姜黄素调控Yes相关蛋白1对子宫内膜癌Warburg效应及生物学行为的影响

目的:观察姜黄素调控Yes相关蛋白1 (YAP1)对子宫内膜癌糖酵解Warburg效应及生物学行为的影响。方法:将HEC-1B细胞分为对照组、NC-YAP1组、si-YAP1组及低、中、高剂量组。对照组不做任何处理,NC-YAP1组转染NC-YAP1质粒,si-YAP1组转染si-YAP1质粒,低、中、高剂量组细胞分别用20、40、80μmol/L的姜黄素处理。试剂盒检测各组细胞葡萄糖消耗量及乳酸含量;CCK-8法检测各组细胞增殖能力;流式细胞术检测各组细胞周期与凋亡;划痕法检测各组细胞迁移能力;Transwell法检测各组细胞侵袭能力。蛋白质印迹(Western blot)法检测YAP1、乳酸脱氢酶-A (LDH-A)、己糖激酶2 (HK2)、丙酮酸激酶2 (PKM2)蛋白表达。结果:与对照组比较,NC-YAP1组YAP1蛋白相对表达水平、乳酸含量及葡萄糖消耗量、LDH-A、HK2、PKM2蛋白水平、细胞增殖抑制率、G0/G1期比例及S期比例、细胞凋亡率、划痕愈合率、细胞侵袭抑制率差异均无统计学意义(P>0.05),si-YAP1组及低、中、高剂量组YAP1蛋白相对表达水平、葡萄糖消耗量及乳酸含量、LDH-A、HK2、PKM2蛋白水平、S期比例、划痕愈合率均降低(P<0.05),细胞增殖抑制率、G0/G1期比例、细胞凋亡率、细胞侵袭抑制率均升高(P<0.05)。与NC-YAP1组比较,siYAP1组及低、中、高剂量组细胞YAP1蛋白相对表达水平、葡萄糖消耗量及乳酸含量、LDH-A、HK2、PKM2蛋白水平、S期比例、划痕愈合率均降低(P<0.05),细胞增殖抑制率、G0/G1期比例、细胞凋亡率细胞侵袭抑制率均升高(P<0.05),且低、中、高剂量组上述指标均呈剂量依赖性(P<0.05)。与si-YAP1组比较,低、中剂量组细胞中YAP1蛋白相对表达水平均增加(P<0.05),而高剂量组差异无统计学意义(P>0.05);低剂量组葡萄糖消耗量及乳酸分泌量、LDH-A、HK2、PKM2蛋白水平、S期比例、划痕愈合率均增加(P<0.05),细胞增殖抑制率、G0/G1期比例、细胞凋亡率、细胞侵袭抑制率均降低(P<0.05),高剂量组葡萄糖消耗量及乳酸分泌量、LDH-A、HK2、PKM2蛋白水平、S期比例、划痕愈合率均降低(P<0.05),细胞增殖抑制率、G0/G1期比例、细胞凋亡率、细胞侵袭抑制率增加(P<0.05),而中剂量组乳酸含量及葡萄糖消耗量、LDH-A、HK2、PKM2蛋白水平、细胞增殖抑制率、G0/G1期比例及S期比例、细胞凋亡率、划痕愈合率、细胞侵袭抑制率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:姜黄素可能通过抑制YAP1表达抑制子宫内膜癌细胞的Warburg效应、增殖、迁移及侵袭等恶性行为。

