甘草酸二铵对颅脑损伤大鼠神经元活性、脑组织病理及YAP1蛋白的影响

目的探讨甘草酸二铵(DG)对颅脑损伤大鼠神经元活性、脑组织病理及YES关联蛋白1(YAP1)蛋白的研究。方法将44只SD大鼠随机分为4组,每组11只,健康组、外伤组(颅脑外伤模型)、依达组(颅脑外伤模型给予依达拉奉干预)、甘草组(颅脑外伤模型给予DG干预)。采用Zea Longa法(5分)检测各组大鼠神经功能;用酶联免疫法测定血清白介素-6(IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用HE染色观察脑组织神经细胞形态学变化;TUNEL法检测各组大鼠海马组织神经细胞凋亡;免疫印迹检测海马组织YAP1、磷酸化YAP1(p-YAP1)、大肿瘤抑制基因1(Lats1)及磷酸化Lats1(p-Lats1)蛋白表达水平。结果与健康组相比,外伤组神经功能评分,IL-6、TNF-α、IL-1β,神经细胞凋亡、YAP1、p-YAP1、Lats1、p-Lats1均升高(P<0.05);与外伤组相比,依达组及甘草组以上指标均降低(P<0.05),依达组和甘草组比较,以上指标差异无统计学意义(P>0.05);与健康组相比,外伤组大鼠海马组织结构紊乱,神经元数目减少,细胞核深染,细胞膜部分消失,依达组和甘草组神经元排列比外伤组整齐有序,肿胀程度减轻,细胞核较清晰。结论甘草酸二铵对颅脑损伤的治疗具有一定积极作用,且与依达拉奉治疗相关相当,其机制可能与改善神经功能、调节炎症因子变化及相关蛋白表达相关。

Yes相关蛋白1在乳腺癌中的表达及临床意义

目的探讨yes相关蛋白1(YAP1)在正常乳腺组织及乳腺癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学Envision法检测133例乳腺浸润性导管癌,37例乳腺导管原位癌及47例癌旁组织中YAP1的表达。结果 (1)YAP1在乳腺癌旁组织中的阳性率(81%)明显高于乳腺癌组织中的阳性率(46%)(P<0.05);(2)YAP1在乳腺导管原位癌中的阳性率为43%,与乳腺浸润性导管癌之间的差异无统计学意义(P=0.925);(3)YAP1阳性表达与患者年龄、肿瘤大小及淋巴结转移转移无关,而与乳腺癌的分子分型有关(P<0.05)。结论在乳腺癌中YAP1可能作为抑癌基因发挥作用,YAP1的表达对乳腺癌的治疗有一定意义。

缺氧环境下YAP1的表达对子痫前期胎盘血管形成的影响及作用机制

目的探讨缺氧环境下维替泊芬抑制Yes-相关蛋白1(Yes-associated protein1,YAP1)表达对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡、迁移、侵袭能力和血管生成能力的影响,以及影响子痫前期胎盘血管形成的可能机制。方法MTT法检测缺氧环境下不同质量浓度(0、4、8、12、16μg/mL)维替泊芬处理HUVEC 12、24 h时的细胞活性并计算IC50值,以选择后续实验药物浓度。流式细胞术分析缺氧环境下维替泊芬对HUVEC凋亡的影响;细胞划痕实验和Transwell小室实验检测缺氧环境下维替泊芬对HUVEC迁移、侵袭能力的影响;小管形成实验检测缺氧环境下维替泊芬对HUVEC血管生成能力的影响。Western blotting检测常氧及缺氧环境下维替泊芬对Hippo信号通路中YAP1、TEA转录因子1(TEAD1)蛋白表达的影响。结果缺氧环境下,维替泊芬处理HUVEC 12、24 h的IC50值分别为13.26、16.74μg/mL;使用维替泊芬可抑制HUVEC增殖(P<0.01)。流式细胞术结果显示,与对照组相比,在缺氧环境下维替泊芬能诱导HUVEC凋亡(P<0.01)。细胞划痕、Transwell小室及小管形成实验结果显示,与对照组相比,在缺氧环境下使用维替泊芬抑制YAP1表达能够抑制HUVEC迁移、侵袭及血管形成能力(P<0.05)。Western blotting结果显示,在常氧环境下及缺氧环境下,维替泊芬处理HUVEC 24 h后YAP1及TEAD1蛋白表达均降低(P<0.01)。结论在缺氧环境下,维替泊芬通过抑制YAP1及TEAD1的蛋白表达而抑制HUVEC细胞增殖、促进细胞凋亡,并降低其迁移、侵袭能力和血管生成能力。证实Hippo-YAP1信号通路可能通过调控血管内皮细胞增殖和侵袭、影响子痫前期胎盘血管形成,参与子痫前期的发生。

