穿琥宁对大肠癌HCT-8/5-FU耐药细胞株逆转作用的研究

目的:探讨中药制剂穿琥宁对HCT-8/5-FU多药耐药细胞株的影响。方法:观察0.4,1.2和2.4mg·mL-1穿琥宁作用下的HCT-8/5-FU多药耐药细胞株生长曲线,MTT法检测上述浓度下的细胞抑制率。MTT法、流式细胞仪PI染色法检测穿琥宁与化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP)和阿霉素(ADM)联合作用下,对HCT-8-5-FU耐药细胞的毒性作用和凋亡率。流式细胞仪罗丹明染色法和PI染色法探讨穿琥宁的作用机制。结果:0.4mg·mL-1穿琥宁生长曲线与正常对照组无明显差别,1.2mg·mL-1穿琥宁对细胞生长有轻度抑制作用,2.4mg·mL-1浓度有一定抑制,但细胞仍可生长。MTT法检测0.4,1.2,2.4mg·mL-1穿琥宁作用下,HCT-8/5-FU耐药细胞株的抑制率分别为7.2%,13.2%,21%。1.2mg·mL-1穿琥宁与5-FU,DDP,AMD联合作用,与这3种化疗药物单独作用比较细胞凋亡率分别为54.2%/26.4%;42.6%/13.6%;30.8%/14.2%,差异显著(P<0.01)。罗丹明染色法提示穿琥宁的作用机制可能与影响P-170的活性有关。但穿琥宁本身并不诱导凋亡,对细胞周期也无影响。结论:低浓度穿琥宁对HCT-8/5-FU细胞无明显抑制作用;与5-FU,ADM,DDP联合作用,可增加上述化疗药物的毒性作用,使肿瘤细胞的凋亡率增高,其机制可能与抑制P-170功能有关。

小鼠 Lewis 肺癌细胞株L3-8的建立及生物学特征

为了得到高转移率的小鼠肺癌体外传代细胞株，将Ｌｅｗｉｓ肺癌实体瘤组织在体外进行１４个月的传代培养，获得了Ｌ３－８细胞株。对该细胞生物学特征的研究结果表明，第３９代和第６５代细胞的倍增时间分别为２３．５ｈ和２６．２ｈ；第８０代细胞的平皿和软琼脂集落形成率分别为３０．７％和２１．２％；在Ｃ５７ＢＬ小鼠体内的成瘤率为１００．０％，肺转移率为８３．３％，平均转移灶２．９个。此细胞株较原体内传代株具有更高的转移率，为肿瘤细胞生物学。

瞬时转染后WAF1基因对肠癌细胞株Hct/8的生物学效应

目的 :探讨外源基因 WAF1的转染、表达活性和生物调控作用。方法 :采用脂质体转染技术将外源基因 WAF1转入 Hct/ 8细胞 ;经免疫荧光染色和流式细胞仪分别监测外源基因的表达和对细胞分化增殖、细胞凋亡的调控作用。结果 :外源基因 p2 1 WAF1/CIP1- pc DNA3在 Hct/ 8细胞阳性表达为 89.6% ,显著高于空质粒对照和空白对照组 ( P<0 .0 1 ) ;转染 48h后细胞分裂减慢 ,2 4～48h凋亡指数开始增高 ,72 h达到高峰 ,以后逐渐下降。结论 :克隆的外源基因 WAF1具有表达活性及诱导 Hct/ 8细胞凋亡的作用 ,揭示

抗8-氮鸟嘌呤小鼠肺癌细胞株ALA_(9702)的建立

目的 为了通过细胞融合研制肺癌疫苗，需要建立有适合细胞融合的肺癌抗原细胞。方法 用８氮鸟嘌呤（８ａｚａｇｕａｎｉｎｅ，８ Ａ Ｇ）从小鼠肺癌细胞 Ｌ Ａ７９５ 诱导抗８ Ａ Ｇ 细胞株 Ａ Ｌ Ａ９７０２ ，并鉴定其生物学特性及成瘤性。结果 Ａ Ｌ Ａ９７０２ 细胞在１．３１×１０－ ４ｍ ｏｌ／ Ｌ ８ Ａ Ｇ 培养液中生长了１ 年，在 Ｈ Ａ Ｔ培养液中不能形成集落，并保持了来源细胞 Ｌ Ａ７９５ 的生长特性、染色体数目、成瘤性及肺转移性。 结论 Ａ Ｌ Ａ９７０２细胞保持了来源细胞的生物学性质及成瘤性质，是一株稳定的抗８ Ａ Ｇ的小鼠肺癌细胞株，将作为适合细胞融合的抗原细胞，为研制肺癌疫苗，建立对肺癌有效的特异性免疫治疗奠定良好的基础。

