Ⅲ型纤连蛋白样包含结构域1蛋白在食管癌组织中的表达及临床意义

目的研究Ⅲ型纤连蛋白样包含结构域1(FNDC1)蛋白在食管癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化及实时荧光定量PCR检测四川省巴中市中心医院2013年4月至2015年4月诊治的93例食管癌患者癌组织及癌旁组织中FNDC1的表达,分析癌组织中FNDC1的表达与临床病理特点关系。随访5年,Kaplan-Meier生存分析癌组织中不同FNDC1表达患者预后的差异。结果癌组织中FNDC1 mRNA的相对表达量明显高于癌旁组织(P <0.05)。FNDC1阳性棕褐色染色主要位于癌组织中肿瘤细胞的细胞浆,癌组织中FNDC1的阳性表达率明显高于癌旁组织(P <0.05)。癌组织中FNDC1蛋白表达与肿瘤分期及淋巴结转移有关(P <0.05)。随访3~60个月,FNDC1阳性患者5年总体生存率低于FNDC1阴性患者(P <0.05),FNDC1阳性患者的平均生存时间短于FNDC1阴性患者(P <0.05)。结论食管癌组织中FNDC1表达升高,FNDC1的表达与肿瘤分期及淋巴结转移有关,并有可能成为判断食管癌患者生存预后的标志物。

三结构域包含蛋白29对鼻咽癌细胞生长和迁移的影响

目的研究三结构域包含蛋白(TRIM 29)、死骨片蛋白-1(SQSTM 1)、根蛋白(RDX)基因在不同转移潜能鼻咽癌细胞系中的表达水平,了解其与鼻咽癌细胞侵袭转移的关系,揭示TRIM 29在鼻咽癌细胞侵袭转移中的作用。方法 1采用q RT-PCR(quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction)和蛋白印迹法(Western blot)检测高转移潜能鼻咽癌细胞系5-8F和低转移潜能鼻咽癌细胞系6-10B中TRIM 29、SQSTM 1、RDX基因的m RNA和蛋白表达水平;2脂质体转染法将TRIM 29特异性si RNA载体和空白载体转染5-8F细胞,建立稳定转染细胞系;3采用Western blot检测细胞中TRIM 29蛋白表达水平的变化,MTT法检测细胞增殖能力的变化,流式细胞仪检测细胞周期分布的变化,划痕实验观察细胞迁移能力的变化。结果 15-8F细胞中TRIM 29、SQSTM 1的表达水平明显高于6-10B细胞,而RDX的表达水平低于6-10B细胞;2建立了TRIM 29低表达的5-8F细胞系及其空白载体稳定转染细胞系;3与空白载体转染的5-8F细胞和未转染5-8F细胞比较,特异性si RNA转染的TRIM 29低表达5-8F细胞的增殖能力降低,G0/G1细胞增加,而S期细胞减少,细胞迁移能力降低。结论 1si RNA干扰TRIM 29表达抑制鼻咽癌5-8F细胞的生长和迁移;2TRIM 29、SQSTM 1与鼻咽癌转移密切相关,有望成为预警鼻咽癌转移的分子标志物,但RDX与鼻咽癌转移关系不确定。

线粒体自噬受体蛋白FUN14结构域包含蛋白1在心血管疾病中的作用

作为细胞的有氧呼吸和能量供应中心,线粒体在细胞代谢、反应和凋亡中都发挥重要作用。因此,为了维持细胞功能,控制线粒体质量至关重要。线粒体自噬为一种选择性吞噬方式,通过靶向清除需要清除的功能失调的线粒体来维持细胞的动态平衡。FUN14结构域包含蛋白1(FUNDC1)是一种在心肌细胞线粒体外膜中高度表达、具有介导线粒体自噬功能的受体蛋白。多项研究表明,FUNDC1的表达水平和磷酸化状态与各种心血管疾病的发生、发展和预后密切相关。本文综述了FUNDC1介导的线粒体自噬的调控机制及其在心血管疾病中的作用。

