益肾养髓方对脊髓型颈椎病大鼠脊髓神经元轴突再生的影响

目的观察益肾养髓方对脊髓型颈椎病(CSM)大鼠脊髓神经元轴突再生的影响,探讨其潜在机制。方法54只雌性SD大鼠随机分为空白对照组8只、假手术组8只、造模组38只,采用吸水膨胀材料压迫脊髓法制备CSM大鼠模型,将成模大鼠分为模型组和益肾养髓方低、中、高剂量组,给药组分别予相应剂量药液灌胃,1次/d,连续4周。采用Basso Beattie Bresnahan(BBB)评分法评价大鼠运动功能,透射电镜观察脊髓神经元轴突变化,RT-qPCR及Western blot检测脊髓组织生长相关蛋白-43(GAP-43)mRNA及蛋白表达。结果与空白对照组及假手术组比较,模型组大鼠BBB评分明显降低(P<0.05),脊髓神经元髓鞘可见“洋葱皮”样松解,轴突退化萎缩,脊髓组织GAP-43 mRNA及蛋白表达有升高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,益肾养髓方各剂量组大鼠BBB评分明显增加(P<0.05),髓鞘脱失、轴突退化有不同程度改善,益肾养髓方低、中剂量组大鼠脊髓组织GAP-43 mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论益肾养髓方可有效改善CSM大鼠运动功能,其机制可能与上调脊髓组织GAP-43表达,促进脊髓神经元轴突再生有关。

益肾养髓方对脊髓型颈椎病大鼠脊髓中神经营养因子表达的影响及其神经修复作用研究

背景骨关节退行性改变压迫脊髓所致的脊髓型颈椎病(CSM)与脊髓急性损伤在病理特点及治疗策略方面存在差异,中医药治疗退行性CSM有着独特优势,临床应用广泛,但脊髓慢性压迫相关的治疗机制研究较少。目的研究益肾养髓方对脊髓慢性压迫大鼠脊髓(C_(5~7))神经生长因子(NGF)、神经营养因子3(NT3)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的mRNA表达水平影响及NGF的蛋白表达和分布情况,探讨益肾养髓方促进CSM神经功能修复的作用机制。方法2019年1月选取SPF级雌性SD大鼠96只,其中72只大鼠采用吸水膨胀材料聚乙烯醇丙烯酰胺互穿网络水凝胶(由北京师范大学化学学院提供)压迫脊髓的方法进行造模,余24只大鼠假手术(假手术组)。造模成功的大鼠随机分为模型组(n=24)、中药高浓度组(n=16)、中药中浓度组(n=16)、中药低浓度组(n=16)。中药灌胃的各组按照对应浓度进行灌胃(大鼠灌胃给药剂量采用体表面积系数换算系数6.3计算,高浓度为16.74 g·kg^(-1)·d^(-1)、中浓度为8.37 g·kg^(-1)·d^(-1)、低浓度为4.19 g·kg^(-1)·d^(-1)),药液浓缩后以1 ml/100 g体积灌胃给药,模型组及假手术组灌服等量(1 ml/100 g)0.9%氯化钠注射液,1次/d。分别于术后2、4、6、8、10周时,评价各组大鼠运动功能指数评分(BBB评分);术后2、6、10周时,尼氏染色法观察大鼠脊髓前角正常神经元的尼氏体分布,实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测大鼠脊髓营养因子NGF、NT3、GDNF的mRNA表达水平、免疫组织化学分析NGF脊髓前角区蛋白表达及分布情况。结果(1)术后2周,假手术组BBB评分高于模型组、中药高浓度组、中药中浓度组和中药低浓度组(P<0.05);术后4周,假手术组BBB评分高于模型组、中药高浓度组、中药中浓度组和中药低浓度组(P<0.05);术后6周,假手术组BBB评分高于模型组、中药高浓度组、中药中浓度组和中药低浓度组(P<0.05),模型组BBB评分低于中药高浓度组(P<0.05),中药高浓度组BBB评分高于中药中、低浓度组(P<0.05);术后8周,假手术组BBB评分高于模型组、中药高浓度组、中药中浓度组和中药低浓度组(P<0.05),模型组BBB评分低于中药高浓度组(P<0.05),中药高浓度组BBB评分高于中药中、低浓度组(P<0.05);术后10周,假手术组BBB评分高于模型组、中药高浓度组、中药中浓度组和中药低浓度组(P<0.05),模型组BBB评分低于中药高、中浓度组(P<0.05),中药高浓度组BBB评分高于中药中、低浓度组(P<0.05)。(2)术后2周,假手术组脊髓前角运动神经元形态正常,可见大量虎斑状尼氏体,丰富饱满;模型组脊髓前角神经元细小,形态为圆形,分布稀疏,胞内尼氏体溶解减少甚至消失;在术后6、10周时,中药高、中浓度组神经元虽有一定程度损伤,但细胞形态丰满、可见细胞内虎斑状尼氏体;中药低浓度组可见少量空泡,神经元细胞分布略稀疏,单个细胞内尼氏体数目比中药高、中浓度组含量少。术后2周,假手术组正常神经元数目多于模型组(P<0.05)。术后6周,假手术组正常神经元数目多于模型组、中药中浓度组和中药低浓度组(P<0.05),模型组正常神经元数目少于中药高浓度组(P<0.05),中药高浓度组正常神经元数目多于中药低浓度组(P<0.05)。术后10周,假手术组正常神经元数目多于模型组、中药低浓度组(P<0.05),模型组正常神经元数目少于中药高浓度组(P<0.05)。(3)术后6周,中药高浓度组NGF mRNA表达水平高于假手术组、模型组和中药低浓度组(P<0.05),中药高浓度组NT3 mRNA表达水平高于模型组(P<0.05),中药高浓度组GDNF mRNA表达水平高于假手术组、模型组和中药中、低浓度组(P<0.05)。(4)假手术组和模型组中脊髓前角的神经元细胞NGF染色程度较浅,分布稀疏,中药高、中浓度组大鼠的脊髓前角神经元NGF染色较明显,细胞形态完整。术后6周,中药高浓度组NGF平均积分光密度值高于假手术组和模型组(P<0.05)。结论益肾养髓方可能通过增加脊髓中NGF、NT3、GDNF的mRNA表达水平,改善CSM大鼠的四肢运动功能,保护脊髓前角中正常运动神经元,从而达到促进神经修复的效果。

