神经肽Y-Y5受体反义基因治疗诱导大鼠脂肪细胞凋亡研究(英文)

目的:探讨神经肽Y-Y5受体反义基因治疗后正常SD大鼠减肥减重效应与外周白色脂肪细胞体积、数目变化的关系。方法:侧脑室插管,注射针对Y5受体编码起始区的反义、正义、错义寡聚脱氧核糖核酸及生理盐水,采用MPLAS-500多媒体彩色病理图文分析系统计算平均脂肪细胞面积,基因组DNA提取物凝胶电泳检测脂肪细胞凋亡,RT-PCR分析凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的改变。结果:①Y5受体反义基因治疗后大鼠进食量与体重显著降低,外周白色脂肪组织湿重与平均脂肪细胞面积明显减少;②脂肪组织基因组DNA提取物凝胶电泳出现凋亡特征性梯状条带;③凋亡相关基因Bcl-2表达下调、Bax表达上调。结论:平均脂肪细胞面积减小、脂肪细胞凋亡增加可能是Y5受体反义基因治疗减肥减重的重要原因。

神经肽Y Y5受体基因反义寡核苷酸脑室给药对伴糖尿病缺血再灌注大鼠血清瘦素与TNF-α的影响

目的 观察神经肽Y Y5(NPY Y5)受体基因反义寡核苷酸脑室给药对伴糖尿病缺血再灌注大鼠血清瘦素、胰岛素与TNF-α的影响。方法 链脲佐菌素空腹腹腔注射制备糖尿病大鼠模型,线栓法闭塞大脑中动脉制作脑缺血再灌注大鼠模型;治疗组经导管向脑室注入50μg(5 U/μl)NPY Y5 受体基因反义寡核苷酸,每天3次给药,连续应用3天;采用ELISA双抗体夹心法测定血清TNF-α与瘦素含量,放射免疫法测定胰岛素含量。结果 缺血再灌注损伤后,大鼠血清瘦素、胰岛素、TNF-α水平较对照组显著升高;NPY Y5受体基因反义脱氧核苷酸侧脑室注射干预后,其血清瘦素、胰岛素水平明显下降,TNF-α水平显著降低。结论 神经肽Y Y5受体基因反义寡核苷酸侧脑室给药可降低伴糖尿病缺血再灌注大鼠的血清瘦素、TNF-α与胰岛素水平,改善外周瘦素抵抗与胰岛素抵抗,促进脑梗死恢复。

β3肾上腺素能受体基因在肥胖大鼠神经肽Y Y5受体反义基因治疗中的作用(英文)

目的 :探讨 β3肾上腺素能受体基因在肥胖大鼠神经肽Y(NPY)Y5受体反义基因治疗中的作用。方法 :建立高营养饮食诱导的肥胖大鼠模型 ,侧脑室插管后注射NPYY5受体反义、错义寡核苷酸或生理盐水 ,测定肥胖大鼠的腹腔内脂肪组织湿重与血脂 ,并采用RT PCR技术检测腹膜后脂肪组织中 β3肾上腺素能受体基因的表达水平。结果 :①高营养饮食诱导下肥胖模型大鼠的腹腔脂肪组织湿重与血脂水平均明显高于正常大鼠 ;②经NPYY5受体反义寡核苷酸干预后 ,肥胖大鼠的腹腔脂肪组织湿重与血脂水平均明显降低 ,腹膜后脂肪组织中 β3肾上腺素能受体基因的表达水平则显著高于肥胖对照大鼠。结论 :侧脑室注射NPYY5受体反义寡核苷酸可显著降低肥胖大鼠的体脂、血脂 ,其机制可能与腹膜后脂肪组织

神经肽YY5受体基因反义寡核苷酸脑室给药对肥胖大鼠外周瘦素抵抗的影响

目的 探讨神经肽Y(NPY)Y5受体基因反义寡核苷酸脑室给药对饮食所致肥胖大鼠外周瘦素抵抗的影响。方法 (1)建立高营养饲料诱导的肥胖大鼠模型 ,侧脑室插管后注射NPYY5受体基因反义、错义寡核苷酸及生理盐水 ,观察大鼠腹膜后脂肪湿重的变化 ;(2 )采用ELISA双抗体夹心法测定血清瘦素含量、放免法测定血清胰岛素含量 ,RT PCR技术检测脂肪组织中ob基因的表达水平 ,评价该疗法对肥胖大鼠外周瘦素抵抗的影响。结果 经NPYY5受体基因反义寡核苷酸干预后 ,肥胖大鼠腹膜后脂肪湿重、血清胰岛素含量、血清瘦素含量、腹膜后脂肪组织ob基因mRNA表达水平均明显降低 ,除腹膜后脂肪组织湿重与肥胖错义组差异未达到统计学意义外 ,其余指标与肥胖盐水组、肥胖错义组相比差异均有显著性 ,而肥胖错义组与肥胖盐水组之间各观察指标差异均无显著性。结论 侧脑室注射NPYY5受体基因反义寡核苷酸可显著减少营养性肥胖大鼠的腹膜后脂肪 ,降低肥胖大鼠脂肪组织ob基因表达及血清瘦素、胰岛素含量 。

