Curcumin inhibits colorectal cancer development by blocking the YAP/TAZ signaling axis

Background:Curcumin is a plant polyphenol with antitumor properties and inhibits the development of colorectal cancer(CRC).However,as the molecular mechanism associated is still unclear,our study aimed to explore the underlying molecular mechanisms by which curcumin inhibits CRC.Methods:HT29 and SW480 cells were treated with curcumin or/and Doxycycline(DOX),and cell viability,colony forming ability,migration and invasion were confirmed by cell counting kit-8(CCK-8),colony forming,Transwell assays.And Yes-associated protein 1(YAP)and PDZ-binding motif(TAZ)signaling-related genes or proteins were analyzed using reverse transcription quantitative real-time PCR(RT-qPCR),western blot,and immunofluorescence assays.Then nude mice xenograft tumor model was constructed,YAP and Ki67 expressions were tested by immunohistochemistry(IHC)staining.Results:In our study,we proved that curcumin significantly inhibited the CRC cell viability,cell migration,and cell invasion abilities.In addition,curcumin inhibited YAP and Transcriptional coactivator with TAZ or the YAP/TAZ signaling axis in CRC cells.Further,in the nude mice model,curcumin treatment significantly decreased the size and weight of xenotransplant tumors.Conclusion:Therefore,curcumin significantly inhibited CRC development and invasion by regulating the YAP/TAZ signaling axis.

咪达唑仑调节YAP/TAZ信号通路对骨肉瘤细胞增殖凋亡和侵袭的影响

目的:探究咪达唑仑(MDZ)调节Yes相关蛋白(YAP)/PDZ结合基序转录共激活因子(TAZ)信号通路对骨肉瘤(OS)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:qRT-PCR、Western blot检测人正常成骨细胞系、OS细胞系YAP、TAZ mRNA和蛋白的表达,筛选最佳干预细胞系;以不同浓度的MDZ(0、12.5、25、50、100、200μmoL/L)干预OS细胞,MTT法检测细胞增殖活性,筛选最佳干预浓度;将OS细胞随机分成control组、MDZ组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-YAP/TAZ组,qRT-PCR法检测转染效率;EdU染色、流式细胞仪和Transwell小室分别检测细胞增殖、凋亡和侵袭;Western blot方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及YAP、TAZ蛋白表达;构建OS裸鼠模型,分为对照组和MDZ组,免疫组化法检测移植瘤组织Ki-67、YAP、TAZ蛋白表达,TUNEL染色检测凋亡。结果:OS细胞系中YAP、TAZ mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05);MDZ显著降低PCNA、N-cadherin、YAP、TAZ表达,抑制MG63、U20S细胞增殖和侵袭,升高Bax、E-cadherin表达,促进细胞凋亡。过表达YAP/TAZ可逆转MDZ对MG63、U20S细胞增殖和侵袭的抑制作用,对MG63、U20S细胞凋亡的促进作用(P<0.05);体内实验表明,MDZ显著降低移植瘤质量、体积及Ki-67、YAP、TAZ表达水平,促进移植瘤细胞凋亡(P<0.05)。结论:MDZ可能通过抑制YAP/TAZ信号通路,抑制OS细胞增殖和侵袭,促进凋亡。

槐耳多糖调节YAP/TAZ信号通路对骨肉瘤细胞生物学行为的影响

目的 探讨槐耳多糖(PST)通过调节Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)信号通路对骨肉瘤(OS)细胞生物学行为的影响。方法 将OS细胞系G292细胞分为G292组(未做任何处理的G292细胞)、L-PST组(1μg/mL PST)、M-PST组(2.5μg/mL PST)、H-PST组(5μg/mL PST)、GA-017组(10μmol/L YAP/TAZ信号通路激活剂GA-017处理G292细胞)、H-PST+GA-017组(5μg/mL PST+10μmol/L GA-017)。CCK-8法检测细胞活性;流式细胞术检测G292细胞凋亡;划痕实验以及Transwell法检测G292细胞迁移和侵袭;Western blot检测YAP/TAZ通路蛋白、EMT相关蛋白、凋亡蛋白水平。结果 PST抑制OS细胞系MG63、Saos-2、U20S、G292细胞活性,且G292细胞的A_(450)最小,因此,以G292细胞为研究对象。与G292组相比,M-PST组、H-PST组G292细胞A_(450)值、迁移率、侵袭数量以及vimentin、N-cadherin、Bcl-2、p-YAP/YAP、TAZ蛋白水平均显著下降(P<0.05),细胞凋亡率、E-cadherin、Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平显著升高(P<0.05),GA-017组呈现相反的趋势(P<0.05),而L-PST组没有显著差异(P>0.05);GA-017削弱了H-PST对G292细胞恶性行为的抑制作用。结论 PST可能通过抑制YAP/TAZ信号通路来抑制OS细胞的增殖、迁移和侵袭。