基于非靶向代谢组学技术探讨Yes相关蛋白1改善马兜铃酸I诱导小鼠肝损伤的机制

目的基于非靶向代谢组学技术探讨Yes相关蛋白1(YAP1)改善马兜铃酸I(Aristolochic acid I,AAI)诱导小鼠肝损伤的机制。方法随机选取8只3周龄雄性肝细胞特异性Yap1基因敲除(基因型为Yap1^(Flox/Flox),Albumin-Cre,简称Yap1^(LKO))小鼠作为Yap1^(LKO)+AAI组,8只Yap1Flox对照小鼠作为Yap1^(Flox)+AAI组。2组小鼠均按照2.5 mg·kg^(-1)·d^(-1)剂量腹腔注射AAI,连续14 d。采用鼠尾PCR法鉴定基因型;微板法测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性;HE染色法观察肝脏组织病理变化;免疫组织化学法测定肝组织中YAP1蛋白表达情况。采用非靶向代谢组学方法分析肝脏组织差异代谢物,利用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用技术分析样品,通过主成分分析(PCA)、偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)筛选差异代谢物,利用HMDB数据库、METLIN数据库对代谢物进行鉴定,通过KEGG数据库对差异代谢物进行通路富集分析。结果(1)AAI诱导14 d,Yap1^(LKO)小鼠的体质量增长低于Yap1^(Flox)小鼠,但差异无统计学意义(P>0.05)。在第14天,与Yap1^(Flox)+AAI组比较,Yap1^(LKO)+AAI组小鼠血清中的ALT、AST酶活性明显升高(P<0.05),肝脏组织病理损伤明显加重。Yap1^(Flox)小鼠肝脏有YAP1蛋白阳性表达,而Yap1^(LKO)小鼠无YAP1蛋白阳性表达。(2)通过代谢组学分析共筛选出139种显著变化(VIP>1且P<0.05)的差异代谢物,与Yap1^(LKO)+AAI组小鼠相比,Yap1Flox+AAI组小鼠的62种肝脏代谢物上调,包括胆碱、牛磺酸、亚牛磺酸、α-亚麻酸、桐油酸、鹅去氧胆酸等;77种代谢物下调,包括甘油磷酸胆碱、L-磷脂酰胆碱、L-谷氨酰胺、L-丝氨酸、L-谷胱甘肽、5-甲硫腺、苯丙氨酸、6-磷酸葡萄糖、乳酸、尿酸苷等。KEGG富集通路主要有胆碱代谢、甘油磷脂代谢、胰岛素抵抗、谷胱甘肽代谢等。结论肝细胞特异性Yap1基因敲除加重了AAI诱导的小鼠肝脏损伤,YAP1通过上调胆碱、牛磺酸等不饱和脂肪酸,参与调控胆碱代谢、甘油磷脂代谢等,从而改善AAI诱导的小鼠肝损伤。

情志应激激素受体调控Yes相关蛋白1影响乳腺癌细胞上皮间充质转化进程研究

目的:探究情志应激激素受体(GR)与Yes相关蛋白1(YAP1)对乳腺癌MCF-7细胞转移的调控机制,以期为乳腺癌的治疗提供新思路。方法:通过免疫组化实验分析乳腺癌组织和癌旁组织GR和YAP1的表达;将MCF-7细胞分为:si NC组、si GR组和si YAP1组,分别通过MTT实验、Transwell实验、细胞划痕实验和流式细胞术分析MCF-7细胞的增殖、侵袭、迁移能力及凋亡率,通过蛋白免疫印迹实验分析细胞GR和YAP1的表达水平。结果:与癌旁正常组织比较,乳腺癌组织YAP1与GR的表达水平升高。与si NC组比较,si GR组和si YAP1组的MCF-7细胞增殖能力、侵袭能力、迁移能力显著降低,凋亡率增加(P<0.05)。与si NC组比较,si GR组的MCF-7细胞的YAP1和GR表达水平降低(P<0.05),si YAP1组的MCF-7细胞的YAP1表达水平降低(P<0.05)。结论:乳腺癌患者的癌组织中YAP1与GR的表达水平升高。GR被激活后,通过调控细胞内的YAP1通路影响MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭能力以及凋亡率,进而导致乳腺癌MCF-7细胞转移,靶向调节YAP1抑制乳腺癌上皮间充质转化(EMT)发生可为乳腺癌患者提供新的治疗策略。