YTHDC1介导ABCB6上调诱导AD小鼠神经元细胞铁死亡促进认知功能障碍机制的实验研究

目的研究ATP结合盒B亚家族转运蛋白6(ATP-binding cassette subfamily B transporter 6,ABCB6)对阿尔兹海默症(Alzheimer’s disease,AD)小鼠认知功能障碍的影响及其可能的潜在调控分子机制。方法通过注射β-淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)构建体内AD小鼠模型;采用水迷宫测试和Y迷宫测试评估大鼠学习与记忆能力、空间探索能力。通过神经元HT22细胞和Aβ构建体外AD细胞模型;采用RNA免疫沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)分析YTH结构域包含蛋白1(YTH domain containing proteins 1,YTHDC1)与ABCB6的结合关系;实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测过表达和敲低转染效率;Western blot检测YTHDC1和ABCB6蛋白,以及铁死亡相关蛋白[溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)]表达水平;CCK-8检测细胞活力;检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平及Fe^(2+)含量。结果AD小鼠海马组织及Aβ诱导的HT22细胞中ABCB6 mRNA(3.51±0.17 vs 1.02±0.01,3.45±0.21 vs 1.02±0.01)和蛋白(3.25±0.14 vs 1.01±0.01,3.14±0.16vs 1.01±0.01)水平均显著上调,差异具有统计学意义(t=-46.238,-20.349;-50.468,-23.013,均P<0.001)。敲低ABCB6显著降低AD小鼠抵达平台的时间、到达平台距离,增加小鼠自发交替率和进入新异臂次数的比值(t=27.007,11.264,24.414,19.901,均P<0.001)。敲低ABCB6促进HT22细胞增殖,抑制Aβ诱导的MDA,Fe^(2+)水平上调和GSH水平下调,减少ROS生成,促进SLC7A11和GPX4蛋白表达(t=2.883~26.122,均P<0.05)。YTHDC1蛋白通过与ABCB6 mRNA结合促进其稳定性,上调ABCB6蛋白表达。敲低YTHDC1显著降低ABCB6蛋白水平(t=18.504,P<0.001),促进HT22细胞增殖,升高GSH含量及SLC7A11和GPX4蛋白水平,降低MDA和Fe^(2+)含量,抑制ROS生成(t=4.404~14.486,均P<0.05)。敲低YTHDC1可以改善AD小鼠学习与记忆能力和空间探索能力。过表达ABCB6可逆转敲低YTHDC1对HT22细胞铁死亡和AD小鼠认知功能障碍的影响。结论YTHDC1可能通过介导ABCB6上调,诱导神经元细胞铁死亡,进而促进AD小鼠的认知功能障碍发生。

血清ICAM-1、SCUBE-1、DCN水平与视网膜静脉阻塞患者血管内皮功能及预后相关性研究

目的:探究血清细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、信号肽-CUB-表皮生长因子结构域包含蛋白1(SCUBE-1)、核心蛋白多糖(DCN)水平与视网膜静脉阻塞(RVO)患者血管内皮功能及预后的相关性。方法:选取RVO患者58例(研究组)和同期体检健康者60例(对照组)。比较两组血清ICAM-1、SCUBE-1、DCN水平和血管内皮功能指标。采用Pearson法分析血清ICAM-1、SCUBE-1、DCN水平与患者血管内皮功能的相关性。根据RVO患者治疗后恢复情况将患者分为预后良好组(21例)和预后不良组(37例)。分析RVO患者预后的影响因素采用多因素Logistic回归。血清ICAM-1、SCUBE-1、DCN对RVO患者预后不良的预测价值通过绘制受试者工作特征(ROC)曲线进行分析。结果:研究组血清ICAM-1、SCUBE-1、DCN水平高于对照组(均P<0.05)。研究组反应性充血指数、一氧化氮水平低于对照组,血管内皮生长因子水平高于对照组(均P<0.05)。血清ICAM-1、SCUBE-1、DCN水平与反应性充血指数及一氧化氮呈负相关,与血管内皮生长因子呈正相关(均P<0.05)。预后良好组血清ICAM-1、SCUBE-1、DCN水平低于预后不良组(均P<0.05)。预后不良组患者合并高血压、视网膜静脉总干部位阻塞的比例高于预后良好组(均P<0.05)。血清ICAM-1、SCUBE-1、DCN、合并高血压、视网膜静脉阻塞部位为RVO患者预后的影响因素(均P<0.05)。血清ICAM-1、SCUBE-1、DCN以及三者联合预测RVO患者预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.804、0.793、0.802、0.933,且三者联合预测的AUC更高(均P<0.05)。结论:RVO患者血清ICAM-1、SCUBE-1、DCN水平升高,与血管内皮功能和预后有关,且三者联合对患者预后具有一定预测价值。

