Ywhab通过靶向Hsp90aa1抑制小鼠B细胞淋巴瘤38B9细胞生长

目的:研究Ywhab在小鼠B细胞淋巴瘤发生发展中的作用,并探讨其可能的分子机制。方法:使用生物信息学分析Ywhab与弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的相关性。在小鼠B细胞淋巴瘤38B9细胞中感染逆转录病毒构建Ywhab基因过表达细胞系,并采用RT-qPCR和Western blot验证Ywhab的mRNA及蛋白(14-3-3β)水平;通过细胞计数法、CCK-8法和小鼠皮下成瘤实验检测Ywhab过表达对38B9细胞在体内外生长的影响;RT-qPCR和Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的表达;应用蛋白质免疫共沉淀联合蛋白质谱(CoIP-MS)筛选与14-3-3β特异性结合的蛋白并采用Western blot及分子对接分析进行验证。结果:Ywhab基因在DLBCL中低表达,其低表达预示DLBCL患者的临床预后较差。与正常小鼠骨髓B细胞相比,Ywhab在38B9细胞中低表达。Ywhab过表达能在体内外诱导38B9细胞凋亡,促进凋亡蛋白Puma、Noxa和Bax的mRNA及蛋白表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl2的mRNA及蛋白表达(P<0.05)。14-3-3β蛋白能特异性结合Hsp90aa1蛋白并抑制其表达,从而促进38B9细胞凋亡。结论:Ywhab能够显著诱导小鼠B细胞淋巴瘤38B9细胞凋亡,其机制可能是通过靶向抑制Hsp90aa1蛋白表达来实现的。

YWHAB基因通过PI3K/AKT通路调控肝细胞癌增殖和侵袭并重塑免疫抑制微环境

目的:探究PANoptosis关键基因YWHAB在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达水平和作用机制及其与肿瘤免疫微环境的关系。方法:来自南通大学附属医院肝胆胰脾外科的组织芯片和癌症基因组图谱(the Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库分析YWHAB在HCC中的表达及与预后的关系。体外构建HCC的PLC/PRF/5和Huh7的YWHAB敲低以及过表达模型,评估其肿瘤细胞的增殖和侵袭能力,并用Western Blot验证其通路。通过ssGSEA/TIDE/ESTIMATE 3种免疫浸润算法分析YWHAB对免疫环境的影响,并用体外CD8+T细胞杀伤实验进行验证。结果:YWHAB在HCC组织中阳性表达率为70.46%,在癌旁组织阳性表达率为20.46%,差异有统计学意义(P<0.05),YWHAB高表达与肿瘤包膜完整性、血管浸润、淋巴结转移、肿瘤分化程度和晚期TNM分期均明显相关(均P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析表明,YWHAB高表达患者总体生存(overall survival,OS)率明显降低(P=0.003)。体外实验证明,YWHAB能通过PI3K/AKT信号通路调控肿瘤细胞的增殖和侵袭。免疫微环境方面,YWHAB表达与辅助型T细胞2(R=0.402,P<0.05)、巨噬细胞(R=0.321,P<0.05)等抑制性免疫细胞浸润数量呈正相关,与免疫耗竭性检查标志物CD274、HAVCR2、PDCD1、TIGIT、LAG3和CTLA4等表达呈正相关。YWHAB低表达组显示出更好的免疫治疗敏感评分,当敲低YWHAB基因后,T细胞对肿瘤细胞的杀伤效果显著增强(P<0.05)。结论:YWHAB作为HCC的癌基因和不良预后标志物,可能通过调控PI3K/AKT通路途径而促进HCC的增殖和侵袭,且与免疫抑制微环境相关。