辛伐他汀通过YAP/TAZ抗前列腺癌细胞增殖的作用及机制研究

目的:考察辛伐他汀对22Rv1和DU145前列腺癌细胞的增殖抑制作用,并对其作用机制进行初步的探讨。方法:复苏并培养22Rv1和DU145前列腺癌细胞株,给予不同浓度辛伐他汀(2μmol/L、10μmol/L、50μmol/L)进行干预。辛伐他汀对22Rv1和DU145前列腺癌细胞的增殖抑制作用采用MTT法检测;对22Rv1和DU145前列腺癌细胞凋亡的影响用流式检测;对22Rv1和DU145前列腺癌细胞增殖相关蛋白p-mTOR(Ser2448)、p-Akt(Ser473)、凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9、PARP以及YAP、p-YAP、 TAZ表达的影响用Western Blot检测;通过过表达TAZ考察TAZ在辛伐他汀抗前列腺癌细胞增殖中的作用。结果:辛伐他汀抑制22Rv1和DU145前列腺癌细胞的增殖,并呈浓度依赖性和时间依赖性,在分子水平,辛伐他汀浓度依赖性地抑制了p-mTOR(Ser2448)和p-Akt(Ser473)的表达;辛伐他汀浓度依赖性地诱导22Rv1和DU145前列腺癌细胞发生凋亡,并在分子水平浓度依赖性地促进了Caspase-3、Caspase-9和PARP的剪切;辛伐他汀浓度依赖性地上调p-YAP的表达,抑制TAZ的表达,过表达TAZ减弱了辛伐他汀对前列腺癌细胞的凋亡诱导作用和增殖抑制作用。结论:辛伐他汀可能通过抑制YAP/TAZ诱导前列腺癌细胞凋亡,抑制前列腺癌细胞的增殖。

低氧运动预适应激活自噬调控Hippo/YAP/TAZ信号通路减轻急性低氧力竭运动大鼠骨骼肌损伤

目的:探讨低氧运动预适应激活自噬调控Hippo/YAP/TAZ信号通路对急性低氧力竭运动大鼠骨骼肌保护的机制。方法:50只6周龄SPF级雄性SD大鼠,随机分为空白对照组(Con组,n=10)、单纯急性低氧力竭运动组(HE组,n=10)、低氧预适应+急性低氧力竭运动组(HP+HE组,n=10)、运动预适应+急性低氧力竭运动组(EP+HE组,n=10)、低氧预适应+运动预适应+急性低氧力竭运动组(EP/HP+HE组,n=10)。预适应周期2 w, EP+HE组及EP/HP+HE组进行2次/d常压常氧跑台训练;HP+HE组及EP/HP+HE组进行10 h/d间歇性低氧暴露(FiO213.5%)。预适应后HE组、HP+HE组、EP+HE组及EP/HP+HE组大鼠进行低氧环境跑台力竭训练(FiO211.9%~12.0%)。低氧力竭运动后2 h,尾静脉取血检测血清骨骼肌损伤、炎症反应和氧化应激指标,苏木精-伊红染色观察腓肠肌病理特征,并检测腓肠肌自噬相关蛋白、Hippo/YAP/TAZ信号通路蛋白及mRNA。结果:(1)与HE组比较,预适应组大鼠低氧力竭运动后的腓肠肌结构损伤、炎症反应和氧化应激明显减轻。(2)HE组Atg5、Beclin1蛋白表达显著低于EP+HE组及EP/HP+HE组(P<0.05),EP/HP+HE组Atg5、Beclin1蛋白表达显著高于HP+HE组(P<0.05);HE组LC3-Ⅱ蛋白表达显著高于EP+HE组及EP/HP+HE组(P<0.05),EP+HE组及EP/HP+HE组显著高于HP+HE组(P<0.05)。(3)HE组MST1 mRNA显著高于EP+HE组及EP/HP+HE组(P<0.05),EP+HE组及EP/HP+HE组显著高于HP+HE组(P<0.05);HE组LATS1 mRNA显著低于预适应组(P<0.05);HE组YAP mRNA显著高于预适应组(P<0.05),EP/HP+HE组显著低于HP+HE组(P<0.05);HE组及HP+HE TAZ mRNA显著高于EP+HE组及EP/HP+HE组均显著降低(P<0.05)。(4)HE组MST1、LATS1及其磷酸化水平显著低于EP+HE组及EP/HP+HE组(P<0.05),EP/HP+HE组MST1显著高于HP+HE组(P<0.05);HE组YAP蛋白显著高于EP+HE组及EP/HP+HE组(P<0.05);HE组TAZ蛋白显著高于预适应组均显著降低(P<0.05),EP/HP+HE组均显著低于HP+HE组(P<0.05)。结论:低氧运动预适应可能通过激活骨骼肌自噬抑制Hippo/YAP/TAZ信号通路减轻急性低氧力竭运动大鼠的骨骼肌损伤、炎症反应和氧化应激反应。

