人类喉癌YB-1蛋白表达的临床意义

[目的]探讨人类喉癌中YB-1蛋白表达的临床意义。[方法]应用免疫组织化学方法检测了89例人类喉癌标本中YB-1蛋白的表达情况。[结果]89例人类喉癌组织中YB-1蛋白阳性率为56.2%。病理分期Ⅲ—Ⅳ期喉癌YB-1蛋白表达阳性率(76.0%)明显高于Ⅰ—Ⅱ期(48.4%)(P=0.0185)。YB-1蛋白表达与喉癌淋巴结转移密切相关(P=0.0022)。Kaplan-Meier生存曲线分析表明YB-1蛋白阳性者的术后生存率(65.5%)明显低于YB-1蛋白阴性者(86.7%)(P=0.0045)。[结论]人类喉癌标本中YB-1蛋白的检测有利于对喉癌患者的诊断、局部淋巴结转移和预后情况作出客观判断。

YB-1蛋白对白血病细胞K562/A02生物学行为的影响

本研究探讨YB-1基因表达下调后对白血病细胞K562/A02生物学行为的影响及其机制。采用脂质体介导的方法将已构建的人YB-1基因特异性shRNA及随机片段HK的真核表达载体转染进白血病细胞K562/A02中,RT-PCR和免疫印迹反应检测YB-1 mRNA和蛋白表达量的改变;采用MTT法和细胞周期测定分析对白血病细胞增殖的影响;用AnnexinⅤ检测白血病细胞的凋亡程度;采用MTT法检测细胞IC50值变化;RT-PCR和流式细胞术检测基因转染前后细胞中的MDR1 mRNA和P-gp表达的变化。结果表明,阳性转染的3组细胞YB-1基因和蛋白的表达量明显低于随机片段组和未转染细胞;生长曲线提示阳性转染组细胞生长缓慢,细胞周期动力学分析显示阳性转染组G1期细胞增多,G2期与S期细胞显著减少;在小剂量As2O3作用下,阳性转染组细胞的凋亡数量明显高于对照组细胞;阳性转染细胞的阿霉素IC50明显低于随机片段组和阴性对照组;阳性转染细胞MDR1 mRNA水平明显降低,P-gp的峰值较对照组明显左移。结论:YB-1特异性shRNA能有效降低白血病细胞中YB-1的表达,减慢细胞生长,增加白血病细胞对化疗药物的敏感性,加速细胞凋亡。

核移位YB-1蛋白、P糖蛋白、增殖核抗原在肝细胞肝癌发生发展中的作用

目的探讨核移位YB-1蛋白、P糖蛋白（P-gp）、增殖核抗原（PCNA）在肝细胞肝癌组织发展中的作用。方法采用回顾性分析法,选取菏泽市立医院2014年3月~2015年6月收治的50例肝细胞肝癌患者的临床资料及组织标本,同时选取20例正常肝组织的临床标本进行分析、比较。采用免疫组织化学法检测患者YB-1、P-gp、PCNA蛋白水平表达,利用Western blot法检测肝癌组织、正常肝组织中核移位YB-1蛋白表达。结果经过分析与检测发现,在肝癌组织中P-gp、核移位YB-1、PCNA蛋白阳性率分别为83%、3l%、100%,与对照组相比,差异具有统计学意义（P〈0.05）;核移位YB-l蛋白、PCNA积分与肝癌肿瘤大小、病理分级及门静脉癌栓有紧密的关系;P-gp蛋白与肝癌病理分级有关。Western blot检测同样证实,核移位的YB-1蛋白在肝癌组织的表达显著高于正常肝组织,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论核移位YB-1蛋白、P-gp、PCNA蛋白能够促进肝细胞肝癌组织发生、发展,可能成为肝癌治疗的新靶点。

