海洋真菌YS4108抗肿瘤多糖YCP发酵条件的优化

目的寻找优化的摇瓶发酵条件,以提高菌株YS4108抗肿瘤多糖YCP的得率,为工业化发酵生产铺垫。方法采用单因数和正交设计的方法,以YS4108菌丝体得率、粗多糖含量或YCP收获率为指标,优化培养条件和碳源、氮源及无机盐配方。结果该菌最佳摇瓶发酵培养条件为:28℃,初始pH 6.0,120r/min,7 d,1 L摇瓶装液量400 mL;最佳发酵配方为:蔗糖2.5%,玉米粉1%,NaNO30.2%,酵母膏0.2%,KH2PO40.05%,MgSO4.7H2O0.05%,KCl 0.05%,FeSO40.000 1%,人工海水100%。结论该发酵工艺YCP收获率为0.227 2 g/L,为优化前工艺的3.6倍,具有良好的应用前景。

1株能产生抗肿瘤多糖的海洋真菌YS4108的鉴定

目的鉴定1株能产抗肿瘤多糖的海洋真菌YS4108。方法根据菌株形态特征、生理生化特性、部分核糖体序列进行分析、鉴定。结果该菌株为草茎点霉(Phoma herbarum)。结论形态加分子指纹法进行真菌分类鉴定是1种可靠、快速的鉴定方法。

Actin启动子的克隆及海洋丝状真菌Phoma herbarum YS4108的遗传转化(英文)

目的:建立一种简便有效的海洋丝状真菌Phoma herbarum YS4108的转基因方法。方法:用简并引物扩增和染色体步行克隆P.herbarum YS4108的actin启动子,以潮霉素抗性基因为选择标记,用部分原生质体化的单细胞进行电转化并摸索最佳电转化参数。结果:成功获得了actin启动子序列,并确定了最佳电转化参数:电压0.75kV(0.2cm电转化杯),电阻400?,载体DNA用量为9μg。在此条件下可获得多于100个转化子/电转化杯(106细胞)。结论:内源性的actin启动子可用于P.herbarum YS4108的电转化,该方法可用于P.herbarum的转基因研究。

海洋真菌多糖间接竞争ELISA检测方法的建立及方法学评价

目的建立酶联免疫吸附法（ELISA）以检测海洋真菌多糖YS4108发酵过程中抗肿瘤多糖（YCP）的含量。方法以CDAP（1-氰基-4-二甲胺吡啶四氟硼酸盐）为交联剂制备YCP-BSA偶联产物，利用该偶联产物为包被抗原，YCP为竞争抗原，两者与定量的YCP-McAb反应，建立检测YCP的间接竞争ELISA测定法。结果最佳抗原包被浓度为2．5mg/L，最佳单抗工作浓度为1：5000，HRP-抗小鼠IgG工作浓度为1：4000。得到回归方程lg（B／B0％）=-0．1718lgCYCP＋1．9638，r=0．9916，可测量最适范围为1～1000μg／L，最小检测量为0．1μg／L，批内和批间RSD分别小于5．45％和8．37％。结论建立了快速测定YCP含量的间接竞争ELISA法。