Hippo信号通路中的核心因子YAP/TAZ参与骨形成的作用与机制

背景:随着机械信号在骨骼中的作用研究逐渐增多,作为力学敏感因子的YAP/TAZ也逐渐受到大众关注。现有研究发现YAP/TAZ可能在骨形成的过程中作为一个重要介质参与其中,但具体机制尚不清楚。目的:对YAP/TAZ参与骨形成的最新研究进展进行综述。方法:第一作者以“Hippo pathway,YAP/TAZ,Bone,Osteogenesis”为英文检索词,以“Hippo信号通路、YAP/TAZ、骨骼、成骨”为中文检索词,检索PubMed数据库和中国知网2016年至2022年3月发表的相关文献,对筛选出的文献进行归纳分析。最终纳入56篇相关文献进行综述。结果与结论:①YAP/TAZ作为Hippo通路的核心因子,在其功能调控上具有特殊性,除了在分子水平上可以调控其活性,细胞微环境的改变,如细胞浓度、细胞形状和细胞外基质的刚度也可以促使其活性改变从而发挥不同功能作用。②YAP/TAZ参与成骨信号传导,并且调控也受细胞微环境影响。过表达或沉默细胞中的YAP/TAZ会促使或抑制成骨信号的传导,从而改变细胞分化结局。③YAP/TAZ参与骨组织细胞的成骨过程,并对不同类型的骨组织细胞有不同功能。但对于过表达或沉默YAP/TAZ方法不同,选择观察细胞种属类型差异较大,结果难以统一量化。④动物实验中证实YAP/TAZ对正常骨骼形态及颌面部形态的正常发育有着至关重要的作用,并且在不同成骨分化阶段有着不同的功能。然而对于实验动物敲除YAP/TAZ条件基因不统一、观察时机不一致导致实验成果难以相互比较。YAP/TAZ在骨形成中有着重要地位,但对于其作用机制还有待深入研究,期待后续有学者深入探索其作用机制,并利用其特性在骨性疾病中发挥作用。

他克莫司调节YAP/TAZ信号通路对卵巢癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:探讨他克莫司(FK506)调节Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)信号通路对卵巢癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:将对数生长期SKOV3细胞分为对照组、阴性对照(si-NC)组(转染si-NC质粒)、沉默YAP载体(si-YAP)组(转染si-YAP)、过表达质粒阴性对照(pcDNA-NC)组(转染pcDNA-NC)、过表达YAP质粒(pcDNA-YAP)组(转染pcDNA-YAP)、FK506组(500μg/L)、FK506+si-NC组(500μg/L FK506+转染si-NC质粒)、FK506+si-YAP组(500μg/L FK506+转染si-YAP)、FK506+pcDNA-NC组(500μg/L FK506+转染pcDNA-NC)、FK506+pcDNA-YAP组(500μg/L FK506+转染pcDNA-YAP)。CCK-8法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞侵袭,qRT-PCR检测YAP、TAZ mRNA表达,Western blot检测YAP、TAZ、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、Bcl2-相关X蛋白(Bax)及细胞周期蛋白D1(CyclinD1)表达水平。结果:与IOSE80相比,SKOV3、OVCAR3、UWB1.289细胞中YAP、TAZ mRNA和蛋白表达水平显著增加(P<0.05)。与si-NC组相比,si-YAP组YAP、TAZ mRNA和蛋白表达水平、细胞活力、侵袭细胞数显著下降(P<0.05),细胞凋亡率显著增加(P<0.05);与pcDNA-NC组相比,pcDNA-YAP组YAP、TAZ mRNA和蛋白表达水平、细胞活力、侵袭细胞数显著增加(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。与对照组相比,FK506组细胞活力、侵袭数,YAP、TAZ mRNA表达,以及YAP、AZ、CyclinD1、MMP-2蛋白表达均显著降低,凋亡率及Bax表达显著增加(P<0.05);与FK506+si-NC组相比,FK506+si-YAP组细胞活力、侵袭数,YAP、TAZ mRNA表达,以及YAP、TAZ、CyclinD1、MMP-2表达显著降低,凋亡率及Bax表达显著增加(P<0.05);与FK506+pcDNA-NC组相比,FK506+pcDNA-YAP组细胞活力、侵袭数,YAP、TAZ mRNA表达,以及YAP、TAZ、CyclinD1、MMP-2表达显著增加,凋亡率及Bax表达显著降低(P<0.05)。结论:FK506通过抑制YAP/TAZ信号通路阻止SKOV3细胞增殖、侵袭,诱导其凋亡。

