磷硫代siRNA的YAP基因沉默活性研究

为了探究RNA聚合酶酶促合成非对映体纯PS-siRNA(pPS-siRNA)的基因沉默活性,本研究针对潜在的癌症治疗靶点Yes相关蛋白(YAP),通过qPCR、Western blot等方法研究了其对YAP基因的沉默效果和对HeLa细胞的细胞毒性.结果表明,与未修饰的siRNA(PO-siRNA)相比,pPS-siRNA可以更好地下调YAP基因表达(效率提高约30%),而没有明显的细胞毒性.此外,MTT细胞增殖实验与流式细胞术的结果表明,经pPS-siRNA敲降YAP后,HeLa细胞的增殖受到了抑制.说明pPS-siRNA在基因治疗方面具有优越性以及YAP作为肿瘤治疗靶点的潜力.

过表达YAP基因通过PI3 K/AKT/mTOR信号通路促进舌鳞癌增殖

目的基于PI3K/AKT/mTOR信号通路,探究过表达YAP基因对舌鳞癌细胞增殖和凋亡的分子学调控机制.方法构建稳定过表达YAP基因的舌鳞癌CAL27和SCC25细胞系.采用CCK-8和流式细胞术分析过表达YAP基因对细胞增殖、周期和凋亡的影响.蛋白免疫印迹法分析过表达YAP基因对细胞内CDK4、CDK6、p21、BAX及对PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响.结果CAL27细胞和SCC25细胞中过表达YAP组YAP mRNA较对照组升高(t=-19.29,P<0.001;t=-5.44,P<0.001),且过表达YAP组的YAP蛋白表达量较对照组增加(t=-31.28,P<0.001;t=-42.84,P<0.001);过表达YAP组的G1期细胞比例减少,过表达YAP组S期细胞比例较对照组升高;过表达YAP组的早期凋亡和晚期凋亡细胞都减少;过表达YAP组细胞中CDK4、CDK6、BCL-2、PARP等蛋白表达升高,p21、BAX及caspase3蛋白的表达减少;过表达YAP基因可使CAL27和SCC25细胞内AKT(tCAL27=-30.60,P<0.001;tSCC25=-16.77,P<0.001)、p-AKT(tCAL27=-10.23,P<0.001;tSCC25=-10.67,P<0.001),mTOR(tCAL27=-13.93,P<0.001;tSCC25=-9.57,P<0.001)、p-mTOR(tCAL27=-17.17,P<0.001;tSCC25=-8.51,P<0.001)表达量较对照组增高.结论过表达YAP基因可以通过PI3K/AKT/mTOR信号通路促进CAL27和SCC25细胞增殖并抑制细胞凋亡.