YTHDF1和EIF3C在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

目的分析YTH结构域N6-甲基腺嘌呤RNA结合蛋白F1(YTHDF1)和真核翻译起始因子3C(EIF3C)在上皮性卵巢癌(EOC)中的表达及临床意义。方法回顾性分析2016年1月至2020年1月徐州医科大学附属医院初诊收治的130例EOC患者的临床资料,另选取同期因卵巢良性囊肿行手术治疗的70例患者的正常卵巢组织作为对照。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测组织中YTHDF1 mRNA和EIF3C mRNA表达水平。采用免疫组化染色检测组织中YTHDF1蛋白和EIF3C蛋白表达情况。采用Pearson相关分析探讨YTHDF1 mRNA与EIF3C mRNA表达水平的相关性。分析YTHDF1蛋白、EIF3C蛋白表达情况与EOC患者临床病理特征的关联性。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线。采用Cox回归分析EOC患者预后的影响因素。结果EOC组织中YTHDF1 mRNA、EIF3C mRNA表达水平高于正常卵巢组织,差异有统计学意义(P<0.05)。EOC组织中YTHDF1蛋白、EIF3C蛋白阳性表达率高于正常卵巢组织,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,EOC组织中YTHDF1 mRNA与EIF3C mRNA表达呈正相关(r=0.802,P<0.001)。EOC组织中YTHDF1蛋白、EIF3C蛋白表达情况与肿瘤FIGO分期、病理分级、淋巴结转移情况具有显著关联性(P<0.05)。YTHDF1阴性患者的生存预后优于阳性患者(log-rank检验:χ^(2)=6.120,P=0.013)。EIF3C阴性患者的生存预后优于阳性患者(log-rank检验:χ^(2)=10.610,P=0.001)。Cox回归分析结果显示,FIGO分期Ⅲ期、病理分级Ⅲ级、淋巴结转移、较高的CA125水平以及YTHDF1蛋白、EIF3C蛋白阳性表达是EOC患者不良预后的独立危险因素。结论EOC组织中YTHDF1、EIF3C表达升高,与不良临床病理特征有关。YTHDF1和EIF3C是潜在的评估EOC预后的生物标志物。

HIF-1α诱导m6A阅读蛋白YTHDF1表达对缺氧复氧诱导的小鼠心肌细胞自噬的影响

目的探究缺氧诱导因子(HIF)-1α对缺氧/复氧(H/R)诱导的小鼠心肌细胞自噬的影响及可能的作用机制。方法体外培养小鼠心肌细胞,分为对照组、H/R组、pcDNA3.1-NC组(pcDNA3.1-HIF-1α的阴性对照转染至心肌细胞)、HIF-1α过表达组(pcDNA3.1-HIF-1α转染至心肌细胞)、HIF-1α过表达+si-NC组(pcDNA3.1-HIF-1α和YTHDF1 siRNA阴性对照共转染至心肌细胞)、HIF-1α过表达+si-YTHDF1组(pcDNA3.1-HIF-1α和YTHDF1 siRNA共转染至心肌细胞),转染48 h后采用缺氧24 h复氧6 h的方法建立H/R模型。实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中HIF-1α和YTHDF1 mRNA表达;CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;试剂盒检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌钙蛋白(cTn)I、肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)水平;自噬双标腺病毒mCherry-GFP-LC3B免疫荧光法检测心肌细胞自噬;Western印迹检测心肌细胞HIF-1α、YTH结构域家族蛋白(YTHDF)1及自噬相关蛋白的表达。结果与对照组相比,H/R组心肌细胞中HIF-1α和YTHDF1的mRNA和蛋白表达、自噬体和自噬溶酶体数量、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin-1、自噬相关蛋白2同源物A(ATG2A)、自噬相关蛋白(ATG)14表达显著增加,心肌细胞活力显著降低,细胞凋亡率、心肌细胞培养上清液中LDH、cTnI、CK-MB水平显著升高(均P<0.05);与H/R组相比,HIF-1α过表达组和HIF-1α过表达+si-NC组心肌细胞中HIF-1α和YTHDF1的mRNA和蛋白表达、自噬体和自噬溶酶体数量、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin-1、ATG2A、ATG14表达显著增加,心肌细胞活力显著升高,细胞凋亡率、心肌细胞培养上清液中LDH、cTnI、CK-MB水平显著降低(均P<0.05);而在HIF-1α过表达基础上使用YTHDF1 siRNA转染心肌细胞下调YTHDF1的表达后,HIF-1α过表达对心肌细胞增殖、自噬的促进作用及对细胞凋亡的抑制作用被明显减弱。结论在缺氧条件下,HIF-1α可能通过上调YTHDF1表达,促进H/R诱导的小鼠心肌细胞自噬。