穿心莲内酯调节YAP/TAZ信号通路对心房颤动大鼠心肌纤维化的影响

目的:探讨穿心莲内酯调节Yes相关蛋白(YAP)/具有PDZ结合基序的转录辅激活因子(TAZ)信号通路对心房颤动大鼠心肌纤维化的影响。方法:取SD大鼠舌下静脉注射氯化钙-乙酰胆碱溶液诱导建立心房颤动模型,随机分为模型组、穿心莲内酯低剂量(10 mg/kg)组、穿心莲内酯高剂量(20 mg/kg)组、穿心莲内酯高剂量+空载组、穿心莲内酯高剂量+YAP过表达组,每组10只,另取10只大鼠舌下静脉注射相应体积生理盐水作为正常对照组,分组处理后检测大鼠心房颤动持续时间;Masson染色检测大鼠心肌组织纤维化情况,比较CVF;透射电镜观察各组大鼠心肌超微结构;ELISA检测大鼠血清及心肌组织IL-18、IL-6水平;Western Blot检测大鼠心肌组织纤维化相关蛋白及YAP/TAZ通路相关蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠心肌超微结构发生严重损伤,心房颤动持续时间、CVF、IL-18、IL-6水平及CollagenⅠ、CollagenⅢ、YAP1、TAZ蛋白表达显著升高(P<0.05)。与模型组比较,穿心莲内酯低、高剂量组大鼠心肌超微结构损伤减轻,心房颤动持续时间、CVF、IL-18、IL-6水平及CollagenⅠ、CollagenⅢ、YAP1、TAZ蛋白表达显著降低(P<0.05)。穿心莲内酯高剂量组各指标改善显著优于穿心莲内酯低剂量组(P<0.05)。与穿心莲内酯高剂量组比较,穿心莲内酯高剂量+空载组大鼠各指标差异无统计学意义(P>0.05),穿心莲内酯高剂量+YAP过表达组大鼠心肌超微结构损伤加重,心房颤动持续时间、CVF、IL-18、IL-6水平及CollagenⅠ、CollagenⅢ、YAP1、TAZ蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:穿心莲内酯可通过下调YAP/TAZ信号通路表达而抑制心房颤动大鼠炎症,进而减轻大鼠心肌组织纤维化,改善其心房颤动症状。

YAP/TAZ在肾细胞癌发生发展中作用及其机制的研究进展

肾癌是泌尿系统最常见的肿瘤之一,早期临床表现不典型,经手术治疗后仍有部分发生复发和转移,病死率高。因此,肾癌的早期诊断和晚期治疗成为亟待解决的两大问题。以YAP/TAZ为核心的Hippo通路在肾癌的发生发展中发挥着重要作用,YAP/TAZ通过直接调控肾癌细胞的转录活性、内源性竞争RNA(ceRNA)机制、促进血管形成、增强肾细胞铁死亡敏感性以及作为肾癌细胞中其他信号通路的转导枢纽等多种机制,促进肾癌细胞的侵袭、转移和耐药;除此之外,YAP/TAZ在多种罕见的肾癌组织学亚型中起到指导分型和预测预后的作用。对于YAP/TAZ在肾癌中的作用及其机制的认识可为临床肾癌的早期诊断和晚期治疗提供理论参考依据。

YAP/TAZ蛋白在骨骼形成及稳态维持中的作用

YAP和TAZ同为转录辅助因子,自身缺乏DNA结构域,不能直接诱导基因表达[1]。在特定的细胞内环境下,YAP/TAZ需要和其他蛋白结合,从而激活或抑制下游转录过程。目前已知的YAP/TAZ经典转录结合因子是TEA转录因子(TEAD)1-4,TEAD蛋白具有DNA结合区域,但缺少转录激活区域[2,3]。参与骨发生、骨稳态维持和修复的转录因子也需与YAP/TAZ结合,才能发挥相应功能[4~7]。