YB-1蛋白在结肠癌组织中的表达部位及意义

目的:探索YB-1蛋白在结肠癌组织、正常结肠组织、结肠癌细胞株、正常结肠细胞株中的表达量及其与结肠癌患者临床病理的关系。方法:采用免疫组化检测YB-1蛋白在103例结肠癌组织及相应癌旁组织、30例正常结肠组织中的表达情况;采用Western blot法检测核移位YB-1蛋白在结肠癌组织、相应癌旁组织、正常结肠组织、人结肠腺癌细胞株LS-174T、正常细胞株SW480中的表达。结果:免疫组化结果显示YB-1蛋白主要表达于癌细胞胞浆,其阳性率为(75.73%,78/103),明显高于癌旁组织(37.86%,39/103)及正常组织(30%,9/30),其差异有统计学意义(P<0.05)。其中37例(35.92%,37/103)结肠癌组织伴有明显核阳性表达,且核阳性表达与结肠癌肿瘤直径大小、有无淋巴结转移、有无远处转移或直接侵犯及癌细胞分化程度相关(P<0.05)。Western blot检测同样证实核移位YB-1蛋白在结肠癌组织中(0.382±0.095)明显高于癌旁组织(0.251±0.043)及正常结肠组织(0.238±0.045),其差异有统计学意义(F=21.268,P<0.05)。核移位YB-1蛋白在LS-174T中的表达(0.548±0.031)明显高于SW480(0.269±0.017),其差异有明显统计学意义(F=64.273,P<0.05)。结论:YB-1蛋白量的变化与核转移及结肠癌细胞的增殖分化密切相关,有可能成为结肠癌治疗的新靶点。

YB-1蛋白在宫颈腺癌组织中的表达及临床意义

目的通过检测Y盒结合蛋白1(YB-1)在正常宫颈、宫颈原位腺癌及宫颈腺癌组织中的表达情况,探讨其与宫颈腺癌发生发展的关系。方法应用免疫组织化学染色法,检测20例正常宫颈组织、28例宫颈原位腺癌组织及73例宫颈腺癌组织中YB-1蛋白的表达。结果⑴YB-1蛋白在三组宫颈组织中均有表达,在正常宫颈和宫颈原位腺癌组织中主要为低表达,阳性表达率分别为25.00%、57.14%;而在宫颈腺癌组织中主要为高表达,阳性表达率为86.30%;三者比较,差异有统计学意义(P<0.05)。⑵YB-1蛋白阳性表达全部定位于细胞质,其中宫颈腺癌组织中出现合并细胞核阳性表达细胞。⑶宫颈腺癌组织中YB-1蛋白表达与FIGO分期(P=0.015)、肿瘤直径(P=0.016)、间质浸润深度(P=0.046)及淋巴结转移(P=0.030)相关;而与患者年龄(P=0.067)、有无脉管癌栓(P=0.059)及宫旁浸润(P=0.587)无关。结论 YB-1蛋白过表达与宫颈腺癌的发生发展及淋巴结转移相关,通过检测YB-1蛋白在宫颈腺癌组织中的表达情况,有望为宫颈腺癌的诊断、治疗及预后评估提供一个新指标。

YB-1蛋白对食管癌细胞恶性表型的影响

目的探究YB-1蛋白对食管癌细胞恶性表型的影响。方法利用Western blot法检测10株食管癌细胞系中YB-1蛋白的表达情况。将YB-1高表达质粒和siRNAs瞬时转染至KYSE450和YES2细胞系中,分别检测其mRNA及蛋白的变化量;利用Transwell检测YB-1蛋白对食管癌细胞侵袭迁移的影响;利用克隆形成及x CELLigence Real-time Cell Analyzer(RTCA)-MP系统检测YB-1蛋白对细胞克隆形成及细胞增殖的影响。结果选取KYSE450和YES2作为实验对象,结果表明高表达YB-1可促进食管癌细胞的增殖,增强克隆形成能力,促进食管癌细胞的侵袭和迁移;敲降YB-1则结果相反。结论YB-1蛋白影响食管癌细胞的恶性表型,具有促癌的作用。