益肾养髓方对脊髓型颈椎病大鼠受损脊髓微血管再生的影响

目的观察益肾养髓方对脊髓型颈椎病(CSM)模型大鼠神经功能评分、受损脊髓组织形态及微血管形态的影响,初步探讨其作用机制。方法采用脊髓慢性压迫法建立CSM大鼠模型,将实验大鼠随机分为假手术组、模型组和益肾养髓方低、中、高剂量组,每组6只。各给药组给予相应药液灌胃。采用Basso Beattie Bresnahan(BBB)评分法评价大鼠脊髓功能,HE染色观察脊髓组织病理形态,免疫组化染色观察受压脊髓组织微血管数目变化。结果与假手术组比较,模型组大鼠BBB评分明显降低(P<0.05),脊髓组织可见大量纤维瘢痕组织及大空泡样改变,神经细胞核固缩,细胞肿胀、坏死,微血管数目明显减少(P<0.05);与模型组比较,益肾养髓方中、高剂量组大鼠BBB评分明显升高(P<0.05),脊髓组织空洞减小,胞浆逐渐增多,神经细胞形态趋于正常,微血管数目明显增多(P<0.05)。结论益肾养髓方可改善CSM模型大鼠行为学评分,减少纤维瘢痕组织产生,促进脊髓组织修复和局部微血管再生,改善微循环障碍。

益肾养髓方治疗脊髓型颈椎病的量效关系研究

目的:探讨益肾养髓方治疗脊髓型颈椎病(CSM)的量效关系。方法:首先建立CSM动物模型,建模成功大鼠随机分为模型组、益肾养髓方7个浓度梯度组(0.84,1.49,2.65,4.71,8.37,14.88,26.46 g·kg^(-1)),每组4只,另取4只作为假手术组。连续灌胃给药8周后,全部动物进行脊髓功能测定并处死,采用HE染色、尼氏体染色、免疫组化染色等方法,以Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)运动功能评分及受损脊髓中脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)、Fas、FasL、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)等的蛋白表达作为评价指标,初步探讨益肾养髓方治疗CSM的半数有效剂量(ED_(50)),确定方剂量效。结果:与模型组相比,益肾养髓方灌胃后可以改善大鼠的脊髓运动功能,BBB评分从浓度4.71 g·kg^(-1)开始差异有统计学意义(P<0.05);同时可以在一定程度上改善大鼠的脊髓形态,增加神经元细胞内尼氏体的数量,BDNF、Caspase3、NGF的表达从浓度2.65 g·kg^(-1)开始差异有统计学意义(P<0.05),FAS、FASL表达从浓度1.49 g·kg^(-1)开始差异有统计学意义(P<0.05)。益肾养髓方各给药组治疗CSM具有剂量依赖趋势,治疗CSM的ED_(50)为9.1 g·kg^(-1)。结论:益肾养髓方对慢性脊髓压迫大鼠具有较好的治疗效果,并可在一定程度上促进受损神经元细胞的修复。

