人YPEL5基因真核表达载体的构建及在食管癌细胞中的表达

目的构建人YPEL5基因真核表达重组质粒并在食管癌细胞EC9706中表达。方法以人正常组织的cDNA为模板,扩增得到长366bp的YPEL5基因编码序列,将此序列插入到真核表达载体pCDHCD513B的多克隆位点区域中,得到真核表达载体pCDH-CD513B-Flag-YPEL5,经菌落聚合酶链反应(PCR)鉴定后送公司测序。将构建成功的重组质粒转染到人食管癌细胞系EC9706中,利用实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹(Western Blot)检测YPEL5基因的表达情况。结果成功扩增出YPEL5基因片段,大小为366bp,经双酶切、连接、转化和筛选得到pCDH-CD513B-Flag-YPEL5重组质粒,通过基因测序鉴定显示重组质粒中插入的基因序列与GenBank中的序列一致,转染EC9706细胞2d后,荧光定量PCR和Western Blot显示YPEL5基因的表达明显上调。结论成功构建了pCDH-CD513B-Flag-YPEL5真核表达载体并在食管癌细胞株EC9706中得到表达,从而为进一步研究其在食管癌进展中的功能奠定了基础。