Yes相关蛋白1和散乱蛋白2对Luminal型乳腺癌预后的影响

目的研究Yes相关蛋白1(YAP1)和散乱蛋白2(DVL2)在Luminal型乳腺癌组织及癌旁组织中的表达情况,分析其与临床病理特征及预后的关系。方法采用Real-Time PCR和免疫组化方法检测202例Luminal型乳腺癌组织中YAP1、DVL2 mRNA和蛋白表达水平,分析YAP1和DVL2与乳腺癌患者临床病理特征及预后的关系;采用Cox回归分析乳腺癌患者无瘤生存时间的影响因素;Kaplan-Meier生存曲线分析乳腺癌患者YAP1、DVL2表达水平与无瘤生存时间的关系。结果DVL2蛋白的表达水平与乳腺癌患者的TNM分期、有无神经侵犯及癌栓有关。YAP1与腋窝淋巴结、TNM分期、有无神经侵犯及癌栓有关。YAP1 mRNA与DVL2 mRNA表达呈正相关,Cox回归分析结果显示DVL2和YAP1是乳腺癌患者无瘤生存时间的独立影响因素。Kaplan-Meier生存曲线显示DVL2高表达的乳腺癌患者无瘤生存时间较短,而YAP1高表达的乳腺癌患者的无瘤生存时间较长,联合DVL2和YAP1蛋白表达水平分析显示DVL2(-)YAP1(+)组中Luminal型乳腺癌患者的无瘤生存时间明显长于其他3组。结论DVL2和YAP1在Luminal型乳腺癌组织及癌旁正常组织中有不同程度的表达,与乳腺癌患者的某些临床病理特征及无瘤生存时间有关,二者在乳腺癌组织中的表达水平有相关性。

缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/Yes相关蛋白(YAP)在非酒精性脂肪性肝病中的调控作用

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是目前最为常见的慢性肝病,并与多种代谢性疾病密切相关,如2型糖尿病、胰岛素抵抗,以及与高血压和血脂异常相关的心脑血管并发症。NAFLD病因和病理机制复杂,微环境因素和基因表达调节异常存在于疾病进展的各个阶段,并通过累加效应促进疾病发展。缺氧诱导因子(HIF)是核转录因子、Yes相关蛋白(YAP)是转录辅助调节因子,二者通过调节肝脂质沉积与氧化应激,促进炎性因子释放,与NAFLD进展密切相关。本文对HIF-1α/YAP在NAFLD及其相关代谢性疾病进展中的作用进行综述,为探索NAFLD疾病进展过程中的相关治疗靶点提供理论依据。

circTLK1通过miR-26a-5p/YES1轴减轻小鼠心肌缺血/再灌注损伤

目的探讨环状RNA凌乱样激酶1(circTLK1)在心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中的作用和潜在机制。方法48只C57BL/6小鼠分为假手术组(Sham组)、MIRI组、sh-NC组、sh-circTLK1组、sh-circTLK1+antagomir-NC组、sh-circTLK1+antagomir-miR-26a-5p组,每组8只;采用结扎左冠状动脉前降支(LAD)建立MIRI小鼠模型。超声心动图检测小鼠左心室射血分数(EF)、左心室缩短分数(FS)、左心室舒张末期内径(LVEDD)和收缩末期内径(LVESD)以评估心脏功能,ELISA检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CKMB)水平,苏木精-伊红(HE)染色检测心肌组织病理学变化,TUNEL染色检测心肌细胞凋亡,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测心肌组织中circTLK1、miR-26a-5p、YES1 mRNA和蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验、RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)验证circTLK1/YES1和miR-26a-5p之间的相互作用。结果与Sham组相比,MIRI组小鼠EF、FS、心肌组织miR-26a-5p水平显著降低,LVEDD、LVESD、血清LDH、CK-MB活性和cTnI水平、心肌细胞凋亡率、心肌组织circTLK1、YES1 mRNA和蛋白水平显著升高(均P<0.05),心肌细胞排列紊乱,细胞间质有炎性细胞浸润;circTLK1敲低可显著上调miR-26a-5p,抑制YES1表达,改善上述指标变化(均P<0.05),减轻心肌损伤;抑制miR-26a-5p可通过上调YES1,显著减弱circTLK1敲低对MIRI的保护作用。双荧光素酶报告基因实验和RIP证实了circTLK1和miR-26a-5p之间的直接相互作用,YES1是miR-26a-5p的靶标。结论敲低circTLK1可能通过调节miR-26a-5p/YES1轴在MIRI中发挥保护作用,circTLK1可能是MIRI的潜在治疗靶点。