miR-16通过靶向调控YAP1基因表达影响肺癌细胞的增殖

目的探讨miR-16通过靶向调控Yes相关蛋白(YAP) 1基因表达影响肺癌细胞的增殖。方法采用RT-PCR法检测miR-16在不同肺癌细胞株及人正常胚肺细胞中的表达。脂质体LipofectamineTM3000将miR-16 mimics和miR-16NC转入肺癌细胞中,RT-PCR检测miR-16表达,MTT法检测细胞活力,软琼脂糖克隆形成实验检测细胞克隆数目,Ho-echst33258检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,RT-PCR法及Western印迹检测细胞中YAP1蛋白及mRNA表达,并进行荧光素酶报告基因分析。结果 miR-16在A549、H1050、H1299、NCI-H520、NCI H596及MIRC-5中的表达分别为(0. 38±0. 03)、(1. 35±0. 01)、(1. 10±0. 11)、(1. 43±0. 14)、(1. 56±0. 15)、(2. 38±0. 25);与MIRC-5比较,肺癌细胞中miR-16表达量下调(P<0. 01),且在A549细胞中表达量最低,因此选为后续实验研究对象。与miR-16 NC组比较,miR-16 mimics组miR-16表达量显著提高(P<0. 01);且转染24、48、72 h后,细胞活力均下降(P<0. 01);转染48 h后,细胞克隆形成数目减少(P<0. 01),细胞凋亡率提高(P<0. 01),细胞周期阻滞于G1期(P<0. 01);同时,miR-16 mimics能够靶向调控YAP1,下调YAP1蛋白及mRNA表达(P<0. 01)。结论 miR-16 mimics通过靶向下调YAP1表达进而抑制A549细胞增殖。