神经肽受体Y5亚型在大鼠胃的表达

应用RT-PCR、Western印迹和免疫组化技术研究神经肽受体亚型Y5在正常大鼠和胃轻瘫大鼠胃的表达,并进行组织学定位。发现Y5受体在大鼠胃存在着表达,主要表达定位在胃窦的黏膜层,可能与胃动力的调控有关。半定量分析显示胃轻瘫大鼠较正常大鼠表达水平下调。

NPY受体在急性束缚应激大鼠mPFC和下丘脑中的表达及其与炎性因子的相关性

目的观察神经肽Y(NPY)受体及炎性因子在急性束缚应激(RES)大鼠前额叶内侧皮层(mPFC)和下丘脑中的表达,探讨NPY受体Y5R在急性RES大鼠mPFC中可能的作用机制。方法将SD雄性大鼠随机分为对照组(CTL组)和模型组(RES组)。采用专业大鼠固定器束缚RES组大鼠2 h制备急性RES模型,CTL组不进行处理。造模结束后处死大鼠,实时定量PCR检测各组大鼠mPFC及下丘脑NPY受体及炎性因子mRNA表达情况;蛋白质印迹检测NPY受体Y5R及炎性因子IL-1β的蛋白表达情况;免疫荧光染色检测NPY受体Y5R及小胶质细胞标志物Iba-1的分布和定位。结果与CTL组相比,RES组大鼠mPFC NPY受体Y5R的mRNA和蛋白水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);炎性因子mRNA水平显著升高(P<0.05),蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05)。RES组大鼠下丘脑NPY受体Y5R及炎性因子mRNA和蛋白水平与CTL组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光染色检测结果显示NPY受体Y5R及小胶质细胞标志物Iba-1不存在共定位。结论NPY受体Y5R参与了急性束缚应激大鼠mPFC的病理过程,但其作用机制与小胶质细胞神经炎性反应无相关性。

与人体肥胖相关的神经肽Y受体Y5基因的克隆及序列分析

目的克隆与肥胖相关的人神经肽Y受体Y5（NPYSR）基因，并鉴定该克隆基因序列的正确性。方法从人的脂肪组织中提取总RNA并进行反转录，以此为模板用PCR扩增NPYSR基因的eDNA，然后与pET28a＋载体重组，筛选阳性克隆和DNA序列分析鉴定，测序后与GeneBank中NPY5R基因进行同源性比较和序列分析。结果PCR扩增出一个1300bp左右的DNA片段，与载体重组和DNA序列分析鉴定，DNA序列分析显示克隆的DNA片段是人NPY5R基因，且所克隆的基因共编码445个氨基酸，分子量为50KD，与GeneBank中NPYSR基因序列同源性达100％。结论克隆的人NPYSR基因与GeneBank中NPYSR序列完全一致，通过对其相关生物学信息的明确分析，为进一步应用分子生物学技术深入研究NPYSR与人体肥胖发生、发展及转化等相关作用机制及应用该基因进行其基因蛋白表达奠定了基础。

下丘脑腹内侧核Orexin-1及其受体对大鼠胃酸分泌的影响及其机制

目的:探讨下丘脑腹内侧核Orexin-1及其受体对大鼠胃酸分泌的影响及其机制。方法:大鼠麻醉后侧脑室及VMH置管,大鼠分组后分别VMH注射orexin-A、[Pro^(34)]-酪酪肽、[c PP1-7、NPY^(19-23)、Ala^(31)、Aib^(32)、Gln^(34)]胰多肽;腹腔注射SB-334867;皮下注射阿托品;侧脑室微量注射GR-231118、CGP-71683。给药结束后使用幽门结扎模型检测大鼠的胃酸分泌。结果:OXA能够促进胃酸分泌,且呈量效依赖关系。腹腔注射SB-334867能够抑制胃酸分泌,且呈量效依赖关系;SB-334867能够抑制orexin-A对胃酸分泌的促进作用;阿托品不但能够抑制胃酸分泌并且还能够完全阻断OXA的促胃酸分泌作用。侧脑室微量注射GR-231118或CGP-71683胃酸及胃液量减少,呈量效依赖关系,并且能够完全阻断OXA的促胃酸分泌作用。VMH内微量注射[cPP^(1-7),NPY^(19-23),Ala^(31),Aib^(32),Gln^(34)]胰多肽胃酸分泌增多,且呈量效依赖关系。结论:Orexin-A能够作用于下丘脑VMH促进胃酸分泌,orexin受体、Y1和Y5受体以及迷走神经系统均参与该过程。