PKCι在宫颈癌YAP1信号通路中的作用及与预后的关系

目的 探讨蛋白激酶Cι(protein kinase Cι,PKCι/PRKCI)在宫颈癌YAP1信号通路中的作用及其与预后的关系。方法 选择2013年1月至2015年1月全子宫术后宫颈正常组织(normal cervical tissue, NCT)、宫颈低级别鳞状上皮内病变组织(low-grade squamous intraepithelial lesions, LSIL)、宫颈高级别鳞状上皮内病变组织(high-grade squamous intraepithelial lesions, HSIL)以及早期宫颈鳞状细胞癌组织(squamous cell carcinoma, SCC),每组80例。采用免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)法检测4组组织中PKCι以及YAP1表达水平并进行相关性、临床病理以及预后分析。将PRKCI基因过表达转染人宫颈癌SiHa细胞系,通过倒置荧光显微镜观察细胞内荧光数量及强度评判转染效率,PRKCI抑制剂aurothiomalate处理,采用CCK-8检测存活率,Transwell实验检测细胞迁移。通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-time quantitative reversetranscription polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测PRKCI基因表达,并予以转录组测序以及qRT-PCR验证。结果 NCT、LSIL、HSIL以及SCC患者PKCι、YAP1阳性率差异有统计学意义(P<0.05),且级别越高,PKCι、YAP1阳性率越高(P<0.05)。宫颈病变级别与PKCι以及YAP1阳性表达均呈正相关(P<0.05)。在SCC中PKCι以及YAP1阳性表达相互之间的均呈正相关(P<0.05)。PKCι以及YAP1阳性表达在SCC不同的分化程度以及有无脉管瘤栓之间均有统计学差异(P<0.05)。SCC患者生存预后分析中单因素分析显示,各蛋白表达、分化程度、淋巴结是否转移以及脉管瘤栓情况是影响总生存预后的独立因素(P<0.05);SCC患者各蛋白表达以及淋巴结是否转移是影响患者5年生存率的独立因素,其中PKCι、YAP1蛋白高表达以及淋巴结转移为危险因素(P<0.05)。SiHa细胞中PKCι转染组PKCιmRNA表达水平均明显升高,与空载脂质体组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 宫颈病变患者常伴有PKCι以及YAP1表达异常,相互之间可能存在协同作用,影响SCC的发生发展及其预后,促进SCC细胞增殖以及迁移,为SCC的发病机制研究及其诊治判断预后提供可能的依据。

子宫颈癌病理分级与微血管密度、Yes相关蛋白1的相关性研究

目的:探讨子宫颈癌病理分级与微血管密度(MVD)、Yes相关蛋白1(YAP1)的相关性。方法:选择2019年3月-2022年6月临沂市第三人民医院收治的子宫颈癌患者53例为对象,常规采集病灶组织及癌旁组织(距离病灶≥3 cm)。根据子宫颈癌病理分级分为高分化组、中分化组和低分化组;采用免疫组织化学法测定不同组织中、不同病理分级下MVD、YAP1阳性率;采用Spearman相关系数法对子宫颈癌病理分级与MVD、YAP1阳性率进行分析。结果:子宫颈癌病灶组织中MVD、YAP1阳性率均高于癌旁组织(P<0.05);免疫组化染色结果显示,子宫颈癌病灶组织YAP1表达于细胞质与细胞核;而MVD表达于细胞质,呈棕褐色、棕黄色,着色度较高;而癌旁组织中阳性染色细胞较少,MVD、YAP1着色程度较低;低分化组MVD、YAP1阳性率均高于高分化组与中分化组(P<0.05);中分化组MVD、YAP1阳性率均高于高分化组(P<0.05);Spearman相关系数法结果显示,子宫颈癌患者病理分级与MVD、YAP1表达均呈负相关(rs=-0.692、-0.452)。结论:MVD、YAP1在子宫颈癌病灶组织中呈阳性高表达,其高表达水平与病理分级存在一定相关性,能为临床诊疗提供新方法。

