理群体共计22个个体和蒙古牛23个个体的Y染色体单拷贝基因区进行SNP扫描,使用生物信息学方法分析其父系遗传多样性和系统发育关系。结果表明,22头柴达木牛共定义了4种单倍型,其单倍型多样度为0.610±0.093,核苷酸多样度为0.074±0.015,而23头蒙古牛共确定了10种单倍型,其单倍型多样度为0.925±0.025,核苷酸多样度为0.137±0.013,表明柴达木牛相比蒙古牛其父系遗传多样性较低。构建的系统发育树和单倍型网络图表明,22头柴达木牛明显地分为Y1(18.2%)和Y2(81.8%)两个单倍型组,其中Y2为优势单倍型组,Y2单倍型组又包括Y2a(18.2%)与Y2b(63.6%)两种亚单倍型组,其中Y2b亚单倍型组占优势,表明柴达木牛有Y1与Y2两个父系起源;蒙古牛也拥有Y1(17.4%)和Y2(82.6%)两个父系起源,但Y2单倍型组以Y2a为主要亚单倍型组(47.8%)。上述结果表明,柴达木牛和蒙古牛具有相似的父系遗传组成,但考虑到柴达木牛的父系遗传多样性较低,故建议加大该品种内群体间种公牛的基因交流,提高其遗传多样性水平。本研究为明确柴达木牛和蒙古牛父系遗传差异,开展其种质资源的保护和开发利用提供了理论依据。

牦牛Y染色体基因组单纯型微卫星丰度分析

微卫星或简单序列重复(SSRs)广泛分布于真核生物基因组中,其在物种基因组结构组成和功能中发挥着重要作用。本研究以2021年报道的牦牛(Bos grunniens)Y染色体基因组序列为研究对象,利用生物信息学方法系统分析了其单纯型微卫星的丰度状况。结果表明,在牦牛Y染色体基因组(26.36 Mb)中共发现12699个1~6个碱基重复的单纯型SSRs,总长为0.33 Mb,平均长度为25.68 bp,相对频率和相对密度分别为481.77 loci/Mb和12371.73 bp/Mb,提示牦牛Y染色体基因组包含约1.25%的单纯型SSRs。6类单纯型SSRs在牦牛Y染色体上分布不均匀,其中二碱基重复的SSRs最为丰富,总数为5835个(45.95%),平均长度为27.82 bp,而单碱基和三、四、五、六碱基重复的SSRs所占比例分别为29.79%、9.66%、8.81%、5.57%和0.22%。不同类别的单纯型SSRs其不同重复单元的重复次数存在差异,其中以A、AC、AAC等为重复单元的单纯型SSRs在牦牛Y染色体上所含比例相对较高;各重复单元重复次数的范围分别集中在12~20次(单碱基)、7~21次(二碱基)、5~10次(三碱基)、4~8次(四碱基)、4~5次(五碱基)和4~8次(六碱基)。本研究结果为深入了解牦牛Y染色体基因组重复DNA序列组成和特征特别是单纯型SSRs的丰度状况提供了参考,为后续探明牦牛Y染色体基因组结构组成和发掘牦牛Y染色体特异性SSRs标记、构建Y染色体遗传图谱等奠定了基础。

MUC1/Y基因真核表达载体构建及MUC1、MUC1/Y体外修饰DC诱导特异性抗肿瘤免疫应答

目的 构建MUC1 Y全长cDNA真核表达载体 ,并以MUC1及MUC1 Y真核表达载体修饰树突状细胞 (DC)诱导特异性抗肿瘤免疫。方法 构建MUC1 YDNA真核表达载体 ,选取 10例HLA A2乳腺癌患者 ,体外IL 4、GM CSF联合诱导DC ,并以pCDNA3.1 MUC1和pCDNA3.1 MUC1 Y转染DC ,同时以空载体为对照 ,以pIRES2 EGFP MUC1 Y观察转染效率 ,转染后DC与自体T细胞混合培养 ,诱导CTL。以MCF 7为特异性靶细胞 ,Raji为非特异性靶细胞 ,通过乳酸脱氢酶释放实验检测杀伤活性 ,以annexinⅤ FITC检测特异性CTL诱导靶细胞凋亡的情况。以ELISA法测定基因修饰后DC刺激自体T细胞分泌IFN γ的能力。结果 酶切鉴定及测序结果表明成功构建了MUC1 Y真核表达载体pIRES2 EGFP MUC1 Y和pCDNA3.1 MUC1 Y。pIRES2 EGFP MUC1 Y转染效率基本为 10 %左右 ,DC中MUC1表达率为 8%。杀伤实验表明T DC pCDNA3.1 MUC的杀伤活性为 6 4 % ,T DC pCDNA3.1 MUC1 Y为 4 6 %。这两组间差异有显著性 ,同时与对照组比较差异均有显著性。annexinⅤ FITC标记实验显示 ,T DC pCDNA3.1 MUC1对靶细胞的杀伤和诱导凋亡的能力显著高于T DC pCDNA3.1 MUC1 Y及对照组。基因修饰DC刺激自体T细胞分泌IFN γ的能力显著升高。结论 构建的真核表达载体pIRES2 EGFP MUC1

usp9y与Nna1基因的相互作用及对精子发生的影响

目的探究usp9y与引起该小鼠不育表型的突变基因Nna1之间的关系,以及该基因在精子发生中的影响。方法用分子克隆法构建pEGFP-usp9y-(nt1558-1955)真核表达载体,转染到HEK293T细胞中,检测其表达;将pEGFP-usp9y-(nt1558-1955)和pCMV-Myc-Nna1共转染至HEK293T细胞中,通过免疫共沉淀法分析usp9y和Nna1蛋白之间的相互作用;运用单基因表达谱法研究浦肯野细胞变性(pcd)小鼠中usp9y基因、与精子发生相关基因和信号通路关键因子的表达。结果 usp9y与Nna1可形成免疫沉淀复合物;pcd3J突变型小鼠睾丸组织中Nna1表达下调,usp9y表达量明显增高。结论二者之间存在一定的相互作用,可能共同参与小鼠的精子发生,但作用方式不明确;NF-κB细胞信号通路等可能参与了pcd小鼠的精子发生。