2007年深圳市Yamagata系B型流感病毒基因特性的分析

目的分析2007年深圳市Yamagata系B型流感病毒血凝素(HA)基因的特性。方法将2007年深圳市分离到的Yamagata系B型流感毒株进行血凝素HA片段核苷酸序列测定并推导出其氨基酸序列,用SIMMONIC软件和Mega软件对其进行分析。结果2007年在深圳市流行的Yamagata系B型流感病毒根据197-199位氨基酸的差异可以划分为A、B、C3个分支。分支C在197位上有糖基化位点的增加,而分支A、B则未在该区域呈现出糖基化位点的特征性结构。此外与今年的国内代表株B/Fujianxinluo/54/06相比,除了40号位点上的氨基酸变异为共同存在外,其余大多数的氨基酸点变异是散发存在的。部分的变异位点处在HA1区的抗原表位,可能会导致病毒的抗原性改变。结论2007年在深圳市流行的Yamagata系B型流感病毒与B/Fujianxinluo/54/06相比基因特性已发生变化,并呈现出多样性的变化趋势。

内蒙古自治区2015-2018年B Yamagata系流感病毒全基因组序列分析

目的了解2015-2018年内蒙古自治区B Yamagata系流感病毒的全基因组序列特征。方法采集流感样病例呼吸道标本进行流感病毒分离,提取病毒RNA,采用一步法RT-PCR扩增病毒全基因组序列并测序,通过生物信息学软件分析病毒基因特征。结果本次研究的B Yamagata系流感病毒全基因与B/Phuket/3073/2013疫苗株的核苷酸同源性在97.7%～99.9%之间;B/Inner Mongolia/1200/2015和B/Inner Mongolia/1178/2015毒株发生抗原漂移,并出现HA-BY/NABV系间重配现象;所有毒株对神经氨酸酶抑制剂敏感。结论 2015-2018年内蒙古自治区B Yamagata系流感病毒抗原性和基因特征在逐渐发生变异,出现系间重配株,部分流感流行株与疫苗匹配性不佳。

乙型流感病毒Yamagata系毒株的消失及其疫苗株更换的思考及讨论

乙型流感病毒B/Yamagata系毒株作为季节性流感病毒,已流行近半个世纪。期间,B/Yamagata系毒株与其他亚型或谱系流感病毒一样,经过不断变异和进化,形成多个流行分支。2014年,世界卫生组织(World Health Organization,WHO)推荐B/Yamagata系3A分支B/Phuket/3073/2013为候选疫苗株,之后,3A分支病毒一直为B/Yamagata系的优势毒株。2020年3月以来,全球再未分离到B/Yamagata系毒株,B/Yamagata系毒株可能已在人间消失。近期,关于去除掉四价流感疫苗中B/Yamagata组分的建议越来越明确。本文回顾了乙型流感及其疫苗株的发展历史,客观分析了B/Yamagata系毒株消失的可能原因,综合描述了病毒学、流行病学、免疫学以及与疫苗免疫相关的社会科学、疫苗生产企业等多学科、多部门的观点,并对防止B/Yamagata系毒株重现提出建议,同时也建议疫苗监管部门和生产企业做好工作计划,为四价疫苗更换为三价疫苗做好充分准备。

B/Yamagata系流感病毒血凝素(HA)蛋白疫苗的筛选研究

目的:筛选表达量高且具有血凝抑制活性的B/Yamagata系流感病毒血凝素(HA)重组蛋白。方法:以B/Singapore/INFTT-16-0610/2016的HA为基础,在HA胞外区C末端分别融合GCN4pLL三聚化基序、GCN4pLL-半胱氨酸及GCN4pLL-七鳃鳗可变淋巴细胞受体-B(VLR-B)抗体C端的肽段序列,分别获得HA突变体基因BY-T、BY-LLc及BY-PLc;分别插入pFastBac1,采用杆状病毒昆虫细胞表达系统进行表达。表达鉴定后,Strep-Tactin亲和层析纯化,然后鉴定纯化突变体蛋白的寡聚程度及血凝活性。突变体蛋白免疫小鼠,检测免疫血清HA特异性Ig G抗体和血凝抑制(HAI)抗体水平。结果:各HA突变体均能够有效表达,BY-T突变体表达水平最高,易于纯化,纯度好,呈多聚化形式存在;BY-LLc及BY-PLc表达水平次之,呈高聚化形式存在。三种HA突变体蛋白的血凝活性相当,均可有效诱发的HA特异性结合的Ig G抗体和HAI抗体。结论:HA蛋白胞外区C端融合寡聚化基序GCN4pLL的突变体易于纯化,具有血凝活性,可诱发小鼠产生HA特异性抗体和HAI抗体。研究为B/Yamagata系流感病毒重组蛋白疫苗的研发策略提供了参考。

