Y-盒结合蛋白1对白血病K562细胞多药耐药基因-1表达的调控

目的:观察多柔比星诱导K562细胞多药耐药基因-1(mdr1)基因表达过程中Y-盒结合蛋白1(YB-1)表达和核易位的变化情况,初步探讨YB-1蛋白对mdr1基因的转录调控。方法:多柔比星间歇性长期作用于K562细胞,剂量逐渐增加。RT-PCR检测mdr1,YB-1基因表达,流式细胞仪检测mdr1基因编码的P糖蛋白(P-gp)表达,蛋白质印迹检测YB-1蛋白核易位。通过RNA干扰技术使K562细胞中YB-1基因表达沉默,多柔比星处理YB-1基因沉默细胞,RT-PCR、流式细胞仪分别检测mdr1 mRNA和P-gp的表达。结果:经多柔比星作用后K562细胞mdr1基因转录上调,P-gp表达增加,同时YB-1基因转录也增强,且出现明显的核易位。YB-1基因沉默后,mdr1基因诱导性表达减少。结论:多柔比星诱导K562细胞mdr1基因表达的过程中,YB-1对于mdr1基因的转录活化起一定的作用。

糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链蛋白、Y-盒结合蛋白1和P-糖蛋白在上皮性卵巢癌组织中的表达及其与化疗耐药的关系

目的探讨上皮性卵巢癌中糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链蛋白（GILZ）、Y-盒结合蛋白1（YB-1）和P-糖蛋白（P—gP）的蛋白表达，分析其与卵巢癌化疗耐药的关系。方法2005年3月至2012年2月在大连医科大学第-、第二附属医院采用免疫组织化学sP法检测85例上皮性卵巢癌，30例卵巢良性肿瘤和12例正常卵巢组织中GILZ、YB-1和PGP的蛋白表达情况，并结合临床病理资料进行综合分析。结果GILZ、YB-1和P—gP在上皮性卵巢癌中表达阳性率分别为51．8％、48．2％和47．1％，在卵巢良性肿瘤和正常卵巢组织中均未见表达，差异有统计学意义（P〈0．01）。YB-1和P—gP在Ⅲ-Ⅳ期上皮性卵巢癌中的表达高于Ⅰ～Ⅱ上皮性卵巢癌中的表达（P〈0．05）。GILZ、YB-1和P—gP三者相关，GILz与YB-1，r=0．344；P—gP与GILZ，r=0．437；P—gp与YB-1，r=0．570（P均〈0．01）。44例GILZ蛋白阳性表达者中18例为化疗耐药，41例GILZ蛋白阴性表达者中6例为化疗耐药，差异有统计学意义（P〈0．05）。41例YB-1蛋白阳性表达者中17例为化疗耐药，44例YB—1蛋白阴性表达者中7例为化疗耐药，差异有统计学意义（P〈0．05）。40例P—gP蛋白阳性表达者中17例为化疗耐药，45例P—gP蛋白阴性表达者中7例为化疗耐药，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论GILZ、YB-1和P—gP可能参与了卵巢癌的发生、发展过程。3种蛋白在卵巢癌化疗耐药中发挥-定作用，独立或联合检测可能预测化疗的敏感性。

shRNA介导的Y-盒结合蛋白-1表达沉默抑制神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的体内成瘤能力