小鼠肝癌H_(22)克隆细胞株H2D8与其原瘤株武汉H_(22)的基本特性比较研究

用细胞克隆的方法获得武汉大学典型培养物保藏中心保存的小鼠肝癌H2 2 瘤株 (武汉H2 2 )的克隆细胞株H2D8。比较武汉H2 2 及H2D8对血清的依赖性、致瘤性、病理特征和对环磷酰胺 (CTX)的敏感性。结果发现H2D8细胞株对血清的依赖性 ,和对小鼠致瘤性及肿瘤病理学特性与武汉H2 2 细胞无明显差异 ;H2D8细胞对CTX治疗的敏感性更高。说明H2D8克隆株在体外培养、致瘤性和病理特征方面能保持原瘤株的细胞特性 ;

艾氏腹水癌克隆细胞株E2G8建立小鼠动物模型生物学特性研究

目的 比较不同品种 (系 )小鼠接种E2G8细胞株的某些生物学特性。方法 将E2G8细胞稀释成不同浓度 ,接种KM、DBA 2、6 15、C57BL 6及BALB c小鼠皮下或腹腔 ,观察小鼠出现可见肿块 腹水时间及小鼠生存时间 ;测量肿块直径 (cm)及瘤重 ;荷瘤小鼠腹腔注射环磷酰胺 (CTX) ,观察E2G8细胞肿瘤模型对CTX治疗的敏感性。结果 E2G8接种BALB c、6 15小鼠皮下毒性最大 ,DBA 2、C57BL 6小鼠次之 ,接种KM小鼠皮下毒性最小 ;接种DBA 2、C57BL 6、6 15小鼠腹腔毒性较大 ,致死性高 ,对BALB c和KM小鼠的致死性弱 ;E2G8瘤细胞在KM和 4种纯系小鼠皮下均能很好生长肿瘤 ,其中在KM小鼠皮下肿瘤生长最大 ,在BALB c小鼠皮下肿瘤最小 ;KM、C57BL 6、6 15、DBA 2、BALB c小鼠皮下接种瘤细胞第 12天瘤重分别为 (2 4 0± 1 30 ) ,(0 90± 0 4 8) ,(1 2 0± 0 38) ,(1 10± 0 2 9) ,(0 80± 0 30 )g ;E2G8细胞接种 5个不同品种 (系 )小鼠制备的肿瘤模型 ,用CTX治疗 ,抑瘤率由高到低依次为6 6 7% (6 15 ) ,5 5 0 % (BALB c) ,5 3 3% (C57BL 6 ) ,5 0 % (KM) ,36 4 (DBA 2 ) ,其中 6 15小鼠建立的模型对CTX的治疗最敏感。结论 E2G8细胞株接种 5个不同品种 (系 )小鼠 ,所测生物学特性不完全相同 ,但是从腹腔 皮下接种、CTX?

稳定表达IL-8基因宫颈癌SiHa细胞株的建立及鉴定

目的建立高效、稳定表达IL-8基因的人宫颈癌pcDNA3.1-IL-8-SiHa细胞株。方法利用pcDNA3.1(+)真核表达载体构建pcDNA3.1/IL-8表达载体,利用基因克隆技术将IL-8cDNA基因片段通过脂质体转染入人宫颈鳞癌SiHa细胞中,经G418筛选获得稳定表达的细胞克隆,建立了高表达IL-8的pcDNA3.1-IL-8-SiHa宫颈癌细胞株,转染阳性细胞连续传代培养,传8代后用RT-PCR,ELISA,免疫细胞化学法进一步鉴定细胞中IL-8的表达。结果成功建立了持续高表达IL-8的pcDNA3.1-IL-8-SiHa细胞株,并在细胞中检测到IL-8mRNA及蛋白的高表达。结论高效表达IL-8基因的SiHa细胞株的建立有助于研究IL-8基因在宫颈癌发生发展中的作用。

γ射线引起HLA-B8表达缺失黑色素瘤细胞株的克隆研究

用７００ｒａｄγ射线照射ＨＬＡ－Ｂ８＋黑色素瘤细胞，于照射后第３天用抗ＨＬＡ－Ｂ８ＩｇＭ型单抗及补体做免疫选择。存活细胞培养１ｗ后，进行第２次免疫选择。存活细胞继续培养１ｗ，然后用有限稀释法在９６孔平底细胞培养板内进行克隆。从５×１０６个受诱变的细胞中共获得６个细胞克隆，其中１个克隆经流式细胞仪表型分析显示ＨＬＡ－Ｂ８无表达，此细胞的ＲＮＡ经ＲＴ－ＰＣＲ电泳分析表明ＨＬＡ－Ｂ各亚型基因的总表达量减弱，提示克隆到ＨＬＡ－Ｂ８表达缺失的突变株。本研究方法的建立及此突变株的获得，为进一步制备广谱型黑色素瘤“瘤苗”以及研究ＨＬＡｃｌａｓｓⅠ各亚型分子在肿瘤免疫中的作用提供了有力工具。

小鼠胸腺上皮细胞株MTEC1自发分泌白细胞介素8样化学趋化因子

小鼠胸腺上皮细胞株ＭＴＥＣ１自发分泌白细胞介素８样化学趋化因子北京医科大学免疫学系苗燕玲，曹良弦，刘祝公，陈慰峰在研究胸腺微环境在Ｔ细胞发育过程的选择作用中，发现本室建立的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠胸腺髓质区上皮细胞株ＭＴＥＣ１在体外能自发分泌对嗜中性粒细胞（...