IKBKE、YAP1和TEAD2在结直肠癌中的表达及临床意义

目的探讨核因子κb激酶亚基ε的抑制剂(IKBKE)、Yes相关蛋白1(YAP1)和转录增强结构域转录因子2(TEAD2)在结直肠癌(CRC)组织中的表达及其临床意义。方法收集2016年1月至2017年12月在蚌埠医科大学第一附属医院手术切除的142例CRC组织及对应癌旁组织,采用免疫组化法检测标本中IKBKE、YAP1和TEAD2的表达情况。分析3种蛋白在CRC组织中表达的相关性,分析蛋白阳性率与患者临床病理参数及预后的关系;绘制Kaplan-Meier生存曲线,比较这些蛋白不同表达情况患者的生存差异。采用Cox回归分析影响患者预后的危险因素。结果CRC组织中IKBKE、YAP1和TEAD2的阳性率均显著高于癌旁组织(65.5%比9.9%,73.9%比14.1%,66.9%比8.5%,均P<0.05)。IKBKE的表达与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、肿瘤-淋巴结-远处转移(TNM)分期有关,YAP1和TEAD2的表达均与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移及TNM分期有关。Spearman秩相关分析显示CRC组织中IKBKE与YAP1、TEAD2表达均呈正相关(均P<0.01)。Kaplan-Meier生存分析显示IKBKE、YAP1和TEAD2阳性表达组的总生存率降低。Cox回归分析显示IKBKE、YAP1和TEAD2阳性、肿瘤分化程度高、TNM分期高是CRC患者预后的独立危险因素。结论CRC中IKBKE、YAP1和TEAD2阳性表达与肿瘤的分化程度、TNM分期、转移等因素有关,可能成为CRC治疗的潜在靶点;检测这3个蛋白的表达有助于评估预后。

沉默Yes相关蛋白1对人非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的研究Yes相关蛋白1(YAP1)在非小细胞肺癌细胞增殖、细胞周期、迁移、侵袭中的作用。方法通过慢病毒介导的小干扰RNA靶向抑制人非小细胞肺癌细胞株A549中YAP1基因的表达,采用CCK-8法、流式细胞术分别检测沉默YAP1对A549细胞增殖及凋亡周期的影响,Transwell实验观察沉默YAP1对A549细胞迁移、侵袭能力的影响。结果沉默YAP1后,A549细胞YAP1mRNA和蛋白表达均下调(P<0.01),CCK-8实验结果显示沉默YAP1抑制A549的增殖、增加G0/G1期的细胞比例(P<0.01),Transwell实验结果示沉默YAP1抑制A549细胞的迁移、侵袭(P<0.01)。结论沉默YAP1基因对非小细胞肺癌细胞的恶性生物学特征具有抑制作用,YAP1可能成为肺癌治疗的潜在靶标。

Yes相关蛋白1在乳腺癌中的表达及临床意义

目的探讨yes相关蛋白1(YAP1)在正常乳腺组织及乳腺癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学Envision法检测133例乳腺浸润性导管癌,37例乳腺导管原位癌及47例癌旁组织中YAP1的表达。结果 (1)YAP1在乳腺癌旁组织中的阳性率(81%)明显高于乳腺癌组织中的阳性率(46%)(P<0.05);(2)YAP1在乳腺导管原位癌中的阳性率为43%,与乳腺浸润性导管癌之间的差异无统计学意义(P=0.925);(3)YAP1阳性表达与患者年龄、肿瘤大小及淋巴结转移转移无关,而与乳腺癌的分子分型有关(P<0.05)。结论在乳腺癌中YAP1可能作为抑癌基因发挥作用,YAP1的表达对乳腺癌的治疗有一定意义。