脑小血管病与Toll样受体4核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3信号通路

脑小血管病是指由于各种病因影响脑内小动脉、微动脉、毛细血管、微静脉和小静脉导致的一系列临床、影像和病理综合征[1]。影像学主要表现为腔隙性病灶、脑白质高信号、脑微出血、近期皮质下小梗死灶和脑萎缩等异常信号[2]。在我国脑小血管病占缺血性脑卒中的46%[3]。随着我国人口老年化程度的不断加深,脑小血管病发病率呈逐年上升趋势。目前,脑小血管病的病理生理改变暂时集中于内皮功能障碍、血脑屏障破坏、慢性缺血低灌注和炎性反应等因素。

YTHDC1介导的CENPK调节人宫颈癌细胞侵袭和增殖

目的:找寻宫颈癌的预测、治疗靶点,探究靶点与N6-甲基腺苷(m6A)核酸修饰之间的联系及发挥的生物学功能。方法:在GEPIA2数据库提供的数据中筛选宫颈癌差异表达的基因。EdU实验、划痕实验以及Transwell实验分别检测着丝粒蛋白K(CENPK)对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。RNA m6A修饰的定量测定结合蛋白质印迹法研究m6A修饰与CENPK高表达的关系。结果:CENPK在宫颈癌组织中上调(P<0.05)。沉默CENPK基因导致宫颈癌细胞增殖能力下降,抑制了细胞迁移和侵袭(P<0.01)。m6A阅读器YTH域包含蛋白1(YTHDC1)通过降低CENPK蛋白的表达在宫颈癌细胞中发挥作用(P<0.01)。结论:CENPK可能是一个潜在的宫颈癌治疗靶点。

脑胶质瘤组织中YTHDF2,UBXN1的表达及其对预后的评估价值

目的研究脑胶质瘤组织中YTH结构域N6-甲基腺嘌呤RNA结合蛋白2(YTH domain N6-methyladenine RNA binding protein 2,YTHDF2),UBX结构域蛋白1(UBX domain protein 1,UBXN1)的表达及预后评估价值。方法选取2017年2月~2018年2月青岛市胶州中心医院诊治的92例脑胶质瘤患者。免疫组织化学检测组织YTHDF2,UBXN1表达。相关性采用Spearman秩相关分析。Kaplan-Meier曲线分析YTHDF2,UBXN1表达与脑胶质瘤患者预后的影响。COX分析脑胶质瘤患者预后影响因素。结果相比于癌旁组织,脑胶质瘤中YTHDF2(65.22%vs 15.22%)阳性率较高,UBXN1(26.09%vs 73.91%)的阳性率较低,差异具有统计学意义(χ^(2)=47.831,42.087,均P<0.05)。Spearman秩相关分析,脑胶质瘤中YTHDF2与UBXN1表达呈负相关(r=-0.712,P<0.05)。相比于肿瘤直径<3cm,WHO分级Ⅰ~Ⅱ级,肿瘤直径≥3cm和WHO分级Ⅲ级脑胶质瘤组织中YTHDF2(75.47%vs 51.28%,65.22%vs 50.00%)阳性率较高,而UBXN1(15.09%vs 41.03%,11.11%vs 47.37%)阳性率较低,差异具有统计学意义(χ^(2)=5.795,6.609;7.835,15.207,均P<0.05)。YTHDF2阳性组五年总生存率低于阴性组[28.33%(17/60)vs 62.50%(20/32)],UBXN1阳性组五年总生存率高于阴性组[66.67%(16/24)vs 30.88%(21/68)],差异具有统计学意义(Log-Rankχ^(2)=12.870,7.665,均P<0.05)。YTHDF2阳性(HR=2.427,95%CI:1.426~4.569)、UBXN1阴性(HR=1.740,95%CI:1.121~2.568)、WHO分级Ⅲ级(HR=2.671,95%CI:1.160~6.012)及肿瘤直径≥3cm(HR=1.628,95%CI:1.017~2.592)是胶质瘤患者不良预后的危险因素。结论脑胶质瘤组织中YTHDF2升高,UBXN1降低,两者与WHO分级及肿瘤直径有关。YTHDF2和UBXN1是评估脑胶质瘤患者预后的独立因素。