不同浓度维替泊芬对鼻咽癌细胞株CNE1增殖、侵袭、凋亡的影响及其机制

目的观察不同浓度维替泊芬对鼻咽癌细胞株CNE1增殖、侵袭、凋亡、细胞周期的影响,并探讨及其机制。方法取对数生长期CNE1细胞分为实验组和对照组,实验组分别加入1、2、4μmol/L的维替泊芬,记为A、B、C组,对照组加入等量培养基。采用CCK-8法测算各组细胞存活率(以细胞存活率表示细胞增殖能力),采用细胞克隆形成实验测算细胞克隆形成个数(以细胞克隆形成个数表示细胞克隆形成能力),采用Transwell小室侵袭实验测算侵袭细胞数(以侵袭细胞数表示细胞侵袭能力),采用流式细胞术测算各组细胞凋亡率及各细胞周期细胞百分比,采用实时荧光定量PCR法检测B组及对照组细胞中YAP1、TEAD、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、B细胞瘤-2(Bcl-2)、细胞周期素D1(CyclinD1)、髓细胞组织增生蛋白(MYC)、Axl mRNA,采用Western Blotting法检测B组及对照组细胞中YAP1、TEAD、caspase-3、Bcl-2、CyclinD1、MYC、Axl蛋白。结果A、B、C及对照组细胞培养24 h时细胞存活率分别为85.27%±0.63%、74.18%±1.01%、57.67%±0.92%、100.00%±0.42%,组间相比,P均<0.05;A、B、C及对照组细胞培养48 h时细胞存活率分别为70.35%±0.61%、59.33%±1.27%、41.39%±0.46%、100.00%±0.85%,组间相比,P均<0.05;A、B、C组细胞在培养48 h时的细胞存活率,与24 h时相比,P均<0.05。A、B、C及对照组细胞克隆形成个数分别为183.67±12.92、118.67±10.50、47.33±5.31、253.67±8.18个,组间相比,P均<0.05。A、B、C及对照组细胞侵袭细胞数分别为44.67±2.87、28.67±4.11、16.67±3.68、56.67±5.31个,组间相比,P均<0.05。A、B、C及对照组细胞凋亡率分别为14.52%±1.03%、26.56%±2.10%、38.64%±1.42%、5.31%±0.77%,组间相比,P均<0.05。A组G2/M、S、G0/G1期细胞分别为15.46%±1.74%、42.37%±2.69%、42.17%±1.73%,B组G2/M、S、G0/G1期细胞分别为8.39%±0.77%、34.48%±0.57%、57.13%±0.39%,C组G2/M、S、G0/G1期细胞分别为3.82%±1.89%、26.16%±0.81%、70.02%±1.42%,对照组G2/M、S、G0/G1期细胞分别为21.52%±0.75%、53.14%±1.31%、25.34%±0.95%,各细胞周期比例组间相比,P均<0.05。B组细胞中YAP1、TEAD、caspase-3、Bcl-2、CyclinD1、MYC、Axl mRNA的相对表达量分别为0.37±0.12、0.56±0.17、0.35±0.25、0.43±0.29、0.48±0.27、0.39±0.35、0.35±0.71,对照组细胞中YAP1、TEAD、caspase-3、Bcl-2、CyclinD1、MYC、Axl mRNA的相对表达量分别为1.00±0.33、1.00±0.67、1.00±0.14、1.00±0.28、1.00±0.81、1.00±0.33、1.00±0.11,两组相比,P均<0.05。B组细胞中YAP1、TEAD、caspase-3、Bcl-2、CyclinD1、MYC、Axl蛋白的相对表达量分别为0.51±0.45、0.44±0.31、0.42±0.23、0.61±0.09、0.39±0.41、0.52±0.38、0.48±0.21,对照组细胞中YAP1、TEAD、caspase-3、Bcl-2、CyclinD1、MYC、Axl蛋白的相对表达量分别为1.00±0.56、1.00±0.82、1.00±0.73、1.00±0.32、1.00±0.34、1.00±0.14、1.00±0.29,两组相比,P均<0.05。结论1、2、4μmol/L的维替泊芬均可抑制CNE1细胞的增殖、侵袭能力,诱导细胞凋亡,阻滞生长周期,呈浓度依赖性,其作用机制可能与抑制YAP1及其下游因子的表达有关。

亚低温上调冷休克蛋白RBM3表达减轻肾脏缺血-再灌注损伤

目的探讨亚低温对肾脏缺血-再灌注损伤(IRI)的作用,以及RNA结合基序蛋白3(RBM3)及其下游效应分子在这一过程中的表达情况。方法健康SD雄性大鼠18只,随机分为正常对照(NC)组、IRI组和亚低温预处理(MHP)组,每组6只。通过检测血清肌酐水平评价肾功能,苏木素-伊红(HE)染色检测肾脏组织损伤情况,蛋白质印迹法检测肾脏组织的RBM3、Yes相关蛋白1(YAP1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白相对表达量,免疫组织化学染色进一步检测RBM3及YAP1蛋白的表达情况,采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测肾脏组织细胞凋亡情况,通过测定丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性检测肾脏组织氧化应激水平。结果与NC组相比较,IRI组和MHP组血清肌酐水平、肾脏组织病理损伤评分均升高,RBM3、YAP1和Nrf2蛋白表达水平均升高,Bcl-2/Bax比值均降低,细胞凋亡率均升高,MDA含量均升高,SOD活性均下降,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与IRI组相比较,MHP组血清肌酐水平、肾脏组织病理损伤评分均降低,RBM3、YAP1和Nrf2蛋白表达水平均升高,Bcl-2/Bax比值升高,细胞凋亡率降低,MDA含量降低,SOD 活性升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 亚低温对肾脏IRI 具有保护作用,可减轻IRI 所致细胞凋亡和氧化应激损伤,其机制可能为亚低温上调RBM3 及其下游效应分子YAP1 和Nrf2 的表达水平。