益肾养髓方对脊髓型颈椎病大鼠脊髓中星形胶质细胞过度增殖的影响

目的观察益肾养髓方对脊髓慢性压迫大鼠脊髓(C;~C;)中胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)mRNA表达量及GFAP蛋白表达和分布的影响,以探讨益肾养髓方对脊髓型颈椎病(Cervical Spondylotic Myelopathy,CSM)大鼠脊髓中星形胶质细胞过度增殖和胶质瘢痕形成的作用。方法将56只健康雌性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、阳性对照组及益肾养髓方低、中、高剂量组,每组8只。模型组、益肾养髓方各剂量组及阳性对照组大鼠采用吸水膨胀材料压迫脊髓建立脊髓型颈椎病大鼠模型,假手术组仅手术暴露脊髓。手术后2周,益肾养髓方不同剂量组采用中药水煎剂灌胃,阳性对照组采用单唾液酸四己糖神经节甘脂钠肌注,其余组采用生理盐水灌胃,每日1次,连续4周。于给药后第1、3、7、14、21、28天进行大鼠运动功能评价(BBB评分)。术后6周时HE染色观察脊髓组织结构,RT-qPCR法检测大鼠脊髓GFAP的mRNA表达,免疫荧光观察GFAP蛋白表达。结果灌胃后益肾养髓方各组及阳性对照组大鼠BBB评分明显高于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05),说明益肾养髓方对改善脊髓型颈椎病大鼠脊髓功能有一定疗效。HE染色益肾养髓方各组及阳性对照组可见脊髓组织中瘢痕、空洞变少,胞浆逐渐增多,神经细胞形态接近假手术组。RT-qPCR及免疫荧光结果提示模型组GFAP mRNA及蛋白表达升高(P<0.05),益肾养髓方各组及阳性对照组可降低其表达,与模型组比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论益肾养髓方可降低脊髓慢性压迫性损伤大鼠脊髓中GFAP的表达,从而减少胶质瘢痕的形成,促进大鼠后肢运动功能恢复。

益肾养髓方治疗脊髓损伤作用机制的网络药理学研究

目的本研究主要通过网络药理学的技术和方法,探讨益肾养髓方治疗脊髓损伤的关键靶点及其作用机制。方法利用中药系统药理学数据库和分析平台、中药综合数据库搜集益肾养髓方中所有药物的化学成分,筛选其有效活性成分并预测其作用靶点。通过GeneCards、OMIM等数据库提取脊髓损伤疾病相关基因。随后获取药物与疾病的共同作用靶点,并将其上传至在线STRING11.0数据库构建蛋白质相互作用网络图,并对关键蛋白进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析。结果共获得益肾养髓方化学成分1071个,有效活性成分139个,药物靶点217个,脊髓损伤疾病相关靶点1524个,药物与疾病共同靶点118个。根据PPI蛋白互作网络的结果得出,益肾养髓方治疗SCI疾病的关键靶点为STAT3、AKT1、JUN、MAPK1、IL6、RELA等。GO功能富集分析主要提示与细胞因子受体结合、细胞因子活性、转录因子活性等相关。KEGG通路富集分析主要包括糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、PI3K-Akt信号通路、IL-17信号通路等。结论本研究从整体层面初步预测了益肾养髓方治疗脊髓损伤相关疾病的作用靶点与信号通路,为更深层次的研究提供了思路和方向。