血清SCUBE1、CLEC-2、UCP2对急性缺血性脑卒中患者静脉溶栓后预后不良的预测价值

目的分析血清信号肽-CUB-表皮生长因子结构域包含蛋白1(SCUBE1)、C型凝集素样受体-2(CLEC-2)、解偶联蛋白2(UCP2)对急性缺血性脑卒中(AIS)患者静脉溶栓(IVT)后预后不良的预测价值。方法选取2022年6月至2023年10月在该院接受IVT治疗的116例AIS患者为观察组,另选取同期在该院进行体检的116例健康者为对照组。根据改良Rankin量表(mRS)评分将患者分为预后良好组和预后不良组。采用酶联免疫吸附试验检测血清SCUBE1、CLEC-2、UCP2水平。采用多因素Logistic回归分析AIS患者IVT后预后不良的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清SCUBE1、CLEC-2、UCP2对AIS患者IVT后预后不良的预测价值。结果观察组血清SCUBE1、CLEC-2水平高于对照组,血清UCP2水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。预后良好组有75例患者,预后不良组有41例患者。预后不良组梗死面积>4 cm~3患者比例、血清SCUBE1、CLEC-2水平高于预后良好组,血清UCP2水平低于预后良好组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,血清SCUBE1、CLEC-2水平升高为AIS患者IVT后预后不良的危险因素(P<0.05),血清UCP2水平升高为AIS患者IVT后预后不良的保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清SCUBE1、CLEC-2、UCP2单独预测AIS患者IVT后预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.752、0.694、0.776,3项指标联合预测的AUC为0.861,3项指标联合预测的AUC大于SCUBE1、CLEC-2、UCP2单独预测的AUC(Z_(3项联合-SCUBE1)=2.358、Z_(3项联合-CLEC-2)=2.714、Z_(3项联合-UCP2)=2.591,P=0.018、0.007、0.010)。结论IVT后预后不良的AIS患者血清SCUBE1、CLEC-2水平升高,UCP2水平降低,3项指标联合检测对AIS患者IVT后预后不良有较高的预测价值。

非瓣膜性房颤合并急性心肌梗死患者血清MIP-1α,SCUBE1表达水平及其临床诊断价值

目的 探究非瓣膜性房颤(NVAF)合并急性心肌梗死(AMI)患者血清巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α),信号肽-CUB-表皮生长因子结构域包含蛋白1(SCUBE1)表达水平及其临床诊断价值。方法 选取2021年4月-2023年5月在北大荒集团建三江医院收治的155例NVAF患者作为观察对象(观察组),根据是否合并AMI将患者分为未合并AMI组128例与合并AMI组27例,同时选取在本院健康检查的155名人员为对照组,比较各组血清MIP-1α、SCUBE1水平。受试者工作特征(ROC)曲线分析血清MIP-1α,SCUBE1对NVAF合并AMI的诊断价值。Logistic分析影响NVAF合并AMI的因素。结果 观察组血清MIP-1α、SCUBE1水平高于对照组(P<0.05)。合并AMI组左心室射血分数(LVEF)、左心房内径(LAD)、左心室舒张末期容积(LVEDV)显著低于未合并AMI组,血清MIP-1α和,SCUBE1水平、心房颤动(以下简称房颤)卒中风险评分(CHA2DS2-VASc)高于未合并AMI组(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清MIP-1α、SCUBE1水平辅助诊断NVAF患者合并AMI的曲线下面积(AUC)分别是0.819(95%CI:0.728~0.910)、0.784(95%CI:0.680~0.889),二者联合预测的AUC为0.917(95%CI:0.870~0.964),优于二者单独检测(Z=1.857、2.251, P<0.05)。Logistic分析显示,MIP-1α、SCUBE1是NVAF患者合并AMI的影响因素(P<0.05)。结论 NVAF合并AMI患者血清MIP-1α、SCUBE1水平升高,二者联合检测提高了对合并AMI的诊断效能,可能是NVAF合并AMI的潜在评估指标。

蛋白质酪氨酸磷酸酶SHP-1的中药抑制剂筛选

用含有蛋白质酪氨酸磷酸酶SHP-1催化结构域(ΔSHP-1)的质粒转化大肠杆菌,得到ΔSHP-1的高效表达,经分离纯化后,以ΔSHP-1为靶标,通过体外酶反应动力学实验,对157种中药水提液的抑制效果进行研究,筛选出两种对ΔSHP-1具有显著抑制作用的中药:山茱萸和蒲公英,并对其IC50及抑制类型做了进一步研究.为建立蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂的筛选方法和中药在治疗免疫疾病和糖尿病上的开发和应用提供了理论依据.