Yes相关转录调节因子1、程序性死亡受体1在上皮性卵巢癌中的表达及其与肿瘤侵袭程度的相关性分析

目的探讨Yes相关转录调节因子1(YAP1)、程序性死亡受体1(PD-1)在上皮性卵巢癌中的表达及与肿瘤侵袭程度的相关性。方法收集106例上皮性卵巢癌患者的临床资料及上皮性卵巢癌组织,另收集接受手术治疗的62例生殖系统良性疾病患者的正常卵巢组织。比较上皮性卵巢癌组织及正常卵巢组织中YAP1、PD-1表达情况及不同临床特征上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌组织中YAP1、PD-1表达情况,并采用Pearson相关分析法分析上皮性卵巢癌组织中YAP1、PD-1表达相关性及与肿瘤侵袭程度的相关性。结果上皮性卵巢癌组织中YAP1、PD-1阳性表达率均明显高于正常卵巢组织,差异均有统计学意义(P<0.01)。国际妇产科联盟(FIGO)分期为Ⅲ~Ⅳ期、分化程度为G_(1)级、有淋巴结转移、浸润深度为T_(3~4)期上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌组织中YAP1阳性表达率分别明显高于FIGO分期为Ⅰ~Ⅱ期、分化程度为G_(2~3)级、无淋巴结转移、浸润深度为T_(1~2)期患者,差异均有统计学意义(P<0.01);FIGO分期为Ⅲ~Ⅳ期、浆液性肿瘤、浸润深度为T_(3~4)期上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌组织中PD-1阳性表达率分别明显高于FIGO分期为Ⅰ~Ⅱ期、非浆液性肿瘤、浸润深度为T_(1~2)期患者,差异均有统计学意义(P<0.01)。上皮性卵巢癌组织中YAP1、PD-1表达无相关性(r=1.175,P>0.05);但YAP1、PD-1与肿瘤侵袭程度均呈正相关(r=0.657、0.671,P﹤0.05)。结论上皮性卵巢癌中YAP1、PD-1呈异常表达,且与肿瘤浸润程度有关,可能参与了肿瘤细胞发生、发展,可作为临床诊断上皮性卵巢癌的辅助诊断指标。

YAP1、PD-L1及MMR蛋白在消化道神经内分泌癌中的表达及意义

目的探讨Yes相关蛋白1(YAP1)、程序性死亡-配体1(PD-L1)及错配修复(MMR)蛋白在消化道神经内分泌癌组织中的表达及临床意义。方法应用组织芯片及免疫组化法,检测122例消化道神经内分泌癌组织中YAP1、PD-L1及MMR蛋白的表达情况,并结合消化道神经内分泌癌不同临床病理参数和患者预后进行比较分析。结果YAP1核、YAP1质、PD-L1及MMR蛋白缺失的阳性率分别为27.1%、35.3%、22.1%、2.5%。YAP1在神经内分泌癌组织中的表达显著高于正常组织或神经内分泌瘤(均P<0.05),YAP1核表达与脉管浸润、淋巴结转移及TNM分期呈显著正相关(均P<0.05)。PD-L1表达与临床病理特征无明显相关性(均P>0.05)。相关性分析显示YAP1核表达与PD-L1表达呈负相关(P<0.05)。生存分析未发现YAP1及PD-L1的预后意义。结论YAP1核表达可能与消化道神经内分泌癌的发生发展有关;消化道神经内分泌癌表达PD-L1及错配修复缺陷(dMMR);针对YAP1的靶向治疗及抗PD-1/PD-L1治疗可能成为消化道神经内分泌癌的潜在新疗法。

Yes相关蛋白1与肿瘤相关性的研究进展

转录辅激活因子Yes相关蛋白1(YAP1)作为Hippo信号通路下游的主要效应因子,在调控器官大小、促进组织再生和维持干细胞自我更新等方面发挥着重要作用。随着对YAP1研究的深入,发现YAP1在多种肿瘤组织中呈高表达状态,并可促进肿瘤的增殖、侵袭和转移。因此,YAP1有望成为肿瘤早期诊断的分子标志物及肿瘤治疗的潜在靶点。本文就YAP1的结构、生物学功能及其与肿瘤的相关性予以综述。

Yes相关蛋白、哺乳动物不育系20样激酶1、细胞周期蛋白D1在鼻咽癌中的表达及临床意义

目的探讨Yes相关蛋白(YAP)、哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)及细胞周期蛋白D1(CyclinD1)在鼻咽癌中的表达及与鼻咽癌临床病理特征的关系。方法应用免疫组织化学染色方法检测YAP、MST1、CyclinD1在鼻咽黏膜慢性炎组织和鼻咽癌组织中的表达。结果 YAP及CyclinD1在鼻咽癌组织中的表达均高于鼻咽黏膜慢性炎组织(P <0.05),MST1在鼻咽癌组织中的表达低于鼻咽黏膜慢性炎组织(P <0.05)。YAP、CyclinD1与病理分型相关(P <0.05),而MST1与病理分型无相关性(P>0.05);三者与患者的性别、年龄、生存时间、淋巴结转移、临床分期、远处转移、复发及生存状态无相关性(P>0.05)。在鼻咽癌组织内,YAP与CyclinD1、MST1与CyclinD1呈正相关(P <0.05),YAP与MST1无相关性(P>0.05)。结论 YAP和CyclinD1蛋白的高表达、MST1蛋白的低表达可能与鼻咽癌的发生、发展有关,三者有望成为治疗鼻咽癌的新靶点。