Box-Behnken设计-响应面法优化通腑养髓方提取工艺研究

目的:优化通腑养髓方的提取工艺。方法:在单因素试验的基础上,考察提取时间、料液比、提取次数3个因素对芍药苷、盐酸小檗碱含量和共有峰总面积综合评分的影响,采用Box-Behnken设计-响应面分析法预测最佳提取工艺。结果:最佳提取工艺为2倍量水浸泡30 min,料液比1∶12,提取3次,每次1 h。验证试验表明与预测值相对误差为1.41%。结论:确定的提取工艺简便易行、稳定,可为进一步研究提供基础。

基于RNA测序的益肾养髓方对脊髓型颈椎病大鼠神经保护作用机制研究

目的采用RNA测序技术,从基因与分子层面探讨益肾养髓方治疗脊髓型颈椎病的潜在作用机制。方法30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和中药组,采用脊髓压迫法建立脊髓型颈椎病大鼠模型,中药组于术后1周开始予益肾养髓方灌胃,每日1次,连续8周。采用Basso Beattie Bresnahan(BBB)评分评估大鼠脊髓功能,透射电镜观察脊髓组织病理形态,RNA测序技术筛选各组差异基因并进行生物信息学分析,RT-PCR检测差异基因mRNA表达,Western blot检测差异基因蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠BBB评分显著降低(P<0.05);与模型组比较,术后4周开始,中药组大鼠BBB评分显著升高(P<0.05)。透射电镜观察显示,模型组脊髓组织髓鞘不完整,可见断裂或卷曲,神经元线粒体嵴断裂、缺失;中药组髓鞘结构排列较规则,线粒体形态破坏较轻。RNA测序技术筛选出假手术组与模型组差异基因303个(153个上调、150个下调),模型组与中药组差异基因341个(130个上调、211个下调),对差异表达基因取交集,得到117个共表达基因,显著性排名前3位的基因分别为Gpnmb、cd68、Caspase-1;差异共表达基因GO富集分析显示,生物过程主要涉及免疫、再生、代谢等,细胞组分包括细胞、胞外区、分子复合物等,分子功能包含受体调节活性等;KEGG通路富集分析显示,主要与CREB信号通路、神经活性配体-受体相互作用、PPAR信号通路等显著相关。RT-PCR和Western blot结果显示,与假手术组比较,模型组脊髓组织Gpnmb、cd68、Caspase-1 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05);与模型组比较,中药组脊髓组织Gpnmb、cd68、Caspase-1 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论益肾养髓方可能通过Gpnmb、cd68、Caspase-1等靶点治疗脊髓型颈椎病,涉及神经系统调节、免疫、代谢及反馈调节等诸多生物学过程,并通过CREB信号通路、神经活性配体-受体相互作用、PPAR信号通路等相关通路介导细胞凋亡、焦亡、炎症反应、氧化应激等发挥作用。

基于Nrf2通路研究通腑养髓方调控Wilson病模型TX小鼠神经细胞铁死亡的机制

目的基于核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor,Nrf2)信号通路观察通腑养髓方对Wilson病(Wilson’s disease,WD)模型TX小鼠神经细胞铁死亡的干预效应,并探讨通腑养髓方对WD神经细胞损伤的保护机制。方法以DL小鼠为正常对照,将TX小鼠随机分为模型组和通腑养髓方组,通腑养髓方组以通腑养髓方中药灌胃治疗30 d,模型组和对照组小鼠以生理盐水灌胃,末次灌胃后取各组小鼠脑组织。采用电感耦合等离子体质谱法检测小鼠脑组织铜、铁微量元素含量,免疫荧光染色技术检测小鼠脑组织转铁蛋白受体(transferrin receptor,TfR)表达水平,比色法检测小鼠脑组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,透射电子显微镜观察小鼠脑组织细胞线粒体形态变化,Fluoro-Jade B(FJB)染色观察小鼠神经细胞损伤程度,Western blot法检测小鼠脑组织铁死亡及Nrf2信号通路相关蛋白[Nrf2,铁蛋白重链(ferritin heavy chain,FTH1)、血红素加氧酶1(heme oxygenase 1,HO1)、醌氧化还原酶1(NADPH quinone oxidoreductase 1,NQO1)]表达水平。结果与正常对照组比较,模型组小鼠脑内铜、铁含量,TfR表达水平,MDA含量显著升高(P<0.05),SOD活性显著下降(P<0.05);与模型组比较,通腑养髓方组小鼠脑内铁含量,TfR表达水平,MDA含量显著降低(P<0.05),SOD活性显著升高(P<0.05)。模型组小鼠脑组织线粒体膜皱缩,嵴数量减少或消失,空泡产生;通腑养髓方组小鼠脑组织线粒体结构损伤程度明显减轻。与正常对照组比较,模型组小鼠神经细胞损伤程度显著增加(P<0.05);与模型组比较,通腑养髓方组神经细胞损伤程度显著减少(P<0.05)。模型组小鼠脑内谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)表达水平较正常对照组显著降低(P<0.05),通腑养髓方组脑内GPX4表达水平较模型组显著升高(P<0.05)。模型组小鼠脑内Nrf2、FTH1、HO1、NQO1表达水平较正常对照组显著降低(P<0.05),通腑养髓方组脑内Nrf2、FTH1、HO1、NQO1表达水平较模型组显著增加(P<0.05)。结论通腑养髓方通过上调TX小鼠神经细胞GPX4等铁死亡相关蛋白及Nrf2、FTH1、HO1、NQO1等Nrf2通路相关蛋白的表达水平,减轻铜蓄积所致的氧化应激,抑制神经细胞铁死亡,从而起到保护神经细胞的作用。

