基于质量源于设计理念优化抑肝散提取物中生物碱的含量测定方法

目的运用质量源于设计理念开发抑肝散提取物中生物碱的高效液相色谱分析方法。方法利用响应面设计法和Drylab软件优化抑肝散提取物中生物碱含量测定色谱条件,并通过单因素影响实验验证方法可靠性。结果采用Hanbon Megres C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈(A)∶15 mmol/L乙酸铵(B)=45∶55进行等度洗脱,流速为1.0 ml/min,检测波长为245 nm,柱温35℃,钩藤碱和异钩藤碱在1~50μg/ml内的线性关系良好,数据均符合要求。结论基于QbD理念进行药物分析方法的开发和完善,有效提高了实验效率,有利于分析方法的转移。

抑肝散治疗痴呆症的临床及实验研究现状

痴呆是一种严重影响人类健康的疾病,如何防治痴呆已成为医学界的研究热点。临床及实验研究提示,抑肝散可以改善痴呆患者的行为心理学症状,同时其作用机制多样。本文综述了抑肝散治疗痴呆的临床及实验现状,为进一步合理开发和利用抑肝散提供理论依据。

ICP-MS法检测益肝散中金属元素

目的考察不同批次益肝散中钒(V)、铬(Cr)、铁(Fe)、钴(Co)、镍(Ni)、铜(Cu)、砷(As)、硒(Se)、钼(Mo)、镉(Cd)、汞(Hg)和铅(Pb)金属元素的含量。方法采用湿法消解法消解样品,以115In为内标,用电感耦合等离子质谱法同时测定益肝散中钒、铬、铁、钴、镍、铜、砷、硒、钼、镉、汞和铅金属元素的含量。结果检测的12种元素线性关系良好,相关系数r≥0.999 2,各元素的检出限为0.038~0.537μg·L-1,回收率为100.0%~104.7%,RSD≤4.4%,重复性和精密度的RSD值均≤5%。结论该方法适用于益肝散的微量元素及重金属限量控制。可考虑应用于其他中药材的检测。

HPLC测定黄萱益肝散中大黄素和大黄素甲醚的含量

目的：建立复方制剂益肝散中两种有效成分大黄素和大黄素甲醚的含量测定方法；方法：采用反相高效液相色谱法，Diamonsil（钻石）C18（5μm，250mm×4．6mm）；流动相甲醇：0．05％磷酸水溶液（75：25）。流速1mL·min^-1；柱温35℃；检测波长254nm。结果：大黄素和大黄素甲醚进样量分别在0．0145-0．4624μg和0．0088-0．2800μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，回收率分别为：98．3％和98．7％；结论：该法操作简便、快速、准确，适用于益肝散的质量控制。

乙肝散对肝星状细胞增殖及凋亡的影响

目的通过观察中药乙肝散的药物血清对肝星状细胞(HSC/T6)的增殖及凋亡的影响,从细胞学和分子生物学水平探讨中药乙肝散的抗纤维化的作用机制,为临床用药提供理论依据。方法①MMT法测定细胞增殖。②用流式细胞仪测定各组各浓度药物血清对HSC/T6作用后的DNA含量,低于G1期DNA含量主峰(亚G1期峰)的细胞为凋亡细胞。结果5%,10%和20%浓度的乙肝散的药物血清均对HSC/T6的增殖有显著的抑制作用,对HSC/T6的凋亡率分别为8.63%,14.56%和21.95%。结论中药乙肝散能抑制HSC/T6的增殖,诱导HSC/T6的凋亡,因此促进活化的HSC的凋亡可能是乙肝散抗肝纤维化的细胞分子学重要机制之一。

中药乙肝散逆转实验性肝纤维化的机理研究

目的 :探讨乙肝散逆转免疫损伤性肝纤维化的作用。方法 :雄性Wistar大鼠尾静脉注射白蛋白建立免疫损伤性肝纤维化模型后 ,用含乙肝散颗粒饲料喂养 12周 ,应用流式细胞仪定量分析术、免疫组织化学及纤维化学染色结合血清学纤维化指标 ,动态观察不同时期肝组织TGF β1、TIMP 1、MMP 2基因表达量及肝纤维化组织变化。 结果 :乙肝散组肝组织TGF β1、TIMP 1表达量较模型对照组明显降低 ,MMP 2变化无统计学差异 ;同时肝组织Ⅰ胶原、Ⅲ胶原、Ⅳ胶原水平和肝组织羟脯氨酸 (Hyp)含量明显降低。结论 :乙肝散逆转肝纤维化过程中抑制肝组织TGF β1、TIMP 1基因表达 ,TGF β1、TIMP 1在肝纤维化的逆转中起重要作用。