LncRNANNT-AS1通过调控miR-582-5p/NCKAP1轴激活Hippo-YAP/TAZ信号通路促进膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭和干细胞干性影响

目的检测膀胱癌中长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)烟酰胺核苷酸转氢酶反义RNA1(nicotinamide nucleotide transhydrogenase antisense RNA 1,NNT-AS1)表达情况,研究其对膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭及肿瘤干细胞干性的影响及可能分子机制。方法实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)法检测膀胱癌组织标本及细胞中LncRNA NNT-AS1表达情况;将膀胱癌细胞转染分为sh-NC组,sh-NNT-AS1组,sh-NNT-AS1+inh-582-5p组和sh-NNT-AS1+inh-582-5p+si-NCKAP1组。采用CCK-8法检测细胞增殖吸光度值(A值);Transwell实验检测细胞迁移、侵袭穿膜数;细胞成球实验检测干细胞干性。检索starBase和TargetScan数据库,并通过双荧光素酶报告基因实验预测验证LncRNA NNT-AS1和miR-582-5p,miR-582-5p与NCKAP1的靶向结合关系。Western blot检测膀胱癌干细胞标志蛋白(CD44,ALDH1A1,Oct4,Nanog)及Hippo-YAP/TAZ信号通路相关蛋白表达灰度值。结果与癌旁组织相比,膀胱癌组织中LncRNA NNT-AS1表达水平(0.34±0.07 vs 1.15±0.21)明显升高,差异有统计学意义(t=16.364,P<0.001)。与人正常膀胱上皮SV-HUC-1细胞(1.00±0.01)相比,膀胱癌细胞T24,5637,UM-UC-3和TCC-SUP中LncRNA NNT-AS1表达(6.03±0.17,4.66±0.36,5.47±0.26,3.02±0.20)明显升高,差异有统计学意义(t=17.472~51.160,均P<0.001)。与sh-NC组相比,在24,48和72 h时sh-NNT-AS1组细胞增值能力(A值)均显著降低(0.80±0.01 vs 1.07±0.06,1.18±0..07 vs 1.83±0.03,1.89±0.07 vs 2.53±0.06),差异有统计学意义(t=7.688,14.783,12.024,均P<0.05);sh-NNT-AS1组细胞迁移穿膜数(55.00±2.65个vs 354.30±7.84个)、细胞侵袭穿膜数(45.67±2.33个vs 303.00±9.07个)及膀胱癌干细胞成球数(20.85±2.17个vs 41.35±3.67个)显著降低,差异具有统计学意义(t=-62.641,-47.596,8.328,均P<0.001)。与sh-NC组相比,sh-NNT-AS1组细胞中CD44(0.04±0.01 vs 1.12±0.02),ALDH1A1(0.23±0.01 vs 1.16±0.05),Oct4(0.17±0.02 vs 1.10±0.04),Nanog(0.49±0.03 vs 1.24±0.03)的蛋白表达灰度值显著降低,差异具有统计学意义(t=83.656,31.591,36.019,30.619,均P<0.001)。与si-NC组相比,sh-NNT-AS1组CD44+CD133+细胞比例(9.30%±0.79%vs 88.50%±2.77%)明显降低,差异有统计学意义(t=-47.624,P<0.001)。双荧光素酶报告基因检测结果显示miR-582-5p为LncRNANNT-AS1靶基因,NCKAP1为miR-582-5p靶基因;LncRNA NNT-AS1靶向调控miR-582-5p/NCKAP1轴。与sh-NNT-AS1组相比,在24,48,72 h时sh-NNT-AS1+inh-582-5p组细胞增值能力(A值)均明显升高(0.98±0.03 vs 0.73±0.06,1.74±0.04 vs 1.22±0.05,2.33±0.16 vs 1.69±0.14),差异有统计学意义(t=5.977~11.628,均P<0.001)。与sh-NNT-AS1+inh-582-5p组相比,在24,48,72 h时sh-NNT-AS1+inh-582-5p+si-NCKAP1组细胞增值能力(A值)显著降低(0.69±0.04,1.01±0.07,1.39±0.08),差异有统计学意义(t=7.877~16.323,均P<0.001)。与sh-NNT-AS1组相比,sh-NNT-AS1+inh-582-5p组细胞迁移穿膜数(322.31±28.45个vs 81.42±13.22个)、细胞侵袭穿膜数(316.07±30.21个vs 92.13±12.65个)及膀胱癌干细胞成球数(38.55±2.20个vs 18.98±1.16个)显著增加,差异具有统计学意义(t=15.115,13.158,14.592,均P<0.001)。与sh-NNT-AS1组相比,sh-NNT-AS1+inh-582-5p组细胞CD44(1.05±0.08 vs 0.10±0.01),ALDH1A1(1.20±0.16 vs 0.22±0.02),Oct4(1.32±0.14 vs 0.19±0.03),Nanog(0.97±0.12 vs 0.15±0.04),YAP(1.29±0.11 vs 0.42±0.07)和TAZ(1.41±0.16 vs 0.35±0.05)蛋白表达灰度值均显著增加,差异具有统计学意义(t=10.650~21.243,均P<0.001)。与sh-NNT-AS1+inh-582-5p组相比,sh-NNT-AS1+inh-582-5p+si-NCKAP1组细胞迁移穿膜数(65.33±12.60个)、细胞侵袭穿膜数(71.08±15.19个)、膀胱癌干细胞成球数(11.36±1.05个)均显著降低,差异具有统计学意义(t=16.125,14.395,21.365,均P<0.001)。与sh-NNT-AS1+inh-582-5p组相比,sh-NNT-AS1+inh-582-5p+si-NCKAP1组细胞CD44(0.25±0.05),ALDH1A1(0.61±0.11),Oct4(0.22±0.08),Nanog(0.44±0.07),YAP(0.25±0.09)和TAZ(0.30±0.04)蛋白表达灰度值显著降低,差异具有统计学意义(t=6.412~17.889,均P<0.001)。结论膀胱癌中LncRNA NNT-AS1表达上调,其对膀胱癌细胞增殖、侵袭及肿瘤干细胞干性的影响,可能是通过调控miR-582-5p/NCKAP1分子轴,激活Hippo-YAP/TAZ信号通路完成。