目的:观察shRNA介导的Y-盒结合蛋白-1(YB-1)表达沉默对神经母细胞瘤细胞体内成瘤能力的影响。方法:构建针对YB-1的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,利用LipofectamineTM2000脂质体转染人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞。Western blot技术检测干扰后YB-1蛋白表达水平变化。平板克隆形成实验检测YB-1蛋白受抑是否影响细胞凋亡。通过测量肿瘤体积和重量评估YB-1蛋白受抑对裸鼠体内成瘤的影响。HE染色和TUNEL实验评估干扰对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响。结果:Western blot技术检测无效转染组(NC组)与对照组(SH-SY5Y组)相比,YB-1表达量无显著差异,而转染组(YB-1 shRNA组)与SH-SY5Y组相比,YB-1表达水平明显下降。克隆形成实验显示NC组细胞克隆形成能力与SH-SY5Y组细胞相比未发生显著变化(P>0.05),而与SH-SY5Y组相比,YB-1 shRNA组克隆形成能力显著下降(P<0.01)。裸鼠成瘤统计分析结果显示,SH-SY5Y组的平均肿瘤体积和平均肿瘤重量明显高于YB-1 shRNA组(P<0.01),NC组肿瘤体积与重量与SH-SY5Y组相比无明显差异(P>0.05)。HE染色和TUNEL染色发现SH-SY5Y组和NC组细胞与YB-1 shRNA组相比分裂活跃,凋亡细胞较少。结论:shRNA介导的YB-1表达沉默抑制细胞生长,诱导凋亡,显著抑制神经母细胞瘤的体内成瘤能力。

YBX1在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的检测Y-盒结合蛋白-1(YBX1)基因(YBX1)在肝细胞肝癌(HCC)和非肿瘤组织中的表达,探讨YBX1在HCC诊断和预后判断中的价值。方法通过癌症基因组图谱(TCGA)数据集进行YBX1表达与临床病理特征的关联,使用KM曲线、Cox回归分析评估YBX1表达在HCC患者中预后,通过基因集富集分析(GSEA)评估YBX1参与HCC发病机制所涉及的生物途径,使用ssGSEA对YBX1基因表达和免疫浸润进行关联分析,进而分析YBX1与免疫浸润的联系。结果共纳入TCGA数据库中424例样本HCC数据,其中癌旁组织样本50例,肿瘤样本374例。HCC中YBX1表达明显高于正常组织(P<0.001)。HCC中YBX1表达的升高与临床分期(P=0.029)、病理等级(P=0.014)显著相关,而在N分期(P=0.089)中则略微显著。根据YBX1表达的中值(6.867),将所有患者分为高表达组和低表达组。与低表达组HCC患者相比,高表达组HCC患者与更差的总生存期(OS)、更差的无进展生存期和更差的疾病特异性生存期相关。单因素及多变量Cox回归进一步分析显示,YBX1表达(HR=2.369,P<0.001)是HCC OS的独立预后因素。此外,YBX1高表达显著富集到G蛋白偶联受体(GPCR)配体结合通路和白细胞介素的反应蛋白信号通路,而且YBX1高表达与Th2细胞浸润水平(R=0.36,P<0.001)、Th7细胞浸润水平(R=-0.29,P<0.001)显著相关。结论YBX1可能是存活率低的HCC的潜在预后指标。GPCR配体结合通路和白细胞介素的反应蛋白信号通路可能是YBX1调节的关键通路。此外,YBX1在HCC中的表达与免疫浸润水平有关。

卵巢癌组织中YB1和CD44蛋白表达及与卵巢癌患者临床特征的关系

目的探讨卵巢癌组织中Y-盒结合蛋白1(YB1)和黏附分子CD44的表达情况及与卵巢癌患者临床特征的关系。方法收集80例上皮性卵巢癌患者的上皮性卵巢癌组织标本和80例卵巢良性上皮性肿瘤患者的卵巢良性上皮性肿瘤组织标本,采用免疫组织化学染色法检测两种组织标本中YB1和CD44蛋白的表达情况,分析上皮性卵巢癌组织中YB1和CD44蛋白表达的相关性,以及YB1和CD44蛋白表达与卵巢癌患者临床特征的关系。结果上皮性卵巢癌组织中YB1和CD44蛋白的阳性表达率分别为57.50%和65.00%,均明显高于卵巢良性上皮性肿瘤组织的6.25%和10.00%,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。相关性分析结果显示,上皮性卵巢癌组织中YB1和CD44蛋白的表达呈明显正相关(r=0.588,P﹤0.01)。国际妇产科联盟(FIGO)分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移的上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌组织中YB1蛋白的阳性表达率均高于FIGO分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移的上皮性卵巢癌患者,FIGO分期为Ⅲ～Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移的上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌组织中CD44蛋白的阳性表达率均高于FIGO分期为Ⅰ～Ⅱ期、中/高分化、无淋巴结转移的上皮性卵巢癌患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论上皮性卵巢癌组织中YB1和CD44蛋白表达水平明显升高,二者的表达呈正相关,且与上皮性卵巢癌患者的临床分期和淋巴结转移情况密切相关。