抑肝散提取物对环境内分泌干扰物神经毒性的抑制作用

目的:考察抑肝散提取物抑制环境内分泌干扰物(EEDs)双酚A(BPA)和邻苯二甲酸(2-乙基己基)酯(DEHP)神经毒性的作用并分析其机制。方法:小鼠神经母细胞瘤细胞Neuro-2a细胞经BPA(0.1 mmol/L)+DEHP(0.1 mmol/L)与3 mg/mL(低剂量组)和6 mg/mL(高剂量组)抑肝散乙醇/氯仿提取物共培养72 h,观察细胞凋亡和氧化损伤(活性氧簇,ROS)的变化。按照暴露剂量为25μg/(kg·d)BPA和50μg/(kg·d)DEHP给予初断乳雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠BPA连续灌胃暴露90 d,同时将抑肝散乙醇/氯仿提取物按300 mg/kg(低剂量组)和600 mg/kg(高剂量组)给大鼠灌胃给药,通过Y迷宫实验观察大鼠短期记忆能力(自发交替正确率)的变化。取大鼠海马组织后,检测海马组织总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、游离脂肪酸(FFAs)葡萄糖含量和线粒体膜电位(MMP)的变化,分析星形胶质细胞胶质纤维状酸性蛋白(GFAP)和巢蛋白(nestin)、caspase-3以及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路活性的变化。结果:Neuro-2a细胞经BPA+DEHP暴露后,24、48、72 h细胞增殖均受到抑制(t=3.951、8.823、7.060,均P<0.05),早期和晚期凋亡率均上调(t=14.072、6.590,均P<0.05),抑肝散提取物可促进细胞增殖(与暴露组相比,低剂量组t=2.963、5.814、2.101,均P<0.05,高剂量组t=3.796、10.370、5.311,均P<0.05),抑制早期和晚期细胞凋亡(与暴露组相比,低剂量组t=0.770、1.475,均P<0.05,高剂量组t=6.187、4.368,均P<0.05)。大鼠经BPA+DEHP暴露后,短期记忆能力显著下降(t=2.123,P<0.05),其海马组织氧化应激、GFAP表达和caspase-3活性上调(t=3.634、5.043、8.914,均P<0.05),nestin表达、线粒体膜电位、MDA、GSH、T-AOC和mTOR磷酸化水平下调(t=8.398、9.979、3.754、9.621、7.193、25.982,均P<0.05),抑肝散提取物可缓解BPA+DEHP暴露后大鼠短期记忆能力损伤(与暴露组相比,低剂量组t=1.339,P>0.05,高剂量组t=2.293,P<0.05)以及海马组织的上述表型改变(与暴露组相比,低剂量组t=1.147、1.683、1.594、1.611、4.469、2.070、5.346、5.499、6.124,除MDA外均P<0.05,高剂量组t=2.642、3.385、3.728、4.899、8.083、3.719、4.707、5.761、12.252,均P<0.05)。结论:抑肝散提取物可通过调节氧化应激和糖代谢紊乱,抑制EEDs的神经毒性。

抑肝散抗小鼠脑缺血/再灌注损伤的作用研究(Ⅰ)

目的:观察抑肝散对小鼠大脑中动脉缺血再灌注的影响。方法:小鼠连续灌胃7d,末次给药1h后通过线栓法建立小鼠大脑缺血再灌注模型,测定模型鼠的神经功能变化、脑梗塞范围、脑含水量、脑指数、脑组织形态、血浆中NO、总NOS、iNOS含量。结果:抑肝散明显改善小鼠脑缺血后的行为状态,缩小缺血范围,使缺血组织病变程度减轻,降低因脑缺血造成NO、总NOS、iNOS的升高。结论:抑肝散对小鼠脑缺血再灌注损伤有明显的保护作用。

益肝散对儿童乙型肝炎病毒感染疗效观察

目的了解益肝散对儿童乙肝病毒感染的疗效.方法在第4、6月疗程结束时比较益肝散与干扰素对8～14岁儿童乙肝病毒感染的疗效.结果益肝散治疗4个月时综合疗效完全应答率(ALT复常,HBV-DNA及HBeAg阴转)为21.1%,部分应答率为36.8%,血液中HBV-DNA定量由(52.4±38.6)×105cop/mL降为(8.8±7.9)×105 cop/mL,P＜0.01;6月随访时完全应答率为21.1%,部分应答率39.5%,HBV-DNA定量降为(6.9±6.1)×105 cop/mL,与治疗前比P＜0.01.与干扰素治疗相比,治疗4个月时(完全应答率18.4%;部分应答率36.8%;HBV-DNA定量由(51.7±36.8)×105 cop/mL降为(10.1±9.8)×105cop/mL,P＜0.01)无显著差异性(P＞0.05),疗效相当;治疗6个月时[应答率21.1%;部分应答率39.5%;HBV-DNA定量降为(7.8±6.9)×105 cop/mL,与治疗前比P＜0.01]疗效相近(P＞0.05).毒副作用小.结论益肝散对儿童乙肝病毒感染与干扰素有相似效果,治疗安全,是治疗儿童乙肝病毒感染的有效方法.

