ROCK抑制剂Y-27632对TGF-β1/CTGF通路的影响

Y-27632为嘧啶衍生物,是一种近年来合成的特异性Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(Rho associated coiled-coil forming protein kinase,R O C K)抑制剂,能通过调控R O C K介导的多种生物效应从而抑制肝纤维化的形成.研究发现,转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)/结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)通路参与肝纤维化的形成,TGF-β1诱导其下游效应分子CTGF表达,促使细胞外基质生成增多,导致肝纤维化.Y-27632具有抑制TGF-β1和CTGF表达的作用,本文从ROCK抑制剂Y-27632对TGF-β1/CTGF通路的影响来阐述Y-27632的抗纤维化作用,借此更深入的了解Y-27632的作用靶点,为肝纤维化的靶向治疗提供理论依据.

ROCK选择性抑制剂Y-27632提高小鼠胚胎干细胞传代效率研究

以小鼠胚胎干细胞(ES细胞)为研究对象,探讨ROCK选择性抑制剂Y-27632在细胞传代过程中的作用,并对ES细胞相关生物学特性进行检测。结果表明:Y-27632能够引起ES细胞形态发生改变,通过Y-27632的添加能够使质地紧密的ES细胞集落变得松散、扁平。将Y-27632应用于ES细胞传代,能够显著提高传代效率。并且,在Y-27632长期存在的条件下,ES细胞依旧维持稳定的染色体数目,较强的碱性磷酸酶活性,在体内能够分化形成畸胎瘤,在体外能够分化形成心肌细胞。说明Y-27632的使用能够显著提高小鼠ES细胞的传代效率;紧密的细胞连接不是维持ES细胞多能性的必要条件。

Y-27632抑制胃癌SGC-7901细胞系侵袭与转移

目的探讨Y-27632对胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移的影响,及其作用机制是否是通过对SRF的调控来实现的。方法将细胞分为3组:1)对照组;2)Y-27632通路阻断剂组;3)siRNA-SRF-1107干扰组。各组分别转染、加药,孵育48 h。用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室和划痕实验检测细胞侵袭能力和迁移能力。Western blot法检测SRF、ROCK1、E-cadherin、β-catenin、F-actin、MRTF-A及Cyclin D1的表达。结果 Y-27632能显著抑制胃癌SGC-7901细胞的侵袭、迁移能力(P<0.05),而对其增殖没有影响。Y-27632能显著下调SGC-7901细胞的ROCK1、SRF、F-actin和MRTF-A的表达,上调E-cadherin的表达(P<0.05)。结论 Y-27632通过上调E-cadherin表达,同时阻断ROCK信号抑制SRF辅因子MRTF-A的表达,最终下调SRF转录水平,从而抑制胃癌SGC-7901细胞侵袭、转移和迁移能力。

损伤角膜修复重建中的ROCK抑制剂:促进角膜细胞增殖、迁移和黏附

背景:随着人们对Rho/ROCK通路的生物学功能的了解的不断加深,新的ROCK抑制剂不断被发现,且ROCK抑制剂在角膜细胞存活、增殖和迁移中表现出良好的促进效果,ROCK抑制剂的研究能为再生医学和临床细胞移植提供更多的良好供体材料或种子细胞。目的:总结并探讨ROCK抑制剂Y-39983和Y-27632在角膜病的治疗和应用的研究进展。方法:应用计算机检索Pub Med数据库和中国知网数据库内相关文章,检索时间为2008至2015年,检索词为"corneal endothelial cell,corneal epithelial cell,ROCK inhibitor,Y-39983,Y-27632,ROCK抑制剂,角膜",从中筛选出与主题相关的部分文献。结果与结论:初检得到264篇文章,按主题相关性对文献进一步筛选,最终纳入45篇文章进行讨论。应用到眼科的ROCK抑制剂主要有两种:Y-27632和Y-39983,两者的应用主要还是基础研究与临床试验阶段。Y-27632可促进角膜缘上皮干细胞增殖及提高冻存复苏后的活性;Y-39983作为一种新型的ROCK抑制剂,其比Y-27632更有效地抑制ROCK激酶的活性,从而能更有效地促进角膜内皮的愈合。目前ROCK抑制剂在角膜治疗的研究较多,但是没有建立一种稳定的获得种子细胞的方法,每一种治疗方法都各有优缺点,而克服这些缺点以及找到快速稳定获得种子细胞的方法是今后的发展方向。