Yamagata系乙型流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立

目的制备Yamagata系乙型流感病毒血凝素蛋白(hemagglutinin,HA)的特异性单克隆抗体,建立检测Yamagata系乙型流感病毒的双抗体夹心ELISA方法。方法用Yamagata系乙型流感病毒(B/Phuket/3073/2013)抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞进行融合,通过4次有限稀释获得阳性杂交瘤细胞并建株。将单克隆抗体1F7和2H6分别作为捕获抗体和检测抗体,建立一种检测Yamagata系乙型流感病毒的双抗体夹心ELISA法。结果该方法中捕获抗体1F7在96孔板的包被量为40 ng/孔,检测抗体2H6工作浓度为100 ng/孔;该方法仅能与Yamagata系乙型流感病毒发生反应,具有较强特异性。灵敏度分析显示,该方法对病毒尿囊液和病毒纯化HA蛋白最低检测值分别为2-1 HAU/100μL和1.22 ng/mL,具有较高灵敏度。重复性试验表明,该方法批内和批间重复性变异系数均小于5%。结论本研究建立的ELISA方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为Yamagata系乙型流感病毒快速诊断及定量检测提供技术支持。

2017年深圳市学校乙型/Yamagata系流感传播动力学研究及防控措施评价

目的探讨2017年深圳市乙型Yamagata系(B/Y)流感在学校暴发疫情中的传播能力,评价疫苗接种和隔离措施的防控效果。方法运用SEIAR动力学模型对暴发现场调查数据进行模拟,计算疫情的基本再生数(R0)评价B/Y的传播能力;设计SEIARV疫苗接种模型和SEIARQ隔离模型,计算累计罹患率(TAR)和暴发持续时间(DO),评价疫苗接种与隔离措施的防控效果。结果 2017年深圳市B/Y流感暴发疫情的R0为5.97(95%CI:3.66~8.28);无干预措施下模拟疫情将持续52 d,TAR为99.57%。模拟单独采取在疫情发生前接种流感灭活疫苗(IIV),当接种比例为30%、50%和70%时,接种三价流感灭活疫苗(IIV3)或四价流感灭活疫苗(IIV4)的TAR分别为80.51%/76.81%、65.07%/58.48%和44.06%/33.77%;模拟单独采取疫情发生后应急接种,当接种比例为30%、50%和70%时,接种IIV3/IIV4的TAR分别为85.94%/82.46%、73.55%/67.03%和57.90%/47.54%;当接种比例≥50%,如采取疫情发生前疫苗接种+隔离的联合干预措施,TAR均<1%;如采取疫情发生后应急接种+隔离,TAR均<5%。结论 2017-2018年流感季B/Y在学校暴发疫情中传播能力较强;无论接种IIV3或IIV4,高覆盖率的疫苗接种结合隔离措施是有效的流感防控措施。