受体相互作用蛋白激酶1(RIPK1)调控人结肠癌HT-29细胞程序性坏死的分子机制

目的研究受体相互作用蛋白激酶1(receptor interacting protein kinase 1,RIPK1)在人结肠HT-29细胞程序性坏死过程中的作用,并探讨E3泛素连接酶三重结构域包含蛋白16(tripartite domain containing protein 16,Trim16)对其作用的潜在调控机制。方法用肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNFα)建立HT-29细胞的程序性坏死模型,采用Annexin V-FITC/PI双染色法检测其对凋亡、坏死细胞数目的影响。分别用Western blot和qRT-PCR检测RIPK1在细胞程序性坏死中的表达。构建稳定表达Flag标记的RIPK1的HT-29细胞株,采用Flag标记的pulldown试验结合质谱检测发现与RIPK1有相互作用的新蛋白。应用NiNTA pulldown试验检测筛选出的E3泛素连接酶对RIPK1泛素化的调控。结果 TNFα能够成功诱导HT-29细胞程序性坏死。HT-29细胞在TNFα和半胱天蛋白酶抑制剂z-VAD处理后,表现出RIPK1、RIPK3、混合系列蛋白激酶样结构域(mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL)表达水平显著增加,并伴随着炎性因子白介素1α(IL1α)和白介素6(IL6)水平明显升高。Flag标记的pulldown试验结合质谱检测发现一个与RIPK1有相互作用的E3泛素连接酶Trim16,体外实验表明Trim16可以增强RIPK1的泛素化程度,其可能调节RIPK1在程序性坏死过程中的作用。结论 RIPK1在TNFα和z-VAD诱导人结肠癌HT-29细胞的程序性坏死过程中起重要作用,E3泛素连接酶Trim16对此过程可能有重要调控作用。

BMAL1减轻H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞损伤机制研究

目的探讨脑和肌肉组织芳香烃受体核转运蛋白的类似蛋白1(BMAL1)通过核因子E2相关因子2(NRF2)调节活性氧(ROS)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体通路对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的心肌细胞损伤的影响。方法体外培养H9c2细胞和BMAL1稳定过表达的H9c2细胞,建立H_(2)O_(2)诱导的H9c2细胞损伤模型,并将细胞分为对照(Control)组、H_(2)O_(2)组、BMAL1过表达(BMAL1-OE)组、BMAL1过表达+H_(2)O_(2)(BMAL1-OE+H_(2)O_(2))组、BMAL1过表达+NRF2抑制剂(BMAL1-OE+ML385)组、BMAL1过表达+NRF2抑制剂+H_(2)O_(2)(BMAL1-OE+ML385+H_(2)O_(2))组。采用CCK-8法检测细胞活力,荧光探针2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯检测ROS生成,Western blot检测BMAL1、NRF2和NLRP3蛋白表达,酶联免疫吸附试验法检测白细胞介素(IL)-1β释放。结果与Control组相比,H_(2)O_(2)组H9c2心肌细胞活力减弱,ROS生成增多,BMAL1和NRF2蛋白表达水平降低,NLRP3蛋白表达水平升高,IL-1β释放增多(P<0.05);与H_(2)O_(2)组相比,BMAL1-OE+H_(2)O_(2)组H9c2心肌细胞活力升高,ROS生成减少,BMAL1和NRF2蛋白表达水平升高,NLRP3蛋白表达水平降低,IL-1β释放减少(P<0.05)。与BMAL1-OE+H_(2)O_(2)组相比,BMAL1-OE+ML385+H_(2)O_(2)组H9c2心肌细胞活力减弱,ROS生成增多,NLRP3蛋白表达水平升高,IL-1β释放增多(P<0.05)。结论BMAL1可减轻H_(2)O_(2)诱导的H9c2心肌细胞损伤,其机制可能与NRF2调节ROS/NLRP3炎症小体通路有关。