登革病毒感染原代人单核细胞、上皮细胞与内皮细胞株后IL-8分泌增加

登革出血热(DHF)为登革病毒(DV)感染后出现的严重临床症状,其特征为血浆渗出和血液循环衰竭。由于观察到临床表现较重的患者血浆中有IL-8水平升高,作者研究了DV体外感染对炎症性细胞因子分泌表达的影响。对照组加入不含登革病毒2型(DV2)的昆虫细胞C6/36培养上清液后,ELISA测定其基线细胞因子水平。

COX-2选择性抑制剂联合奥沙利铂对结肠癌HCT-8细胞增殖和凋亡的影响

目的观察环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂NS-398联合奥沙利铂(L-OHP)对结肠癌HCT-8细胞增殖和凋亡的影响,比较NS-398联合L-OHP与单独应用L-OHP对结肠癌HCT-8细胞的杀伤效应。方法 CCK-8法检测不同浓度的L-OHP(1.25、2.50、5.00、10.00及20.00μmol/L)单独作用及L-OHP联合NS-398(20.00及80.00μmol/L)作用HCT-8细胞24 h的细胞增殖抑制率。分别应用流式细胞术检测细胞早期凋亡率;Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态学改变;分光光度法检测Caspase-3的活性。结果细胞增殖抑制实验表明L-OHP、NS-398对HCT-8细胞有剂量依赖性抑制增殖作用(P<0.05)。NS-398联合L-OHP用药组细胞增殖抑制率明显高于同浓度L-OHP单用组,且随着添加的NS-398剂量的增加而增加,联合用药组对HCT-8细胞的诱导凋亡效应明显高于L-OHP单药组,二者具有协同效应。两药均能提高Caspase-3的活性,联合用药组中Caspase-3的活性显著高于L-OHP组和NS-398组(P<0.01)。结论 NS-398和L-OHP均能抑制HCT-8细胞的增殖及诱导凋亡,NS-398能够显著增强L-OHP的癌细胞增殖抑制及诱导凋亡作用。

Caspase-3和Caspase-8在氟化钠致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡中的作用

目的探讨半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase)家族中的Caspase-3和Caspase-8对氟化钠(NaF)致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法先用不同浓度NaF(20、40、80μg/ml)对SH-SY5Y细胞进行染毒,24h后检测细胞存活率、凋亡率、Caspase-3活性以及Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平;再选择适宜的40μg/mlNaF染毒剂量组,观察在Fas受体激动剂CH11或拮抗剂ZB4作用下其细胞凋亡率、Caspase-3活性及Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平的改变。结果与对照组比较,40、80μg/ml染毒组细胞存活率降低,差异有统计学意义(P<0.01);细胞凋亡率随染毒剂量的升高呈上升趋势,且40、80μg/ml染毒组细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);40、80μg/ml染毒组Caspase-3活性及Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);激动剂CH11与NaF共培养对细胞凋亡显示出协同效应,拮抗剂ZB4可部分阻断NaF致SH-SY5Y细胞的凋亡。结论NaF可通过上调死亡受体Fas途径的关键酶Caspase-3和Caspase-8的表达,促进SH-SY5Y细胞凋亡。

重楼总皂苷对HaCaT细胞增殖和分泌IL-8的影响

目的研究重楼总皂苷对人永生化角质形成细胞株(HaCaT细胞)增殖和分泌白介素8(IL-8)的影响。方法采用MTT法进行细胞增殖实验,采用ELISA法测定重楼总皂苷对HaCaT细胞分泌IL-8的情况。结果在所选浓度范围内(60μg/mL,90μg/mL,120μg/mL和150μg/mL),重楼总皂苷对HaCaT细胞的增殖有抑制作用;其中120μg/mL和150μg/mL浓度组重楼总皂苷可抑制HaCaT细胞自分泌IL-8,90μg/mL,120μg/mL和150μg/mL浓度组重楼总皂苷能抑制TNF-α(浓度为100U/mL),刺激HaCaT细胞分泌IL-8。结论重楼总皂苷能抑制HaCaT细胞增殖和IL-8的分泌。