YB-1蛋白在恶性肿瘤发生发展中的作用

Y盒结合蛋白1(YB-1)普遍存在于原核和真核生物细胞中,是一种DNA/RNA结合蛋白,结构上包含一个高度保守的冷休克结构域(cold shock domain,CSD),能够与目的基因启动子和增强子内部的Y-box序列(CTGAT TGG CCA A)特异性结合[1]。近年来,人们对YB-1蛋白在恶性肿瘤发生发展及预后中的研究越来越深入,已成为恶性肿瘤研究中的热点之一。

YB-1蛋白在肝癌细胞的表达部位及其意义

目的探讨YB-1蛋白在肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）组织、2种肝癌细胞株、正常肝细胞株中的表达及其与肝癌患者临床参数的关系。方法采用免疫组化检测YB-1蛋白在58例HCC组织及相应例癌旁组织、20例正常肝组织中的表达；用Westernblot法检测上述HCC组织、癌旁组织、正常肝组织及肝癌细胞株QGY-7701、SMMC-7721、正常肝细胞株LO2中核移位YB-1蛋白表达。结果免疫组化显示在HCC组织，YB-1蛋白主要表达于癌细胞胞浆，其阳性率（72．4％，42／58）明显高于癌旁（41．4％，24／58及正常肝组织（35．0％，7／2）（P〈0．05）。其中18例（31．0％，18／58）HCC组织伴有明显YB-1核阳性表达，且核表达与HCC病理分级、门静脉癌栓、肿瘤大小相关（P〈0．05）。Westernblot检测同样证实核移位的YB-1蛋白在肝癌组织（0．474±0．107）显著高于癌旁组织及正常肝组织（P〈0．05）。核移位的YB-1蛋白在2种肝癌细胞株中均高于正常肝细胞株（P〈0．05），其差异较组织更为明显。结论YB-1蛋白在HCC中高表达及核移位可能促进了肝癌的发生发展，有可能成为肝癌治疗的新靶点。

YB-1蛋白在大鼠系膜增殖性肾小球肾炎及体外培养大鼠肾小球系膜细胞中的表达及其意义

肾小球系膜细胞增殖是系膜增殖性肾小球肾炎（MsPGN）的常见病理特征，活化后的系膜细胞可分泌多种细胞因子，导致系膜细胞增殖及细胞外基质增生。YB-1可作为细胞周期时期专一性转录因子，通过促进cyclinA、cyclinB1基因的表达来控制细胞增殖进程，提示YB-1在细胞增殖中可能起重要作用：本研究通过建立MsPGN模型和体外培养系膜细胞增殖模型，在整体和细胞水平观察YB-1表达与系膜细胞增殖，ERK信号通路的关系：

非小细胞肺癌中YB-1蛋白的表达及临床意义

[目的]探讨YB-1蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,及其与NSCLC发生及生物学行为的相关性。[方法]采用链霉菌抗生物素蛋白—过氧化酶免疫组织化学方法检测28例正常肺组织和63例NSCLC患者肺癌组织标本中YB-1蛋白的表达情况,并分析其与临床病理特征的关系。[结果]YB-1蛋白在正常肺组织细胞质和细胞核中均为阴性表达;在63例NSCLC患者中,所有的细胞质都有YB-1蛋白表达;而细胞核只有31例表达,阳性率为49.2%。YB-1蛋白表达与病理类型、临床分期及淋巴结转移相关(P<0.05),而与分化程度、性别及年龄无相关性(P>0.05)。[结论]YB-1蛋白在NSCLC的发生、发展中起重要作用,检测YB-1蛋白有助于对NSCLC患者的诊断、淋巴结转移和预后判断。