通腑养髓方治疗Wilson病疗效观察

目的评价通腑养髓方治疗Wilson病(Wilson’s disease,WD)的临床疗效。方法将58例患者随机分为治疗组(28例,采用通腑养髓方及西医常规治疗)和对照组(30例,采用西医常规治疗),疗程均为4周;治疗前后分别采用统一肝豆状核变性评分量表(united Wilson’s disease rating scale,UWDRS)对患者肝脏症状、神经系统症状和精神症状进行评分,根据治疗前后Goldstein分级变化判定疗效,根据总胆汁酸、总胆红素、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、谷氨酰转肽酶、白蛋白水平评价两组患者治疗前后肝功能;采用日常生活能力(activities of daily living,ADL)量表评价治疗前后患者生活自理能力水平。结果与治疗前比较,治疗组患者UWDRSⅠ部分、Ⅲ部分总分及UWDRS总分、标准分显著降低(P<0.05),且治疗组上述评分降低程度显著大于对照组(P<0.05);治疗组基于Goldstein分级的临床疗效显著优于对照组(P<0.05);治疗组治疗后总胆汁酸复常率显著大于对照组(P<0.05);治疗组治疗后ADL量表评分升高程度显著大于对照组(P<0.05)。结论通腑养髓方可有效改善患者神经精神系统症状,改善患者日常生活活动能力,部分改善肝脏功能,明显提高临床疗效。

鄂洲镜铭与古代铸镜工艺的若干问题考辨

该文通过对鄂州出土神兽镜中纪年铭文的研究,提出了对东汉、三国时期民间所采用历法的新见解。通过采用 古代范铸技术进行铸镜的模拟实验,证明了一些历史文献的正确与否。通过采用古代熔炼工艺熔炼青铜实验,对古代熔炉 及古代熔炼工艺有了进一步的认识。

补肝养髓方对老年性痴呆模型皮质神经元RNA和Nissl体的定量研究

目的:探讨补肝养髓方对自发老年性痴呆模型皮质神经元RNA和Nissl体的影响。方法:从21月龄昆明种小鼠筛选出自发老年性痴呆(记忆障碍)鼠,随机分为4组即空白对照组(老年性痴呆组)、西药对照组、补肝养髓小剂量组、补肝养髓大剂量组、另设老年学习记忆正常组(老年正常组)。用跳台实验检测学习记忆成绩;脑组织冰冻切片,细胞化学方法显示大脑皮质神经元内RNA和Nissl体,全自动显微图像分析系统定量检测相关脑区RNA和Nissl体含量。结果:补肝养髓方能显著改善自发老年性痴呆模型小鼠的学习记忆障碍,并明显增高大脑皮质锥体细胞的RNA和Nissl体含量,而且其作用呈现出一定的量效关系。结论:补肝养髓方改善自发老年性痴呆模型学习记忆障碍的机理可能与促进调节其大脑皮质的RNA代谢,改善学习记忆关键脑区的神经元结构有关。