基于Hippo/yap/TAZ途径探讨雷公藤内酯醇-聚乙烯亚胺-环糊精逆转卵巢癌耐药的作用及机制

目的观察雷公藤内酯醇-聚乙烯亚胺-环糊精复合物(TP-PEI-CyD)对人卵巢癌顺铂耐药细胞(SKOV3/DDP)的作用及其可能的作用机制。方法采用CCK-8法测定雷公藤内酯醇单体(triptolide,TPL)、TP-PEICyD对人正常卵巢上皮细胞IOSE80、卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP的细胞毒性,筛选TP-PEI-CyD对SKOV3/DDP的低毒浓度;采用低毒浓度TP-PEI-CyD、TPL处理SKOV3/DDP细胞,流式细胞术检测SKOV3/DDP细胞凋亡,划痕实验检测SKOV3/DDP细胞迁移,Transwell检测SKOV3/DDP细胞侵袭,RT-PCR及Western Blot法检测SKOV3/DDP细胞内Hippo、yap及TAZ mRNA和蛋白表达。结果与对照组比较,TPL、TP-PEICyD均可明显抑制IOSE80、SKOV3/DDP细胞的生长,且细胞毒性随着TPL、TP-PEI-CyD浓度的升高而增加,与TPL组相比,TP-PEI-CyD对IOSE80细胞的毒性明显降低(P<0.05),但对SKOV3/DDP细胞的抑制率无明显变化;低毒浓度的TP-PEI-CyD、TPL作用于SKOV3/DDP细胞后:TP-PEI-CyD组、TPL组SKOV3/DDP细胞凋亡率显著增加(P<0.01);迁移能力、侵袭能力显著降低(P<0.01);SKOV3/DDP细胞中Hippo、yap及TAZ的mRNA及蛋白表达均显著降低(P<0.05);而TP-PEI-CyD组与TPL单体组相比,差异均无统计学意义(P>0.05);结论雷公藤内酯醇耦合聚乙烯亚胺-环糊精后,其毒副作用降低,且可有效逆转SKOV-3细胞的肿瘤耐药性,其疗效等同于雷公藤内酯醇单药,其可能是通过调节Hippo/yap/TAZ信号通路来实现的。

乳腺癌细胞中AIP1/YAP/TAZ的表达及临床意义

目的:通过检测乳腺癌4T1细胞系中AIP1/YAP/TAZ的表达量及敲除AIP1后YAP/TAZ表达量的差异,为乳腺癌寻找新的生物标志物和治疗手段。方法:选取乳腺癌4T1细胞系,通过RT-PCR及Western-Blot检测AIP1/YAP/TAZ的表达量及其差异。结果:AIP1/YAP/TAZ在乳腺癌中均有表达,且敲除AIP1后YAP表达量明显减少(P<0.05),TAZ表达量也减少。结论:AIP1/YAP/TAZ可作为一种潜在的生物标志物来预测乳腺癌的恶性程度,为探索乳腺癌的治疗提供新的方向。