Y-盒结合蛋白-1基因对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、凋亡及侵袭能力的影响

目的观察Y-盒结合蛋白-1(Y-box binding protein-1,YB-1)基因对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法通过脂质体介导的方法将YB-1 shRNA重组质粒pGSi2和阴性对照质粒HK转染MDA-MB-231细胞,采用RT-PCR和Western blot法检测细胞中YB-1、基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-9在mRNA和蛋白水平的表达;MTT法及流式细胞术检测细胞增殖活力、细胞周期及凋亡的变化;Transwell小室法检测细胞侵袭能力的变化。结果 pGSi2组MDA-MB-231细胞较HK组细胞YB-1 mRNA及蛋白的表达水平均明显降低(P<0.01);沉默YB-1表达可以抑制MDA-MB-231细胞增殖,诱导其凋亡,且细胞侵袭能力及MMP-2和MMP-9的表达也较HK组明显下降(P均<0.05)。结论YB-1 shRNA可以沉默MDA-MB-231细胞中YB-1的表达,抑制细胞增殖,诱导其凋亡,并抑制细胞侵袭能力及MMP-2和MMP-9的表达。

YB1和CD44在上皮性卵巢癌中的表达及其与铂类耐药的关系

目的:检测上皮性卵巢癌中Y-盒结合蛋白1(YB-1)和黏附分子CD44的表达,分析其与卵巢癌化疗耐药的关系。方法:采用免疫组化SP法分别检测YB-1及CD44蛋白在铂类耐药或敏感的上皮性卵巢癌及正常卵巢组织中的表达情况,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot法分别检测上皮性卵巢癌顺铂敏感与耐药细胞中YB1及CD44 mRNA与蛋白水平,分析两者表达的相关性。结果:YB-1和CD44在上皮性卵巢癌组织中阳性率分别为56.3%和60.9%,耐药组织中表达均明显高于敏感组织,且两者表达呈正相关(r=0.456);顺铂耐药上皮性卵巢癌细胞株中YB-1和CD44 mRNA及蛋白水平明显高于敏感株(P均<0.05)。结论:YB-1和CD44与上皮性卵巢癌铂类耐药相关,独立或联合检测可能预测化疗的敏感性。

YB-1基因沉默抑制前列腺癌细胞的增殖和迁移

目的探讨RNA干扰沉默Y-盒结合蛋白1(YB-1)对前列腺癌细胞株PC-3细胞增殖和侵袭力的影响。方法将YB-1siRNA(pGenesil-1-YB-1-1、pGenesil-1-YB-1-2质粒)用脂质体转染PC-3细胞(转染组),以逆转录-PCR(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Wesretn blotting)分别检测YB-1mRNA和蛋白的表达,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法和Transwell小孔实验检测PC-3细胞的增殖和侵袭力。结果与质粒对照组相比,转染组YB-1mRNA和蛋白的表达水平明显降低(P<0.05)。重组质粒pGenesil-1-YB-1-1和pGenesil-1-YB-1-2组mRNA的抑制率分别达36.23%和39.42%,YB-1蛋白的抑制率分别达41.56%和55.33%。与正常对照组相比,转染组细胞增殖明显抑制(P<0.05),转染处理的穿膜细胞数明显减少(P<0.05)。结论 RNA干扰沉默YB-1基因表达降低了前列腺癌细胞的增殖和迁移能力。