miR-205靶定YES1对肺癌细胞A549的增殖抑制作用

目的:利用实时定量RT-PCR技术和双荧光蛋白报告基因分析系统检测miR-205在肺癌组织及A549细胞系中的表达水平以及其直接靶基因YES1,探讨miR-205抑制肺癌细胞A549增殖的可能机制。方法:实时定量RT-PCR技术检测10例肺癌组织和10例癌旁正常肺组织中miR-205的表达水平;miR-205 mimics和control mimics分别转染A549细胞,利用细胞计数和集落形成实验检测转染后A549细胞的增殖情况。选取表达绿色荧光蛋白的质粒pcDNA3/EGFP,将YES1 3′UTR的一段特异性序列、YES1 3′UTR(miR-205互补位点)点突变后的序列分别插入该质粒中,构建YES1-3′UTR和mut-YES1-3′UTR的绿色荧光表达质粒。实验分为YES1-3′UTR、YES1-3′UTR与miR-205 mimics、YES1-3′UTR与control mimics、mut-YES1-3′UTR、mutYES1-3′UTR与miR-205 mimics和mut-YES1-3′UTR与control mimics共6组,均与表达红色荧光蛋白pDsRed2-N1共同转染肺癌细胞系A549,荧光分光光度计进行蛋白定性和定量检测。结果:与癌旁正常肺组织比较,miR-205在肺癌组织及A549细胞中表达水平降低(P<0.05);miR-205mimics转染组A549细胞增殖率明显低于转染control mimics对照组(P<0.05);YES1-3′UTR与miR-205mimics共转实验组荧光蛋白表达水平低于YES1-3′UTR与control mimics共转染组(P<0.01);YES1蛋白高表达组A549细胞细胞克隆形成数高于细胞对照组(P<0.05)。结论:miR-205可能通过靶定靶基因YES1抑制了肺癌细胞A549的增殖,提示miR-205和YES1有可能成为肿瘤生物治疗的新靶点。

微小RNA-141和Yes相关蛋白1在胃癌组织中的表达及其对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响

目的:探究微小RNA-141(miR-141)和Yes相关蛋白1(YAP1)在胃癌组织中的表达情况,同时分析它们对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。方法:选择行胃癌手术的40例患者为研究对象,取手术切除的胃癌组织及癌旁组织,采用荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-141表达,采用免疫组化检测YAP1表达。分析miR-14、YAP1表达与胃癌患者临床病理特征的相关性。分别使用miR-141和YAP1对胃癌SGC-7901细胞系进行干预,分析它们对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。结果:胃癌组织中miR-141表达水平低于癌旁组织,YAP1蛋白表达水平高于癌旁组织(均P<0.05)。miR-141表达水平与胃癌患者组织分化程度及TNM分期存在明显相关性(均P<0.05)。YAP1表达水平与胃癌患者TNM分期、肿瘤直径以及组织分化程度相关(均P<0.05)。在24、48、72 h三个时间点,与阴性对照组比较,转染miR-141模拟物后,胃癌SGC-7901细胞活力出现明显降低,而转染miR-141抑制剂后胃癌SGC-7901细胞活力出现明显升高(均P<0.05)。在24、48、72 h三个时间点,与阴性对照组比较,转染YAP1沉默物siRNA YAP1的胃癌SGC-7901细胞活力出现明显降低,细胞迁移和侵袭能力明显下降(均P<0.05)。结论:胃癌组织中miR-141低表达,YAP1高表达,且两者表达水平同胃癌SGC-7901细胞活性密切相关,可以考虑将miR-141和YAP1作为胃癌治疗的新靶点。