YB-1蛋白与肿瘤

肿瘤是一种细胞周期性疾病。人类YB-1（Y box-binding protein-1）蛋白作为细胞周期重要的正向调控因子和肿瘤细胞化疗耐药调控因子，已逐渐成为国外肿瘤研究的热点。人类YB-1蛋白能特异地出现于肿瘤组织中，癌组织早期即出现人类YB-1蛋白的表达异常。作为DNA结合蛋白家族的成员之一的YB-1蛋白，通过捆绑Y-box序列5’-CTGATTGG-3’来调节多药耐药相关基因1（MDRI），DNA聚合酶α，表皮生长因子受体（EGFR），细胞周期蛋白cyclin A和cyclin B1等基因的表达。本文就其在人类肿瘤中的作用作一综述。

新城疫病毒调控宿主YB-1蛋白的初步研究

为了揭示YB-1蛋白在新城疫病毒(NDV)感染中的作用,对NDV感染细胞中YB-1表达水平以及亚细胞定位的变化进行了初步探索。利用RT-PCR技术,从鸡胚成纤维细胞中扩增了鸡源YB-1蛋白基因,序列分析结果显示其与其他物种YB-1有较高的相似性,与人YB-1的核苷酸和氨基酸相似性分别为88.3%和78.9%。随后利用间接免疫荧光技术检测了感染NDV强毒株Herts/33的He La和DF-1细胞中内源性YB-1蛋白的亚细胞定位变化,用q RT-PCR方法检测了YB-1 m RNA表达水平,通过Western-blot检测了YB-1蛋白水平的时相变化。结果显示,He La细胞中YB-1主要存在于细胞质,而禽源DF-1细胞YB-1集中在细胞核内;感染NDV后,两种细胞中的YB-1蛋白均在细胞质内呈现颗粒化聚集,同时在NDV感染后期He La细胞中YB-1蛋白出现少量降解。该研究初步揭示了NDV感染过程中YB-1蛋白的迁移现象,推测与NDV的复制过程相关,其具体的作用机制以及对NDV复制的影响尚待更深入的研究。

YB-1蛋白在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义

目的研究YB-1蛋白在宫颈鳞状细胞癌发生发展中的作用及其意义。方法采用免疫组织化学检测YB-1蛋白在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ级、CINⅡ~Ⅲ级、宫颈鳞状细胞癌(SCC)中的表达情况,分析YB-1蛋白的表达于SCC各临床病理因素的相关性。结果免疫组织化学结果显示YB-1蛋白主要表达于细胞核,部分表达与细胞质。YB-1蛋白在慢性宫颈炎中无表达,在CINⅠ级、CINⅡ~Ⅲ级、SCC中表达逐渐升高。YB-1蛋白在4组宫颈组织中的表达差异有统计学意义(P<0.05)。其中,慢性宫颈炎组、CINⅠ级组、CINⅡ~Ⅲ级组分别与SCC组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。YB-1蛋白的表达与宫颈病变程度之间呈正相关(P<0.05)。YB-1蛋白的表达在SCC患者各临床病理学特征间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 YB-1蛋白量的变化可能与SCC的发生发展密切相关。

原代培养过程中壳聚糖衍生物对CTCF/YB-1/C-myc和p53蛋白表达的影响

成功建立了人增生性瘢痕细胞和正常皮肤成纤维细胞的原代培养,并利用热休克蛋白(HSP47)和成纤维细胞特异蛋白(FSP)标记物进行了鉴定。研究发现,经过壳聚糖衍生物处理,人增生性瘢痕成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞在培养中均出现了不同类型的蛋白表达。多功能转录因子蛋白(CTCF)在壳聚糖衍生物处理的增生性瘢痕成纤维细胞中出现表达上调;在聚糖衍生物处理的正常皮肤成纤维细胞中数量无变化。YB-1结合蛋白在经壳聚糖处理的正常皮肤成纤维细胞与人增生性瘢痕细胞中的表达几乎无异,但在未经壳聚糖处理的细胞中表达不同。C-MYC和P53蛋白在壳聚糖衍生物处理的增生性瘢痕纤维细胞中表达上调,但在正常皮肤成纤维细胞中,无论是否经过壳聚糖衍生物处理,这两种蛋白都没有表达。上述4种蛋白在人增生性瘢痕细胞和正常皮肤成纤维细胞中表现出不同的表达方式,这种新型壳聚糖衍生物可能在控制人增生性瘢痕细胞和正常皮肤成纤维细胞生长和增殖过程中起着重要作用。这些蛋白因子的表达机制目前还不是完全清楚,有待于进一步研究。