补肝养髓法对老年性痴呆海马神经元RNA和Nissl体的定量研究

目的 观察补肝养髓法对自发老年性痴呆模型海马神经元内RNA和Nissl体的影响。方法 用跳台实验 (step -downtest)从 2 1月龄昆明种小鼠筛选出自发老年性痴呆 (记忆障碍 )鼠 ,随机分为空白对照组、西药对照组、补肝养髓小剂量组、补肝养髓大剂量组 ,另设老年学习记忆正常组 (老年正常组 )。西药对照组给以喜得镇 (Hydergine) 0 .6mg/kg ,补肝养髓小、大剂量组分别予补肝养髓方 6.80 g/kg及 2 0 .41g/kg ,连续 60d ,正常对照和痴呆对照组均灌以等量双蒸馏水 (DW ) ;脑组织冰冻切片 ,细胞化学方法显示大脑皮质和海马神经元内RNA和Nissl体 ,全自动显微图像分析系统定量检测相关脑区RNA和Nissl体含量。结果 补肝养髓法能显著增高大脑皮质和海马锥体细胞的RNA和Nissl体含量 ,而且其作用呈现出一定的量效关系。结论 补肝养髓方可明显改善自发老年性痴呆模型的学习记忆关键脑区海马的神经元结构 ,并显著改善其海马神经元的RNA代谢。

益肾养髓方对脊髓型颈椎病大鼠脊髓中细胞凋亡的影响

目的:观察益肾养髓方对脊髓型颈椎病大鼠脊髓中细胞凋亡及Fas/FasL-Caspase-8/-3通路的影响。方法:将大鼠随机分配至假手术组、模型组及益肾养髓方高、中、低浓度组,采用吸水膨胀材料压迫脊髓的方法建立脊髓型颈椎病动物模型,术后2周分别给予生理盐水或相应中药水煎剂灌胃。采用Basso Beatie Bresmahan(BBB)评分法测量大鼠运动功能,TUNEL染色评估细胞凋亡,RT-qPCR和Western Blot检测Fas、FasL、Caspase-8及Caspase-3表达情况。结果:造模术后2周,益肾养髓方各组及模型组BBB评分显著低于假手术组(P<0.05)。术后6周,益肾养髓方中浓度组BBB评分均显著优于模型组(P<0.05)。TUNEL染色显示,益肾养髓方各组细胞凋亡率均显著低于模型组(P<0.05)。术后6周,RT-qPCR检测显示,益肾养髓方高、中、低浓度组Caspase-3 mRNA表达水平均低于模型组(P<0.05),中、低浓度组Caspase-8 mRNA表达水平均低于模型组(P<0.05),高、中浓度组Fas mRNA表达水平均低于模型组(P<0.05),低浓度组FasL mRNA表达水平低于模型组(P<0.05)。Western Blot检测显示,益肾养髓方高、中、低浓度组Caspase-3蛋白相对表达量低于模型组(P<0.05),益肾养髓方中浓度组Caspase-8蛋白相对表达量低于模型组(P<0.05),中、低浓度组Fas及FasL蛋白相对表达量低于模型组(P<0.05)。结论:益肾养髓方可通过抑制Fas/FasL-Caspase-8/-3信号通路减少受损脊髓区域的细胞凋亡,进而改善脊髓型颈椎病。

益肾养髓方对脊髓型颈椎病大鼠线粒体自噬及血脊髓屏障功能的影响

目的:观察益肾养髓方对脊髓型颈椎病大鼠血脊髓屏障(BSCB)及其中线粒体自噬的影响。方法:27只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、益肾养髓方组,每组9只。采用吸水膨胀材料构建大鼠脊髓慢性受压模型。利用BBB评分、伊文思蓝(EB)染色、荧光显微镜观察、免疫荧光多重标记法和Western blot等技术,评估大鼠的运动功能、BSCB通透性、内皮细胞损伤和线粒体自噬的变化。结果:与模型组比较,益肾养髓方组大鼠在第3、7、14天BBB评分显著升高(P<0.05)。模型组大量神经元细胞受损,而益肾养髓方组神经元形态和数量有一定恢复趋势。益肾养髓方组Claudin-5、ZO-1、Occludin蛋白较模型组表达水平显著升高(P<0.01),EB渗出量显著下降(P<0.05)。益肾养髓方组LC3标记的自噬小体与Hsp60标记的线粒体有共定位信号(P<0.05),且LC3和Hsp60的荧光标记数量较模型组更多(P<0.05)。结论:益肾养髓方能显著调控线粒体自噬功能,减轻线粒体受损的程度,并有效缓解大鼠BSCB的损伤。

周原阳燧的合金成分与金相组织

A speculum was discovered in the Zhouyuan area and proved for the first time in archaeology to be a yangsui, an ancient instrument for getting fire in the sun. The present paper reports an analysis of its chemical composition and microstructure. The test results supplement the related record in the “Kaogong Ji” of Zhou Li (《周礼·考工记》) with important evidence. According to its chemical constituents and microstructure revealed, the material belongs to typical high-tin brone with a small amount of lead, and the inner and outer parts of the object are quite different in chemical composition.