miR-133b靶向YES1抑制心肌缺血再灌注引起的心肌细胞凋亡和活性氧簇的积累

目的探究miR-133b对心肌缺血再灌注(I/R)诱导心肌细胞凋亡的作用及机制。方法体内实验,将大鼠随机分为4组:假手术组、模型组、转染腺病毒对照组、转染miR-133b腺病毒组,每组9只。在左心室心肌的6个随机点注射转染复合物后,利用左侧冠状动脉前降支打活结方法诱导心肌I/R。通过RT-qPCR检测miR-133b的表达水平,FDP-1 HRV和BRS分析系统测定心功能,酶联免疫吸附法测定血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和心肌肌钙蛋白I(CTnI)水平,HE染色观察心肌损伤,流式细胞术检测细胞凋亡,2,7-二氯荧光素双乙酸酯(DCFH-DA)探针测定ROS含量。体外实验,心肌H9C2细胞经缺氧/复氧(H/R)处理后,转染miR-NC或miR-133b mimic,RT-qPCR检测miR-133b的表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,DCFH-DA探针测定ROS含量;双荧光素酶报告实验验证靶向关系;转染pc-YES1或miR-133b mimic后,Western blot检测YES1的表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,DCFH-DA探针测定ROS含量。结果与I/R组相比,AdmiR-133b组大鼠心肌中miR-133b的表达显著上调,LVEDP、cTnI和CK-MB水平显著降低,LVSP、+dp/dt、-dp/dt、HR和CF水平显著升高,病理损伤显著减轻,心肌细胞凋亡和ROS积累显著减少(P<0.01)。与H/R组相比,miR-133b mimic组H9C2细胞的miR-133b表达显著上调,细胞凋亡和ROS积累显著减少(P<0.01)。miR-133b与YES1在3’UTR区存在靶向结合位点,共转染YES1 WT和miR-133b mimic可以显著降低荧光素酶活性(P<0.01)。miR-133b mimic组与H/R组相比H9C2细胞中YES1蛋白的表达显著下调(P<0.01)。共转染pc-YES1逆转miR-133b过表达对心肌细胞凋亡和ROS积累的作用。结论无论是在体内还是体外,miR-133b靶向YES1抑制I/R引起的心肌细胞凋亡和ROS的积累,从而减轻心肌I/R损伤。

Yes相关蛋白1在食管癌发生发展及治疗中的作用研究进展

食管癌是我国高发肿瘤,患者5年生存率低,亟需寻找新的治疗靶点。Yes相关蛋白1(YAP1)作为Hippo信号通路下游重要的效应因子,在肿瘤的发生发展及治疗抵抗中发挥了非常重要的作用。YAP1在食管癌细胞中高表达,可以促进食管癌细胞增殖、抑制食管癌细胞凋亡、增强食管癌细胞的侵袭和转移,并且导致食管癌患者的化疗耐药和放疗抵抗。靶向YAP1治疗可能给食管癌患者带来临床获益,将YAP1抑制剂与抗癌药物或放疗联合应用或是治疗食管癌的新策略。

胃癌组织中UHRF1、YAP1和FOXP3表达及与患者临床病理特征的关系

目的探讨胃癌组织中类泛素样含环指域蛋白1(UHRF1)、Yes相关蛋白1(YAP1)和叉头翼状螺旋转录因子3(FOXP3)表达及与患者临床病理特征的关系。方法收集2021年1至12月湖州市第一人民医院经手术切除的85例胃癌患者的癌组织与配对癌旁组织,采用免疫组化法测定UHRF1、YAP1和FOXP3的阳性率。比较胃癌组织与癌旁组织及不同临床病理特征患者间UHRF1、YAP1和FOXP3的阳性率。结果胃癌组织中UHRF1、YAP1和FOXP3阳性率均显著高于癌旁组织,差异均有统计学意义(均P<0.01)。不同性别、年龄、BMI和肿瘤直径胃癌患者UHRF1、YAP1和FOXP3阳性率比较,差异均无统计意义(均P>0.05);低分化胃癌患者高于高、中分化胃癌患者,Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者高于Ⅰ、Ⅱ期胃癌患者,淋巴结转移胃癌患者高于无淋巴结转移胃癌患者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论胃癌组织UHRF1、YAP1和FOXP3阳性率高,并与患者肿瘤分化程度、临床分期和淋巴结转移等临床病理特征有关。