蒲公英萜醇通过Hippo及Wnt通路影响胃癌细胞增殖及转移的研究

[目的]探讨蒲公英萜醇对胃癌细胞增殖及转移的影响及其机制.[方法]体外培养胃癌AGS细胞,分为对照组和实验组,对照组加入PBS,实验组分别加入10、20、40μmol/L蒲公英萜醇.利用MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,蛋白印迹法检测Hippo及Wnt通路核心转录共激活因子YAP1及β-catenin表达.[结果]蒲公英萜醇对体外培养的AGS细胞活力具有抑制作用,实验组各浓度蒲公英萜醇均可促进AGS细胞凋亡,抑制AGS细胞迁移,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);实验组YAP1及β-catenin蛋白表达均被下调,且呈浓度依赖性,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).[结论]蒲公英萜醇具有抗胃癌作用,影响胃癌细胞增殖及迁移的机制认为可能是通过Hippo及Wnt两条信号通路来实现的.

血管紧张素Ⅱ对大鼠肺部纤维化的诱导机制

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对大鼠肺部纤维化的诱导机制。方法 SPF级雄性Wistar大鼠30只,分为对照组、模型组、模型+AngⅡ组,每组10只。各组大鼠行HE染色,评价肺纤维化和肺泡炎症程度,RT-PCR检测Yes相关蛋白1(Yap1)、PDZ结合相关性转录共激活因子(TAZ)、Smad2/3和Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)mRNA相对表达水平。结果对照组大鼠肺组织在光学显微镜下可见肺泡壁完整,结构清晰,肺泡隔无增宽,支气管腔及肺泡腔内无炎性渗出物,肺泡无炎性改变;模型组大鼠肺组织镜下可见部分肺泡融合,肺组织结构紊乱,肺泡隔严重充血、水肿及炎细胞浸润;模型+AngⅡ组大鼠肺组织镜下可见肺间质呈现均匀增厚,炎症细胞浸润增多。模型组和模型+AngⅡ组肺纤维化和肺泡炎症程度评分均显著高于对照组(P<0.05),且模型+AngⅡ组肺纤维化和肺泡炎症程度评分均显著高于模型组(P<0.05)。模型组和模型+AngⅡ组Yap1、TAZ、Smad2/3和Col-ⅠmRNA和蛋白均显著高于对照组(P<0.05),且模型+AngⅡ组Yap1、TAZ、Smad2/3和Col-ⅠmRNA和蛋白均显著高于模型组(P<0.05)。结论 AngⅡ可能通过上调Hippo信号通路中Yap1的表达和TGF-β1/Smad信号通路中Smad2/3的表达,促进Ⅰ型胶原的合成,诱导大鼠肺纤维化。

Yes相关蛋白1在不同发育时期牦牛乳腺组织中的表达与定位

Yes相关蛋白1(YAP1)是一种连接蛋白和转录共激活因子。YAP1作为Hippo信号通路的节点因子,通过发生级联磷酸化反应,实现对Hippo信号通路的响应,以此调节细胞增殖和凋亡,影响器官大小。为了解YAP1在牦牛乳腺组织生长发育和退化过程中的作用,采集处于不同发育时期(妊娠期、泌乳期、干奶期)牦牛乳腺组织样品,采用qRT-PCR、Western-blot和免疫组织化学等技术检测YAP1基因及其蛋白的相对表达情况。结果显示,妊娠期牦牛乳腺组织中YAP1 m RNA表达量显著高于泌乳期和干奶期(P<0.05),且干奶期YAP1 m RNA表达量显著高于泌乳期(P<0.05)。在牦牛乳腺不同发育时期,YAP1蛋白也发生了显著变化,妊娠期和泌乳期YAP1蛋白表达量显著高于干奶期(P<0.05)。免疫组织化学定位显示,YAP1蛋白主要分布在牦牛乳腺导管上皮细胞和乳腺腺泡上皮细胞。上述结果表明,YAP1及其编码m RNA的差异表达可能是促进乳腺生长发育所必需的,YAP1分子可能主要以自分泌或旁分泌的方式在乳腺组织发育过程中发挥重要调节作用。本研究为进一步探明YAP1在乳腺生长发育调控中的作用提供参考依据,并为探究Hippo信号通路在调控乳腺体积中所发挥的功能积累了基础资料。