益肾养髓方对脊髓型颈椎病大鼠小胶质细胞极化的影响

目的:观察益肾养髓方对慢性脊髓压迫大鼠模型受压脊髓组织小胶质细胞极化的影响。方法:50只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为假手术组、模型组、益肾养髓方高、中、低剂量组,采用吸水膨胀材料压迫脊髓的方法进行造模,给药后分别通过斜板试验、苏木精-伊红(HE)染色、蛋白质印迹(Western Blot)法检测、实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)评价大鼠的运动功能与CD86、CD206蛋白及IL-18、IL-1βmRNA的表达。结果:各时间节点的中药灌胃组、模型组斜板试验结果与假手术组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。中药中、高剂量组斜板试验结果均优于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);HE染色可见假手术组神经元细胞形态基本正常,模型组大量神经元细胞受损,细胞肿胀坏死,给药组神经元空泡样改变减少,细胞形态及数量有一定恢复。Western Blot法检测结果显示:与假手术组比较,模型组、中药各给药组CD86蛋白表达均高于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05);中药中、高剂量组CD206表达高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。中药中、高剂量组CD86/CD206低于假手术组和模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。RT-qPCR结果显示:中药中、高剂量组IL-18表达低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);中药中、高剂量组IL-1β表达低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:益肾养髓方可促使脊髓组织中M1型小胶质细胞向M2型分化,减轻脊髓受压时炎症反应,在一定程度上改善大鼠运动功能。

阳燧、方诸、透光镜

中国古代有三种特殊的铜镜:阳燧、方诸、透光镜。阳燧向日以取明火,方诸向月以取明水,这两种铜镜出现于春秋,宋以后退出历史舞台,故存世极少。另一种特殊的铜镜——透光镜因镜背厚薄不同,铸镜时冷却速度不同,及镜面凹凸不平、刮磨时难以消除而产生"透光"现象。宋代科学家沈括在《梦溪笔谈》中已经对透光镜的成因进行过正确的分析。透光镜从汉代一直到清朝道光年间都存在或流传过。

先秦两汉时期艾灸疗法的内在操作理路考略

笔者通过对先秦两汉时期一系列古文献的梳理、分析发现,先秦两汉时期艾灸疗法的内在操作理路与当时古人"泛鬼论"世界观下的"鬼祟"致病说有着密切的关联。大体而言,此一时期人们认为诸多疾病、尤其热性病证的发生多与"鬼祟"有关,而鬼祟多属赤、阳,按照"同类相治"的朴素原理,灸法的内在操作理路即深刻暗含此一内在认识:即运用"通天法器"阳燧引至阳之"天火"燃烧艾草熏烤或烧灼人体皮肤以达到驱鬼魅、除病邪的目的,这一分析也从侧面解释了学界长期困惑的"热病用灸"的理论依据。

通腑养髓汤高效液相色谱指纹图谱识别及主要成分含量测定

目的建立通腑养髓汤高效液相色谱(HPLC)指纹图谱和主要成分含量测定方法。方法采用HPLC法测定通腑养髓汤中芍药苷和盐酸小檗碱的含量,色谱柱为KR100-5-C18柱(250.0 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇(A)-0.1%磷酸溶液(B,0.03 mmol/L KH2PO4),梯度洗脱,流速1.0 m L/min,检测波长254 nm,柱温28℃。利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)对色谱图进行分析,并测定主要成分芍药苷和盐酸小檗碱的含量。结果建立了通腑养髓汤的特征指纹图谱,并指认出了12个共有峰中的2个主要共有峰芍药苷和盐酸小檗碱;芍药苷和盐酸小檗碱线性范围分别为125~4000μg/m L(r=0.9999)、18.75~600.00μg/m L(r=0.9999),平均回收率分别为96.96%,98.54%,RSD分别为2.29%,1.42%。结论建立的指纹图谱及含量测定方法可为通腑养髓汤的质量控制和评价提供参考。