YB-1、ICAM-1子宫内膜癌中的表达特征及临床意义分析

目的:探究YB-1、ICAM-1子宫内膜癌中的表达特征及临床意义。方法:选取40例子宫内膜癌患者,视为A组,选取同期40例子宫内膜复杂型增生伴非典型增生患者,视为B组,选取同期40例子宫内膜单纯型增生患者,视为C组,选取同期40例体检正常女性,视为D组,对所有试验者均使用免疫组化链霉素抗生素蛋白-过氧化物法进行检测,对比三组的细胞间黏附分子-1(ICAM-1)与YB-1的表达,进行统计学分析。结果:比对三组患者的阳性检测率,A组ICAM-1阳性率、YB-1阳性率均高于B组、C组与D组,组间差异呈P<0.05。B组、C组ICAM-1阳性率、YB-1阳性明显高于D组,组间差异呈P<0.05。运用Spearman相关分析,对子宫内膜癌患者中ICAM-1、YB-1的表达进行分析,统计学处理后,两者相关系数r=0.890,p=0.00,0,表示存在正相关。结论:YB-1、ICAM-1在子宫内膜癌患者中具有较高的表达,且两者之间呈正相关,可用于恶性肿瘤的诊断指标,对其治疗与预后具有重要意义。

真核表达的人Y盒结合蛋白1(YB-1)促进人HepG2肝癌细胞的增殖和迁移

目的构建带有FLAG标签的Y盒结合蛋白1(YB-1)真核表达载体,转染至HepG2肝癌细胞探究YB-1对肝癌细胞增殖和迁移的影响。方法以人卵巢文库为模板并采用PCR扩增出YB-1基因片段,经双酶切后与pcDNA3.0-FLAG载体连接,构建pcDNA3.0-FLAG-YB-1真核表达载体;将其转染至HepG2细胞,通过Western blot法验证YB-1在HepG2细胞的表达;CCK-8法和集落形成实验验证YB-1对HepG2细胞生长的影响;划痕实验验证YB-1对HepG2细胞迁移的影响。结果成功构建出pcDNA3.0-FLAG-YB-1真核重组表达载体,且能在HepG2细胞中表达YB-1蛋白;YB-1能够促进HepG2细胞的增殖和迁移。结论YB-1促进HepG2细胞的增殖和迁移。

YB-1与肿瘤发生及治疗

Y-box结合蛋白(Y-box binding protein,YB)是一类广泛存在于从低等到高等多种生物中的蛋白质家族,在体内行使多种生物学功能.大量研究表明,YB-1作为该家族成员之一,与许多重要的生物大分子存在密切联系,并对细胞、组织和机体的生理机能产生重大影响.更为重要的是,YB-1在多种疾病,尤其是恶性肿瘤的发生和发展中也起到十分关键的作用,对癌细胞表型的维持及肿瘤多药耐药性(MDR)的产生具有全方位的影响.以YB-1为作用靶点的新型肿瘤治疗策略可望有效控制癌症患者病情恶化,改善耐药状况.现就对YB-1与肿瘤发生和发展之间关系的研究进展,以及针对YB-1治疗策略的制定作一评述和展望.