复方苦参注射液对结肠癌荷瘤裸鼠YAP/TAZ表达的影响

目的:观察复方苦参注射液(CKI)对人HT-29结肠癌裸鼠移植瘤的抗肿瘤作用。方法:建立裸鼠异种移植瘤模型。实验分为空白对照组、CKI低剂量组、CKI高剂量组、奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)组共4组,每组10只Balb/c裸鼠。CKI低剂量组和高剂量组每天施用不同剂量的CKI[1. 0和4. 0 m L/(kg·d)],持续给药28 d,L-OHP干预组予以L-OHP干预(10 mg/kg),每隔48 h给药一次,持续28 d。每天观察移植瘤的生长并测量肿瘤体积。末次给药12 h后处死取材。通过q PCR法检测移植瘤组织中YAP、TAZ mRNA相对转录水平,免疫组化法检测移植瘤组织中YAP、TAZ、MMP2和MMP9蛋白表达情况。结果:不同剂量的CKI干预可抑制移植瘤的生长(P <0. 05 vs.对照组),高剂量组具有最佳抑制作用(P <0. 05 vs. CKI低剂量组)。不同剂量的CKI干预均可以下调移植瘤组织中YAP和TAZ的mRNA转录和蛋白表达水平(P <0. 05 vs.对照组),且高剂量组抑制作用更为显著(P <0. 05 vs. CKI低剂量组); L-OHP干预显著下调移植瘤组织中YAP和TAZ的mRNA转录和蛋白表达(P <0. 05 vs.对照组),与CKI高剂量干预组比较,差异具统计学意义(P <0. 05)。CKI和L-OHP干预均抑制移植瘤组织中MMP2和MMP9蛋白表达,其中,CKI高剂量组优于低剂量组(P <0. 05),L-OHP优于CKI高剂量组(P <0. 05)。结论:CKI可抑制裸鼠人HT-29结肠癌皮下移植瘤的发展,其作用机制可能是通过调控Hippo信号通路,抑制下游YAP/TAZ活性,并进一步下调MMPs的表达来实现的。

YAP/TAZ调控多信号通路参与肝纤维化的发生与发展

肝纤维化是肝应对损伤的一种修复反应。肝星状细胞活化是肝纤维化的中心环节,这一过程涉及Hippo,Notch,Wnt/β-catenin,TGF-β/Smad等多条信号通路。YAP/TAZ是Hippo肿瘤抑制途径的一个重要细胞核影响因子,其活性是整个器官生长、细胞增殖以及细胞在组织更新与再生过程中特异性扩增的关键。YAP/TAZ蛋白作为枢纽可能通过调控Hippo,Notch,Wnt/β-catenin,TGF-β/Smad通路影响肝纤维化的发生与发展。

HIPPO-YAP/TAZ信号通路与干细胞分化相关信号通路交叉作用的研究进展

调控干细胞的增殖与分化对维持人体组织的稳态至关重要。HIPPO信号通路的成分和功能在哺乳动物中高度保守,在物种的进化过程中极少发生突变,且其成分具有高度的同源性。其特性是在组织发育和再生过程中发挥调节细胞增殖和分化的作用。HIPPO-YAP/TAZ通路可以调控间充质干细胞的增殖及多向分化功能,且调控并非该通路独立完成的,而是部分依赖于与其他信号通路之间的级联反应。HIPPO信号通路与转化生长因子超家族TGF-β/Smads、经典Wnt/β-链蛋白(β-Catenin)及EGFR/丝裂原相关蛋白激酶(MAPK)等信号转导通路发生级联反应,进而调节间充质干细胞的增殖、组织生长及多向分化。本文回顾HIPPO信号通路的调控机制,对间充质干细胞生物学、组织再生过程中发挥的重要作用作一综述。