2012年邯郸市乙型Yamagata系流感病毒HA1基因变异分析

目的研究邯郸市2012年流感监测中分离的Yamagata系乙型流感毒株HA1的抗原性和基因特性，阐明HA1基因的变异与流感流行的关系。方法用MDCK细胞分离培养流感病毒，提取病毒核酸，采用RT—PCR方法特异性扩增病毒HA1基因，进行核苷酸序列测定，用DNAStar中Megalign软件进行分析。结果2012年分离的Yamagata系乙型流感病毒与2008-2009年代表株B／Florida／4／2。06相比亲缘关系较远，核苷酸同源性为96．2％～96．8％，氨基酸同源性为96．5％～97．4％，HA1区9个位点氨基酸发生替换，其中6个参与抗原表位构成；与WHO推荐的2012～2013年疫苗株B／Wisconsin／01／2010相比亲缘关系近，核苷酸同源性为98．8％～99．4％，氨基酸同源性为97．4％～98．5％，有5个位点发生氨基酸替换，其中3个参与抗原表位的构成；与国家流感中心提供的标准抗血清的血凝抑制滴度≥1：640。结论邯郸市2012年分离的Yamagata系乙型流感病毒血凝素蛋白HA1与B／Florida／4／2006相比已形成新的变种，与B／Wisconsin／01／2010相比也发生了新的变异，但尚不能确定是否形成Yamagata系有代表性的新变种。

新余市2013年-2014年B型Yamagata系流感病毒HA1基因特性分析

目的了解2013年-2014年新余市Yamagata系乙型流感病毒的序列特性和变异特点,分析WHO推荐流感疫苗株对人体的保护情况。方法选取新余市2013年-2014年通过狗肾传代细胞（MDCK）培养分离到的Yamagata系乙型流感毒株9株,提取病毒RNA,反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增HA1基因片段,对序列进行处理和特性分析。结果 2013年-2014年的乙型流感病毒均为B型Yamagata系。9株流感毒株HA1区与疫苗推荐株B/Wisconsin/01/2010的核苷酸同源性为97.8%～99.4%,氨基酸替换数为3个～4个,其中8株均在3个相同的氨基酸位点发生变异;与代表株B/Yamagata/16/1988的核苷酸同源性为94.4%～96.2%。B/Jiangxi Yushui/1221/2014与疫苗株B/Massachusetts/02/2012的核苷酸同源性为99.3%,氨基酸替换数为3个。结论新余市2013年-2014年B型Yamagata系流感病毒都发生了抗原性变化,WHO推荐的2011年-2012年疫苗对88.89%的B型Yamagata系流感仍有预防效果,当年度的疫苗株能很好地预防另外11.11%流感的流行。

2017-2018年流感流行季河北省乙型Yamagata流感病毒耐药性及耐药位点分析

目的分析河北省2017-2018年流感监测年度乙型Yamagata流感病毒对神经氨酸酶抑制剂(neuraminidase inhibitor,NAI)的耐药情况,为流感的临床治疗及预防控制提供依据。方法选取28株乙型Yamagata流感病毒,检测病毒对奥司他韦和扎那米韦的药物敏感性。选取14株乙型Yamagata流感病毒,提取核酸后对神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因进行PCR扩增,测序后对耐药位点进行分析。结果选取的28株乙型Yamagata流感病毒全部对奥司他韦和扎那米韦敏感,对奥司他韦的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))平均为13.93 nM(4.54~32.07 nM),对扎那米韦的IC_(50)平均数为1.38 nM(0.14~5.61 nM)。NA基因的全部耐药位点未发现耐药突变。结论河北省2017-2018年流行的乙型Yamagata流感病毒对NAI类药物敏感。

莆田市2013—2018年流感病毒B/Yamagata系HA1基因特征分析

目的分析莆田市乙型流感病毒B/Yamagata系毒株血凝素HA1区基因变异特征和种系进化关系,为流感防控提供数据支持。方法选取2013—2018年的26株B/Yamagata系原始标本,对HA1区进行测序,运用DNAstar 7.1进行同源性分析,用Mega 7.0构建进化树。结果与相应年份WHO推荐的疫苗株相比,2013年和2015年莆田市B/Yamagata系毒株HA1区同源性分别为94.6%~95.0%和95.8%~95.9%,普遍存在150、165、202抗原决定簇氨基酸位点变异。2016—2018年B/Yamagata系毒株基因变异较小,同源性为98.1%~99.2%,均出现D196N位点的变异。结论莆田市2013年和2015年B/Yamagata系毒株与疫苗株匹配程度不高,且抗原特性改变较大。2016—2018年B/Yamagata系毒株HA1区基因同源性较高,WHO推荐疫苗株B/Phuket/3073/2013对人群仍有良好的免疫保护作用。