中药乙肝散逆转肝纤维化过程中肝组织TIMP-1及MMP-2表达变化的实验研究

目的探讨中药乙肝散逆转免疫性肝纤维化过程中肝组织TIMP1(金属蛋白酶组织抑制因子1)及MMP2(间质金属蛋白酶2)表达的变化。方法雄性Wistar大鼠尾静脉注射白蛋白建立免疫损伤性肝纤维化模型后,分组加用不同浓度的乙肝散颗粒饲料喂养12周,流式细胞仪定量分析大鼠肝组织TIMP1和MMP2基因表达量,观察大鼠肝组织病理、苦味酸天狼红染色、Ⅳ胶原免疫组化、αSMA(α平滑肌肌动蛋白)免疫组化、肝匀浆Hyp(羟脯氨酸)。结果乙肝散应用组肝组织TIMP1表达量较模型对照组明显降低(P<001),MMP2变化无统计学差异;同时肝组织Ⅰ胶原、Ⅲ胶原、Ⅳ胶原水平和Hyp含量明显降低(P<001或P<005)。结论中药乙肝散在逆转肝纤维化过程中对抑制肝组织TIMP1基因表达具有一定作用,TIMP1在肝纤维化的逆转中起重要作用。

乙肝散联合单磷酸阿糖腺苷治疗慢性乙型肝炎35例临床分析(英文)

目的 :对中药制剂乙肝散联合单磷酸阿糖腺苷 (Ara Amp)治疗慢性乙型肝炎进行临床分析。方法 :随机分为治疗组(35例 )和对照组 (35例 )。乙肝散口服 9g/次 ,3次 /d ,连服 3个月 ;Ara Amp第 1～ 10天肌注 2次 /d ,2 0 0mg/次 ,第 11～ 5 0天肌注 1次 /d ,2 0 0mg/次 ,治疗组两药联用 ,对照组单用Ara Amp。结果 :血清病毒学指标方面 ,治疗组HBeAg阴转率 5 1% ,对照组 38% ,两组比较有显著差异 (P <0 0 5 ) ;治疗组HBV DNA阴转率 46 % ,对照组 41% ,两者无明显差异 (P >0 0 5 ) ;肝功能方面 ,两组均取得明显效果 ,组间比较无明显差异 (P >0 0 5 )。结论 :中药制剂乙肝散联合Ara Amp治疗慢性乙型肝炎 ,能明显改善肝功能 ,并提高HBeAg阴转率。

抑肝散治疗阿尔茨海默病的作用及机制探讨

目的探究抑肝散对阿尔茨海默病(AD)的治疗作用,通过网络药理学方法预测其机制,并进行实验验证。方法以D-半乳糖诱导AD小鼠模型,通过水迷宫和八臂迷宫实验考察抑肝散(400、800 mg·kg^(-1))对AD小鼠学习记忆功能的影响,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法分析AD小鼠脑组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)的mRNA表达变化。通过中药系统药理学数据分析平台(TCMSP)对抑肝散的组方药材柴胡、甘草、川芎、当归、白术、茯苓和钩藤进行活性成分筛选,采用GeneCards等数据库获取AD疾病靶点,筛选其核心靶点,并对核心靶点进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,分别获取核心靶点涉及的生物过程(BP)、分子功能(MF)和细胞组分(CC)以及KEGG信号通路。小鼠神经母细胞瘤Neuro-2a细胞和RAW264.7巨噬细胞分别与H_(2)O_(2)和抑肝散(3、6μg·mL^(-1))共培养,观察抑肝散对Neuro-2a细胞体外增殖和凋亡的影响,及对Neuro-2a细胞Caspase-3和Caspase-8活性、活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和线粒体膜电位(MMP)的影响;观察抑肝散对RAW264.7细胞TNF-α和IL-1β、IL-2、IL-6表达的影响,对网络药理学结果进行验证。结果抑肝散可缓解AD小鼠学习记忆功能损伤,通过网络药理学技术筛选得到抑肝散治疗AD的活性成分159个,度值前10位的化合物分别是槲皮素、山柰酚、异鼠李素、β-谷甾醇、豆甾醇、7-甲氧基异黄酮、芒柄花素、柚皮素、美迪紫檀素和甘草查尔酮A,筛选得到核心靶点227个,度值排名前10的核心靶点为丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素6(IL6)、肿瘤蛋白P53(TP53)、白细胞介素1β(IL1B)、雌激素受体1(ESR1)、原癌基因(JUN)、前列腺素氧化环化酶2(PTGS2)、半胱氨酸蛋白酶3(CASP3)和信号转导和转录激活因子3(STAT3)。生物信息学分析发现抑肝散治疗AD与糖基化终末产物/糖基化终末产物受体和脂质和动脉粥样硬化等信号通路有关。动物实验结果显示,抑肝散可改善AD模型小鼠学习记忆功能损伤,下调AD小鼠脑组织中IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-αmRNA表达;细胞实验结果显示,抑肝散显著缓解H_(2)O_(2)对Neuro-2a细胞的增殖抑制作用和凋亡诱导作用(P<0.05),降低Caspase-3、Caspase-8活性(P<0.05),降低细胞MDA和ROS水平(P<0.05),升高MMP及GSH水平;抑肝散对H_(2)O_(2)诱导的RAW264.7细胞TNF-α和IL-1β、IL-2、IL-6升高具有显著抑制作用(P<0.05)。结论抑肝散通过缓解学习记忆功能损伤和氧化损伤发挥治疗AD作用。