RhoA/Rho激酶及其抑制剂对COPD大鼠气道重塑的影响

目的观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型肺组织RhoA,ROCKⅡ含量的变化,探讨Y-27632对COPD大鼠RhoA/Rho激酶(ROCK)信号通路的调控及其对气道重塑的影响。方法将60只清洁级Wister雄性大鼠按随机数字表法分成3组,即正常对照组、COPD模型组和Y-27632干预组,每组20只,采用烟熏及气管滴入脂多糖(LPS)法建立COPD大鼠模型,用ROCK特异性抑制剂Y-27632进行干预,测定大鼠的肺功能,光镜观察肺组织结构,用医学图像分析软件测定支气管管壁厚度(Wat/Pbm)和气道平滑肌厚度(Wam/Pbm),反映气道重塑的程度。免疫组化法测定肺组织ROCKⅡ蛋白的表达,RT-PCR法测定RhoA、ROCKⅡmRNA含量。结果①与对照组比较,模型组吸气阻力(Ri)和呼气阻力(Re)升高,0.3秒用力呼气容积占用力肺活量百分比(FEV0.3/FVC)降低(P<0.01);干预组肺功能改善,与模型组比较有差异(P<0.01)。②模型组大鼠RhoA,ROCKⅡmRNA表达增高,Y-27632能够下调RhoA、ROCKⅡ的表达。③模型组Wat/Pbm、Wam/Pbm分别为(92.68±4.32)、(38.43±3.53)μm2/μm,对照组分别为(33.15±4.02)、(14.33±1.23)μm2/μm,模型组支气管壁、平滑肌层厚度增加(P<0.01);干预组Wat/Pbm、Wam/Pbm分别为(61.12±2.92)、(25.57±2.69)μm2/μm,均低于模型组大鼠(P<0.01)。结论 Y-27632通过抑制RhoA/ROCK信号通路,能够下调RhoA,ROCKⅡ的表达,抑制COPD大鼠Wat/Pbm和Wam/Pbm。

Rho／Rho激酶在哮喘小鼠气道的表达及其对气道重塑的影响

目的研究Rho／Rho激酶（ROCK）信号通路在哮喘小鼠气道中的表达及其对气道重塑的作用。方法清洁级BALB／c雄性小鼠39只，随机分为对照组、哮喘组、Y-27632干预组、地塞米松干预组，每组10只（其中对照组9只）。建立哮喘小鼠模型，并应用ROCKⅡ特异性拮抗剂Y-27632进行干预，光镜观察肺组织结构，Image—proplus图像分析软件测量支气管壁厚度（Wat）和平滑肌厚度（Wam），免疫组化法测定肺组织ROCKⅡ蛋白含量，RT—PCR法测定RhoA、ROCKⅡ mRNA含量。结果（1）哮喘组小鼠RhoA、ROCKⅡ表达明显增高，应用ROCKⅡ特异性拮抗剂Y-27632能够下调RhoA、ROCKⅡ的表达。（2）Y-27632干预组小鼠Wat和Wam均明显低于哮喘组小鼠。结论哮喘小鼠肺组织RhoA及ROCKⅡ表达增多，ROCKll受体拮抗剂Y-27632能够下调RhoA、ROCKⅡ的表达，明显抑制哮喘小鼠Wat和Wam。

细胞条件性重编程技术的研究进展

细胞永生化培养技术一直是个难点,条件性重编程技术(conditional reprogramming,CR)可能解决这个问题。CR技术通过将铯源γ射线辐照过的Swiss-3T3-J2小鼠成纤维细胞和人正常细胞或肿瘤细胞共培养,向共培养体系中加入Rho相关蛋白激酶(Rho-associated kinase,ROCK)抑制剂Y-27632,使人正常细胞或肿瘤细胞获得部分干细胞特性和在体外无限制扩增的能力,并且撤除J2细胞和ROCK抑制剂之后,细胞能够重新定向分化为原细胞。CR技术在再生医学、药物敏感性测试、基因表达谱分析和异种移植研究等领域具有广阔的发展前景,但目前尚不清楚其具体机制。现从CR技术的研究现状、可能机制和实验方法进行综述,以期为CR技术的研究和应用提供更多的理论基础。