YB-1表达对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的:观察Y-盒结合蛋白-1(YB-1)对肿瘤细胞迁移和侵袭能力的影响。方法:通过脂质体介导的方法将YB-1 shRNA重组载体转染入人类乳腺癌MCF-7细胞,经G418筛选及克隆化培养后获得稳定转染株。运用RT-PCR和蛋白质印迹方法检测MCF-7细胞中YB-1 mRNA和YB-1蛋白的表达水平,运用划痕实验和Transwell小室法检测细胞运动、迁移和侵袭能力的变化,同时运用RT-PCR和蛋白质印迹方法检测细胞中MMP-2的表达水平,并用明胶酶谱法检测MMP-2蛋白的活性。结果:稳定转染YB-1 shRNA的细胞中YB-1的表达明显低于转染随机片段的细胞和未转染组细胞,且细胞的运动、迁移和侵袭能力以及MMP-2的表达及活性也较后两组细胞明显下降。转染随机片段的细胞和未转染组细胞间无明显差异。结论:YB-1 shRNA可以沉默乳腺癌MCF-7细胞中YB-1的表达,并降低细胞的迁移和侵袭能力以及MMP-2的表达及活性。

YBX1和FOXA1在胃癌中的表达及其临床病理学意义

目的探究YBX1和FOXA1在胃癌组织中的表达及其与预后的关系。方法选取131例胃癌患者癌组织及其相应癌旁组织。qRT-PCR和免疫组织化学法检测YBX1、FOXA1在胃癌及癌旁组织中的表达水平;Crammer's V系数表示胃癌组织中YBX1与FOXA1蛋白表达的相关性,Pearson法分析YBX1 mRNA与FOXA1 mRNA相关性;Kaplan-Meier法分析胃癌组织YBX1、FOXA1蛋白表达与患者5年总生存率的关系;单因素及多因素Cox回归分析影响胃癌患者预后的因素。结果与癌旁组织相比,癌组织中FOXA1水平降低,YBX1水平升高(P<0.05)。胃癌组织中YBX1 mRNA与FOXA1 mRNA水平负相关(r=-0.675,P<0.05)。YBX1与FOXA1蛋白表达负相关(Crammer's V=-0.497,P<0.001)。胃癌组织中YBX1、FOXA1蛋白表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05)。YBX1阴性表达组和FOXA1阳性表达组5年内存活率分别高于YBX1阳性表达组和FOXA1阴性表达组(均P<0.05)。TNM分期、YBX1是胃癌患者死亡的独立危险因素(P<0.05),FOXA1是胃癌患者死亡的保护因素(P<0.05)。结论胃癌组织中YBX1高表达、FOXA1低表达,二者与胃癌患者疾病进展及预后有密切联系。

YB-1在低氧微环境诱导的宫颈癌EMT中的作用及机制研究

目的:探讨Y-盒结合蛋白-1(Y-box binding protein-1,YB-1)在低氧诱导的宫颈癌上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)发生中的作用及可能机制,为研究宫颈癌浸润转移机制提供理论依据。方法应用二氯化钴(CoCl2)处理宫颈癌Hela细胞模拟细胞低氧微环境,MTT法检测细胞的增殖活力,筛选CoCl2最适作用浓度及时间;倒置显微镜观察低氧6 h后细胞形态特征;细胞免疫荧光法检测低氧6 h后细胞中YB-1、Vimentin和MMP-2的蛋白表达及其相互关系。结果模拟低氧微环境的CoCl2最适作用浓度为150μmol/L,最适作用时间为6 h(<0.05);低氧使Hela细胞逐渐获得了间质细胞的形态特征;低氧6 h后,Hela细胞中YB-1、Vimentin、MMP-2表达较常氧组显著增高(<0.05),且YB-1、Vimentin、MMP-2之间相互呈正相关(<0.05)。结论 YB-1可能通过YB-1-MMP-2-Vimentin途径,上调Vimentin表达从而在低氧诱导的宫颈癌EMT发生中起到关键作用。