CCK法检测紫草素及衍生物对血液肿瘤细胞株的增殖抑制作用

目的以常用血液肿瘤细胞株为研究对象,体外加入紫草素(代号SK01)、β-羟基-异戊酰紫草素(代号SK17)及其16种人工半合成的紫草素衍生物,研究对血液肿瘤细胞株的增殖抑制作用,从中筛选出低毒高效的紫草素类化合物。方法 CCK-8法检测紫草素及其衍生物对血液肿瘤细胞株的增殖抑制作用即药物半数抑制浓度。结果紫草素-二甲醚衍生物(代号SK36)对多种血液肿瘤细胞株均有很强的细胞毒作用,但对正常细胞株的毒性作用则明显低于SK01和SK17,表现出较好选择性。实验中我们还发现大部分母核Ⅰ紫草素衍生物药物活性强于相对应的母核Ⅱ衍生物。结论 SK36能有效抑制多种血液肿瘤细胞株增殖,而对正常细胞株毒性较小,有较强的选择性,值得进一步开展基础及临床研究。

苯乙酸对大肠癌细胞HCT-8的诱导分化作用研究

目的探讨苯乙酸对大肠癌细胞株HCT-8的诱导分化作用。方法应用[3H]-TdR掺入法与细胞计数法、流式细胞技术、电子显微镜检测PA对大肠癌细胞HCT-8增殖的抑制作用、细胞周期各时相及其超微结构的变化。结果HCT-8细胞增殖抑制率与PA剂量呈显著正相关关系;应用PA后,HCT-8细胞增殖抑制于G0/G1期,大量细胞堆积于S期末期,不能完成全部DNA合成,细胞核变规整,细胞质增多。结论PA对大肠癌HCT-8细胞存在时间和剂量依赖性增殖抑制作用,可提高大肠癌细胞HCT-8的分化程度,具有广阔的临床应用前景。

噻托溴铵对乙酰胆碱诱导的支气管上皮细胞NF-κB活化和IL-8表达的影响

目的观察噻托溴铵对乙酰胆碱诱导的支气管上皮细胞(16HBE)分泌IL-8及核转录因子NF-NF-κB活化的影响。方法使用不同浓度Ach、噻托溴铵和乙酰胆碱+噻托溴铵等分别处理生长良好的支气管上皮细胞(16HBE),用ELISA法检测细胞及其上清液中IL-8的表达变化,用Western Blot法检测细胞核内NF-κB蛋白含量变化。结果与对照组相比,乙酰胆碱能刺激16HBE分泌IL-8且呈剂量依赖,并在10 uM浓度时达到刺激高峰(P<0.001)。这种刺激作用与乙酰胆碱诱导16HBE的NF-κB活化有关(P<0.05)。噻托溴铵预处理可抑制乙酰胆碱诱导的NF-κB活性(P<0.05)及IL-8分泌(P<0.05)。结论噻托溴铵通过阻断NF-κB的活化,下调乙酰胆碱诱导16HBE细胞分泌IL-8水平,可能是其治疗COPD的抗炎作用机制之一。

氨氯地平抑制小鼠黑色素瘤高转移细胞株B16体内转移的作用及相关机制研究

目的:研究不同剂量氨氯地平抑制小鼠黑色素瘤高转移细胞株B16转移的作用,并探讨其作用机制。方法:选取64只C57BL/6J小鼠,将黑色素瘤髙转移细胞株B16接种在小鼠腹股沟皮下(2×106个/只)。将接种后的小鼠以随机数字表法分为对照组和氨氯地平高、中、低剂量治疗组,对照组小鼠仅给予0.9%氯化钠注射液;治疗组小鼠给予不同剂量的氨氯地平治疗,分别为1 mg/kg(低剂量组)、3 mg/kg(中剂量组)和10 mg/kg(高剂量组)。观察各组小鼠肿瘤生长情况及身体情况;观察各组小鼠肿瘤肺转移情况,计算肺转移的结节及肿瘤抑瘤率;采用免疫组织化学法检测各组小鼠肿瘤组织中白细胞介素8(IL-8)蛋白表达水平;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组小鼠肿瘤组织中IL-8的信使核糖核酸(mRNA)表达水平。结果:氨氯地平对小鼠黑色素瘤高转移细胞株B16的自发性肺转移有显著的抑制作用;治疗组小鼠肿瘤组织中IL-8蛋白表达均明显减弱,且随氨氯地平剂量的增加而减弱;治疗组小鼠肿瘤组织中IL-8的mRNA的表达明显低于对照组,且IL-8的mRNA的表达随氨氯地平剂量的增加而减弱。结论:氨氯地平对小鼠黑色素瘤高转移细胞株B16有一定的抑瘤和抑制肺转移作用,其作用可能与影响IL-8的表达有关。