大黄鱼UBXN1基因鉴定及其过表达后的转录组分析

为探究一种包含泛素调节性X结构域的蛋白(ubiquitin regulatory X domain-containing protein,UBXN1)在大黄鱼抗盾纤毛虫感染中的作用,以及可能涉及的免疫信号通路。本实验克隆鉴定了大黄鱼UBXN1基因,并利用在线软件对其序列特征进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测UBXN1在健康大黄鱼各组织中的表达,及盾纤毛虫感染后的诱导表达变化;并进行了UBXN1的亚细胞定位;转录组测序分析了UBXN1过表达前后的差异表达基因。结果显示,UBXN1基因cDNA全长为915 bp,编码304个氨基酸。蛋白多重序列比对和结构预测表明UBXN1是一个进化保守的蛋白,包含UBA和UBX结构域。qRT-PCR分析表明UBXN1在所检测的11种组织中均有表达,脑中表达量最高,其次是肝脏、心脏和肾脏,在肌肉中表达量最低;盾纤毛虫感染大黄鱼后,UBXN1在脾脏、脑、肝脏和肾脏中表达量早期显著升高,后期逐步恢复至正常水平。亚细胞定位分析表明,UBXN1在大黄鱼肾脏细胞质和细胞核中均有表达。在293T细胞过表达UBXN1,转录组差异表达分析筛选到12个上调基因,4个下调基因,其中RPL41/RPL39/XIST/RNA45SN4表达量显著增加,而ATP8/ND4L表达量显著减少。研究表明UBXN1在大黄鱼抗寄生虫免疫应答中发挥重要作用。本实验为进一步研究UBXN1的免疫信号通路奠定基础。

温肺降浊方对血管性痴呆大鼠线粒体外膜蛋白的影响

目的:探讨温肺降浊方对血管性痴呆(VaD)模型大鼠FUN14结构域包含蛋白1(FUNDC1)、线粒体分裂蛋白1(Fis1)、线粒体融合蛋白1(Mfn1)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)等线粒体外膜蛋白的影响,探究本方可能的作用机制。方法:将24只大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组、温肺降浊方组,每组各6只。采用双侧颈总动脉永久性结扎法制备VaD大鼠模型,温肺降浊方组予以温肺降浊方药液,阳性对照组予以盐酸多奈哌齐。Morris水迷宫行为学测试检测各组大鼠认知水平,HE染色法检测各组大鼠海马组织病理形态,免疫荧光化学染色检测大鼠海马中FUNDC1与Fis1阳性细胞数表达,Western blotting检测FUNDC1、Fis1、Mfn1与Mfn2蛋白表达水平。结果:与假手术组相比,模型组大鼠逃避潜伏期延长、穿越平台次数减少(P<0.05),细胞破碎,核缩小,水肿化,海马中FUNDC1与Fis1阳性细胞表达量上升,FUNDC1、Fis1蛋白上升,Mfn1/2蛋白降低(P<0.05)。与模型组比较,阳性对照组和温肺降浊方组逃避潜伏期缩短、穿越平台次数增加(P<0.05),细胞核逐渐趋于正常,水肿化减少,FUNDC1与Fis1阳性细胞数及蛋白下降,Mfn1/2蛋白升高(P<0.05)。结论:温肺降浊方通过下调FUNDC1、Fis1蛋白水平,上调Mfn1/Mfn2蛋白维持线粒体动力学平衡,减轻海马神经元损伤,发挥脑保护作用。

益气升清方调节HIF-1α/NLRP3信号通路对缺血性脑卒中大鼠神经元焦亡的影响

目的 探究益气升清方调节缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)信号通路对缺血性脑卒中大鼠神经元焦亡的影响。方法 将SD大鼠随机分为假手术组(S组),模型组(M组),益气升清方低、中、高剂量组(3.465、6.930、13.860 g/kg)及益气升清方高剂量+HIF-1α激活剂DMOG组(13.860 g/kg益气升清方+40 mg/kg DMOG),每组15只。采用线栓法构建脑卒中模型。造模成功后进行神经功能缺陷评估;TTC染色评估脑梗死体积;ELISA法检测血清白细胞介素(IL)-1β、IL-18水平;HE染色检测缺血皮质区病理变化;TUNEL染色检测神经元凋亡;Western blot检测焦亡及HIF-1α/NLRP3通路相关蛋白表达。结果 与S组比较,M组神经功能缺陷评分、梗死体积、IL-1β含量、IL-18含量、神经细胞凋亡率、胞膜穿孔蛋白D-N端(GSDMD-N)、胱天蛋白酶1(Caspase-1)、HIF-1α、NLRP3蛋白水平均上升(P<0.05);与M组比较,低、中、高剂量益气升清方组神经功能缺陷评分、梗死体积、IL-1β含量、IL-18含量、神经细胞凋亡率、GSDMD-N、Caspase-1、HIF-1α、NLRP3蛋白水平均下调(P<0.05);DMOG减弱了高剂量益气升清方对缺血性脑卒中大鼠神经元焦亡的改善作用。结论 益气升清方可能通过下调HIF-1α/NLRP3信号通路减轻缺血性脑卒中大鼠神经元焦亡。