酵母双杂交文库筛选及hTRIP15与Y盒结合蛋白-1相互作用的探讨

为探讨甲状腺素受体相互作用蛋白(hTRIP15)是否与其他核蛋白发生相互作用,以hTRIP15作为诱饵,用酵母双杂交技术筛选人肝cDNA文库,在高严格度选择培养基(SD-Trp-Leu-Ade-His)上长出的克隆773个,再经β-gal表达和PCR等技术进一步缩小范围,经Blastn搜寻最终显示2个重复克隆编码一种共调节辅因子——Y盒结合蛋白-1(YB-1).将插入序列与全长YB-1比较发现进入ORF内230bp,插入序列编码82aa,该蛋白称为YB-1-p,经蛋白体外翻译及GST-pulldown试验证实YB-1-p与hTRIP15发生相互作用.提示hTRIP15可通过与YB-1相互作用,参与调控MHCII及TSH受体等甲状腺细胞重要基因表达.

宫颈癌及宫颈上皮内瘤变组织中Twist、YB-1基因表达及与上皮间质转化的相关性分析

目的:研究宫颈癌及宫颈上皮内瘤变组织中Twist及Y-box结合蛋白1(YB-1)基因表达及与上皮间质转化的相关性。方法:收集正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变组织、宫颈癌组织进行研究,采用酶联免疫吸附试剂盒测定宫颈组织中Twist、YB-1、E-cadherin、β-catenin、N-cadherin、Vimentin的含量,采用免疫组化方法测定宫颈组织中Twist、YB-1的表达量。结果:宫颈癌组织和宫颈上皮内瘤变组织中Twist、YB-1的含量、细胞阳性率、免疫组化评分以及N-cadherin、Vimentin的含量显著高于正常宫颈组织(P<0.05),E-cadherin和β-catenin的含量低于正常宫颈组织(P<0.05);宫颈癌组织中Twist、YB-1的含量、细胞阳性率、免疫组化评分以及N-cadherin、Vimentin显著高于宫颈上皮内瘤变组织(P<0.05),E-cadherin和β-catenin的含量低于宫颈上皮内瘤变组织(P<0.05);宫颈癌组织中Twist、YB-1的表达量越高,E-cadherin和β-catenin的含量越低(P<0.05),N-cadherin和Vimentin的含量越高(P<0.05)。结论:Twist及YB-1基因过表达能够通过促进上皮间质转化来参与宫颈癌及宫颈上皮内瘤变的发生。

磷酸化Y盒结合蛋白1的抗体制备及其辅助诊断原发性肝癌合并肺转移的临床价值

目的制备Y盒结合蛋白1磷酸化抗体（pAb／YB-1S102）;探讨腹水中磷酸化YB-1（pYB-1）作为标志物辅助诊断原发性肝癌合并肺转移的临床价值。方法通过生物信息学预测并化学合成102位丝氨酸磷酸化YB-1多肽，耦联载体蛋白后免疫家兔；protein A亲和层析法纯化抗血清pAb／YB-1S102，并验证其特异性。收集109例患者腹水并富集腹水中pYB-1，其中原发性肝细胞癌（HCC）36例，HCC合并肺转移44例，肝硬化29例l采用Westemblot定性检测腹水中pYB-1，并对定性结果进行回归判别与受试者工作特征（ROC）曲线分析。计数资料采用x2检验。结果酶联免疫吸附法与十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示制备的pAb／YB-1渤观效价≥1：1×106，且纯度较高。Westernblot结果证实pAb／YB-1S102能特异性识别内源性pYB-1S102。肝硬化患者腹水中未检出pYB-1S102,HCC合并肺转移患者腹水pYB-1勖02阳性率（77．3％）显著高于HCC（30．6%，X2=11．69，P〈0．01）；回归分析与ROC曲线结果表明pYB-1乳衄辅助诊断HCC合并肺转移的灵敏度为77．3％，符合率为73．8％（X2=17．56，P〈0．01）。结论成功制备可识别内源性pYB-1的抗体pAb／YB-1S102通过定性检测腹水pYB-1，可鉴别诊断HCC合并肺转移。