咪唑立宾对急性Thy1肾炎大鼠系膜细胞YB-1的影响

目的:观察Y-盒结合蛋白-1(YB-1)在急性Thy1肾炎大鼠系膜细胞增殖中的变化,研究咪唑立宾(MZ)对系膜细胞YB-1的影响。方法:108只雄性SD大鼠随机分为3组:正常组(A组)、肾炎组(B组)及咪唑立宾治疗组(C组)。诱导肾脏疾病后第1、3、5、7天,取肾脏组织。PAS染色观察肾脏病理变化;系膜细胞计数评估系膜细胞增殖;逆转录PCR(RT-PCR)方法检测YB-1基因表达水平;免疫印迹法(Western blot)检测YB-1的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,肾炎组系膜细胞大量增殖,YB-1的mRNA及蛋白质水平高度表达(P<0.05)。与肾炎组比较,咪唑立宾组系膜细胞增殖程度减轻,YB-1的mRNA及蛋白质的表达显著下降(P<0.05)。结论:YB-1与肾小球系膜细胞增殖成正相关;咪唑立宾能够下调YB-1的基因和蛋白表达水平;咪唑立宾抑制急性Thy1肾炎大鼠系膜细胞增殖可能是通过下调YB-1的基因和蛋白质表达水平实现的。

RNA干扰YB-1表达对阿霉素诱导性耐药的K562细胞mdr1基因表达的影响

目的探讨Y-盒结合蛋白1（YB-1）对白血病细胞系K562细胞药物诱导性mdrl基因表达的调控作用。方法阿霉素间歇性长期作用于K562细胞，剂量逐渐增加，诱导细胞耐药。RT-PCR检测mdrl和YB-1基因表达，流式细胞术检测mdrl基因编码的P-糖蛋白（P-gP）表达，蛋白质印迹法检测YB-1蛋白核易位程度。通过RNA干扰技术使K562细胞中YB-1基因表达沉默，再用阿霉素处理YB-1基因沉默细胞，诱导细胞耐药，用RT-PCR、流式细胞术分别检测mdrlmRNA和P-gp的表达。结果经阿霉素作用后K562细胞mdrl基因转录上调，P—gP表达增加，同时YB-1基因转录也增强，且出现明显的核易位。YB-1基因沉默后，mdrl基因诱导性表达明显减少，阿霉素浓度为0．03、0．05μg／ml时 mdr1 mRNA表达水平分别较未行shRNA干扰组降低（53．7±0．1）％和（64．3±0．0）％，P-gP表达呈同样趋势。结论阿霉素诱导K562细胞耐药形成的过程中，YB-1对于mdr1基因的转录活化起一定的作用。

YBX1和KPNA2在肺鳞癌中的表达及其临床意义

目的:探讨Y-盒结合蛋白1(YBX1)和核转运蛋白α2(KPNA2)在肺鳞癌中的表达及其临床意义。方法:选取本院2015年1月至2017年5月收治的137例肺鳞癌患者进行研究,术中收集肺鳞癌组织及相应癌旁组织,采用免疫组化染色法检测肺鳞癌组织、癌旁组织中YBX1、KPNA2表达情况,采用乘积极限(K-M)法进行生存分析,Log-rank检验比较显著性;COX回归模型分析影响肺鳞癌患者预后生存状态的因素。结果:与癌旁组织相比,肺鳞癌组织中YBX1、KPNA2阳性表达率较高(P<0.05);肺鳞癌组织中YBX1、KPNA2表达与肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05);Spearman相关分析显示,肺鳞癌组织中YBX1与KPNA2表达呈正相关(r=0.508,P<0.05);随访期内肺鳞癌患者死亡率为37.23%,与YBX1、KPNA2阴性表达者相比,YBX1、KPNA2阳性表达者死亡率较高(P<0.05),总生存期较短(P<0.05);多因素COX分析结果显示,YBX1阳性表达、KPNA2阳性表达、肿瘤分期为Ⅲ期、伴淋巴结转移是影响肺鳞癌患者预后生存状况的独立危险因素(P<0.05)。结论:肺鳞癌组织中YBX1、KPNA2阳性表达与患者肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移有关,YBX1、KPNA2有望用于评估肺鳞癌患者病情演变及预后状况。