肺心病患者血清SCUBE1、CTRP5水平与病情发展及预后的相关性分析

目的:探讨肺心病患者血清信号肽-CUB-表皮生长因子结构域包含蛋白1(SCUBE1)、补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白5(CTRP5)水平与患者病情发展及预后的相关性。方法:选取2020年1月至2023年1月于本院就诊的160例肺心病患者,根据患者病情严重程度分为代偿组(n=80)和失代偿组(n=80);根据患者预后情况分为预后不良组(n=55)和预后良好组(n=105)。另选取同期来我院体检的健康者160例作为对照组。采用酶联免疫法检测受试者血清SCUBE1、CTRP5表达水平,比较分析各组血清SCUBE1、CTRP5表达水平差异;Logistic回归分析肺心病患者预后不良的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析SCUBE1、CTRP5水平对肺心病患者预后不良的预测价值。结果:肺心病组血清SCUBE1、CTRP5水平均显著高于对照组(P<0.05);代偿组血清SCUBE1、CTRP5水平均显著低于失代偿组(P<0.05);预后不良组有吸烟史占比、血清SCUBE1和CTRP5水平显著高于预后良好组(P<0.05);吸烟史、血清SCUBE1和CTRP5是引发肺心病患者预后不良的危险因素(P<0.05);血清SCUBE1、CTRP5联合预测肺心病患者预后不良的效能显著高于二者单独预测(Z _(SCUBE1-联合)=3.765,P<0.001;Z _(CTRP5-联合)=2.067,P=0.039)。结论:肺心病患者血清SCUBE1、CTRP5水平与病情发展及预后密切相关,且二者联合对患者预后具有较高的预测价值。

血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平预测急性肺栓塞严重程度及预后的价值

目的探讨血浆信号肽-CUB-表皮生长因子结构域包含蛋白1(SCUBE-1)、A解聚素和金属蛋白酶及血小板反应蛋白基序-9(ADAMTS-9)及血管生成素-2(ANG-2)水平预测急性肺栓塞(APE)严重程度及预后的价值。方法选取收治的APE患者121例,依据CT肺动脉栓塞指数(PAOI)分为轻度组34例(PAOI<30%)、中度组45例(30%≤PAOI≤50%)和重度组42例(PAOI>50%),根据APE患者预后情况分为预后良好组86例和预后不良组35例。采用酶联免疫吸附法测定血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平。应用多元logistic回归分析影响APE预后不良的危险因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平对APE预后不良的预测价值。采用Pearson相关分析血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平与心功能指标的相关性。结果预后不良组血浆SCUBE-1[(24.63±11.70)ng/mL vs.(10.17±5.12)ng/mL]、ADAMTS-9[(47.50±13.25)ng/mL vs.(24.28±7.63)ng/mL]及ANG-2[(15.38±6.27)ng/mL vs.(4.15±1.52)ng/mL]水平均明显高于预后良好组(P<0.001)。APE患者病情越重,血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平越高,重度组>中度组>轻度组(P<0.001)。多元logistic回归分析显示,PAOI、CRP、cTnI、BNP、D-二聚体、SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平升高是影响APE预后不良的危险因素(均P<0.05)。ROC曲线分析显示,SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2三项联合预测APE预后不良的曲线下面积最大(0.931,95%CI:0.868~0.996),其准确度为88.4%。相关分析显示,APE患者血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平与CRP、cTnI、BNP、D-二聚体及PAOI均呈正相关(P<0.05)。结论血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平升高与APE严重程度和预后不良有关,是APE预后不良的危险因素,三项联合对APE预后不良有较好的预测价值。