甲型和乙型流感病毒感染A549细胞后固有免疫分子的比较研究

目的:探讨固有免疫应答在人肺腺癌细胞A549感染流感病毒进程中的作用。方法:采用100TCID50 A/Brisbane/02/2018(A/BR18,H1N1)和B/Phuket/3073/2013(B/PH13,B Yamagata)流感病毒感染A549细胞,Hoechst染色和流式细胞术检测细胞凋亡,qPCR检测感染后24 h、48 h、72 h细胞因子IFN-α、IFN-β、TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8、IL-10及TLR7、Mx1 mRNA水平。结果:与PBS组比较,H1N1组和BY组A549细胞出现不同比例细胞凋亡(P<0.01);H1N1组和BY组IFN-αmRNA水平在感染24 h、48 h、72 h时均升高(P<0.01),IFN-βmRNA水平在48 h和72 h时显著升高(P<0.01);H1N1组和BY组TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-15 mRNA水平在感染48 h、72 h时明显升高(P<0.01),IL-10 mRNA水平随感染时间延长呈降低趋势,IL-13 mRNA水平在感染72 h时H1N1组高于BY组(P<0.05);H1N1组和BY组TLR7和Mx1 mRNA水平在感染各时间点均有不同程度升高(P<0.05)。结论:固有免疫分子TLR7、促炎细胞因子及炎症抑制因子参与A549细胞抗病毒感染进程,甲型H1N1毒力、致病性和病毒活跃度均高于乙型B Yamagata。

近代日本第二届山县内阁与宪政党关系之考察

作为藩阀政治家中保守势力的代表人物,山县有朋在政治理念上并不认同政党政治,故坚决拒绝党员入阁。其与宪政党合作的直接目的是完成甲午战后经营计划,在两届议会上通过预算案及各项重要法案。山县阀代表人物桂太郎通过与宪政党合作的亲身实践体会到藩阀与政党合作的限度,充分认识到如要按照自己的设想施政和适应政治转型的现实需求,唯有组建政党。以星亨为首的宪政党将二者间的合作定位于政党内阁成立的准备过程,通过合作,在金钱方面获得了巨大利益,扩大了城市资产阶级对宪政党的支持基础,亦有力地扩张了其在地方的党势。但由于终究难以进入到政权的核心,促使其深刻认识到唯有以藩阀同化于政党的途径将开明派藩阀政治家——伊藤博文引入政党,实现藩阀政党化,才能建立政党政治。双方的分裂最终促成了二战前日本两大政党——立宪政友会和立宪同志会的相继成立。

流感季来临,如何预防流感的发生

流感是怎么传播的流行性感冒简称流感,是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病。流感病毒分为甲、乙、丙、丁四型,目前引起流感季节性流行的病毒是甲型病毒中的H1N1、H3N2亚型及乙型病毒中的Victoria和Yamagata系。

珠海市2007-2008年乙型流感病毒基因特性分析

目的了解珠海市近两年乙型流感病毒的基因变异情况。方法采集珠海市流感样病例样本进行流感病毒的分离和鉴定,并对分离到的乙型流感病毒进行核酸的提取,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增病毒基因后进行病毒血凝素HA1基因核苷酸序列测定,用Mega、DNA Star、GeneDoc软件对测序结果进行分析处理,并与WHO推荐的疫苗株基因序列进行比对。结果 2007-2008年分离的乙型流感毒株分属于Yamagata系和Victoria系两个谱系,谱系内毒株间距离很近。Yamagata系毒株与B/Brisbane/3/2007的核苷酸同源性极高,在99.4%~99.7%之间;Victoria系乙型流感病毒株与B/Malasia/2506/2004的核苷酸同源性亦很高,在98.6%~99.1%之间。与疫苗株和其它流行株相比,本次分离的两个谱系毒株均未发现核苷酸的丢失和插入,但均增加一个潜在的糖基化位点。结论珠海市人群交替流行着Yamagata系和Victoria系两个抗原性不同的进化系的乙型流感病毒,病毒的基因发生了变异。2007-2008两年WHO推荐的乙型流感疫苗株与我地区当年流行株为不同谱系毒株,预防保护效果不好。