桑枝多糖基于YAP/TAZ信号通路调控db/db小鼠肾纤维化作用的研究

目的研究桑枝多糖基于YAP/TAZ信号通路调控db/db小鼠肾纤维化作用的影响。方法将40只24周龄自发型2型糖尿病db/db小鼠随机分为模型组、缬沙坦组(20mg/kg)、桑枝多糖低剂量组(600mg/kg)、桑枝多糖高剂量组(1200mg/kg),每组10只,日常进行高脂饮食喂养,连续灌胃相应药物60天,每天1次。另将10只db/m小鼠为空白组,日常进行普通饲料喂养,模型组与空白组小鼠灌胃等体积生理盐水60天。给药第60天采集小鼠尿液,测量尿量及终点法测24h尿白蛋白(UP)含量。全自动生化分析仪测定小鼠血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)含量。末次给药后,小鼠禁食不禁水12h,测其空腹血糖(FBG)。HE染色观察小鼠肾组织病理学变化。采用ELISA法检测肾组织纤维化指标TGF-β1、纤连蛋白(FN)、结缔组织生长因子(CTGF)、胶原Ⅰ型(CollagenⅠ)含量及炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、趋化因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)含量。Western blot法检测肾组织Yes相关蛋白(YAP)、TAZ蛋白表达。结果与模型组比较,桑枝多糖低、高剂量组小鼠Scr[(0.39±0.09)mg/dL、(0.32±0.07)mg/dL比(0.62±012)mg/dL]、BUN[(25.75±4.75)mg/dL、(20.62±3.68)mg/dL比(39.18±4.63)mg/dL]、UP[(3.45±0.42)mg/24h、(2.76±0.47)mg/24h比(6.38±2.03)mg/24h]含量显著降低(P均<0.05);纤维化指标TGF-β1[(3.76±0.52)ng/mL、(2.53±0.38)ng/mL比(4.98±1.17)ng/mL]、FN[(5.29±1.13)ng/mL、(4.47±1.02)ng/mL比(6.13±1.07)ng/mL]、CTGF[(14.52±1.22)ng/mL、(11.24±0.87)ng/mL比(17.52±1.26)ng/mL]、CollagenⅠ[(10.93±0.85)ng/mL、(8.14±0.76)ng/mL比(14.81±1.34)ng/mL]及炎症因子TNF-α[(87.25±7.81)ng/L、(78.66±6.36)ng/L比(134.82±8.90)ng/L]、IL-6[(34.72±3.35)ng/L、(21.16±2.51)ng/L比(58.65±5.71)ng/mL]、MCP-1[(0.38±0.04)ng/L、(0.29±0.06)ng/L比(0.51±0.05)ng/L]含量明显减少(P均<0.05),YAP[(0.48±0.06)、(0.31±0.05)比(0.53±0.11)]、TAZ[(0.31±0.04)、(0.21±0.03)比(0.37±0.05)]蛋白表达显著降低(P均<0.05)。结论桑枝多糖对db/db小鼠糖尿病肾病的肾纤维化有一定的保护作用,其作用机制可能与调节YAP/TAZ信号通路,降低肾脏组织纤维化因子形成及减少炎症因子含量有关。

Hippo通路效应因子YAP/TAZ对肾纤维化影响的研究进展

肾纤维化是肾损伤异常修复的结果,涉及复杂的病理机制。Hippo信号通路对肾发育、代谢、稳态及肾疾病发展方面具有调控作用。Hippo通路核心效应因子YAP/TAZ的激活在肾纤维化中起重要作用,其通过促进肾炎症反应、参与细胞机械转导、串扰其他致纤维化通路等机制影响肾纤维化。文章就近年Hippo信号通路对肾纤维化及相关疾病影响的研究现状以及现有的抑制剂干预YAP/TAZ延缓肾纤维化的研究成果予以综述,为临床上延缓肾纤维化提供新的思路与理论依据。

YAP/TAZ蛋白调控病毒侵染与免疫的研究进展

YAP/TAZ介导的Hippo信号通路在生命进程中扮演重要角色,它主要调控器官大小,胚胎发育,细胞增殖以及肿瘤发生等。最新研究发现Hippo信号通路关键蛋白YAP/TAZ在调控人类病毒侵染及免疫反应中发挥非常重要的作用。文章总结了YAP/TAZ蛋白的病理学特征,重点介绍YAP/TAZ蛋白在调控人类病毒侵染、复制、诱发疾病以及免疫调控中的功能及其机理,以期为病毒致病机制研究及治疗手段开发提供新的见解和思路。

Hippo-YAP/TAZ通路在肿瘤免疫调节中的作用研究进展

Hippo-YAP/TAZ通路在调节细胞增殖、存活和信号转导等生物学功能方面发挥着重要作用。近年来,该通路在肿瘤免疫调节中的作用被广泛研究,其不仅可以调节肿瘤微环境中的免疫细胞,还能在mRNA和蛋白水平上调控程序性死亡配体-1(PD-L1)的转录和翻译过程,进而影响程序性死亡受体-1(PD-1)/PD-L1免疫检查点抑制剂的疗效。此外,该通路还是肿瘤细胞耐药与免疫逃逸之间联系的桥梁。因此,全面了解Hippo-YAP/TAZ通路在免疫调节中的作用机制,可为临床抗肿瘤治疗寻求新的靶点,使更多患者在免疫治疗中获益。