浙江省乙型流感病毒HA_1基因分析

目的：了解浙江省近几年乙型流感病毒的基因变异情况和WHO推荐流感疫苗株对浙江省人体的保护情况。方法：采集浙江省类流感样本进行流感病毒的分离和鉴定，并对分离到的乙型流感病毒进行核酸的提取，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增病毒基因后进行病毒血凝素HA1基因核苷酸序列测定，用DNAMAN和BioEdit生物软件对测序结果进行分析处理，并与WHO推荐疫苗株基因进行比对。结果：分离到Yamagata系和Victoria系两个进化系的乙型流感病毒，两系毒株均未发现核苷酸的丢失和插入，糖基化位点没有太大改变。毒株之间核苷酸的同源性为95.25%，氨基酸的同源性为95.28%。Yamagata系毒株HA1区域核苷酸序列长度为1038 bp，推导的氨基酸序列长度为346个，氨基酸变异替换数在6-8之间；Victoria系毒株HA1区域的核苷酸序列长度为1041 bp，推导的氨基酸序列长度为347个，氨基酸变异替换数在2-8之间，相比Yamagata系毒株在163位上都多1个天冬酰胺（N）。基因进化树上可见明显的Yamagata系和Victoria系两个分支。结论：浙江省人群交替流行着Yamagata系和Victoria系两个抗原性不同的进化系的乙型流感病毒，病毒的基因发生了变异，抗原已发生漂移。2001、2006两年WHO推荐乙型流感疫苗株与我省当年流行株为不同谱系毒株，预防保护效果不够理想，其余年份为同一谱系毒株，预防保护效果较好。

1998～2002年广州地区儿童B型流感病毒亚型监测

目的 了解 1998～ 2 0 0 2年广州地区儿童B型流感病毒的亚型流行分布和特点 .方法 对疑似流感样症状的儿童取咽分泌物 ,接种到MDCK放 33℃温箱培养 4 8～ 72小时 .MDCK细胞上清液进行血凝试验 .结果 2 84 8例中 117例分出B型流感病毒 ,总阳性率为 4 .1% . 1998年为 5 % ,1999年B型流感病毒阳性率为 1.9% ,2 0 0 0年为 4 .3% ,2 0 0 1年为 3.3% ,2 0 0 2年为 6 .1% .1998～ 2 0 0 1年广州地区儿童B型流感病毒流行为Yamagata型 ,2 0 0 2年为Victo ria型 .结论 1998～ 2 0 0 2年广州地区儿童B型流感病毒存在两个亚型感染 ,但没有发现 2个亚型在同一流行时间同时出现 .2 0 0

2016—2019年北海市人民医院流行性感冒流行病学特征分析

目的分析北海市人民医院近年来流行性感冒(简称“流感”)的流行特征和病毒变化。方法从《国家疾病监测信息报告管理系统》中导出北海市人民医院2016—2019年报告的流感病例资料,应用Logistic回归分析和χ2检验方法对流感病例的流行特征和病毒检测结果进行分析。结果2016—2019年北海市人民医院共报告流感病例2566例,其中2019年报告1982例;报告病例数男性(1398例)较高,年龄集中在25~59岁(790例),发患者群以散居儿童为主(1402例),发病高峰在12月至次年1月;共检出流感病毒833株,其中,甲型流感485株(H1N1289株),乙型流感348株(Victoria 194株)。15~24岁年龄段者患乙型流感的风险比0~4岁高,男性患乙型流感的风险比女性高,差异均具有统计学意义(P<0.05);5~14岁年龄段者患H3N2流感的风险比0~4岁高,而60岁以上者患Yamagata流感的风险比0~4岁高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论流行性感冒具有春冬高发的特性;甲型流感病毒为优势毒株,尤其是H1N1;15~24岁年龄段者更容易患乙型流感;2019年呈爆发流行,要继续加强流感的监测和爆发流行趋势的预测。

新冠疫情下话流感

流行性感冒(简称流感)是流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病。全国流感监测结果显示,每年10月我国各地陆续进入流感流行季节。流感病毒分为甲、乙、丙、丁四型。目前感染人的主要是甲型流感病毒中的H1N1、H3N2亚型及乙型流感病毒中的Victoria和Yamagata系。