基于单细胞测序数据分析养阴活胃合剂下调AQP3对MC细胞表型的影响及机制

目的 观察养阴活胃合剂对MC细胞(MNNG诱导人胃黏膜上皮细胞GES-1恶性转化)增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响,探讨其下调AQP3抑制IL-10/JAK1/STAT3信号通路激活进而阻断或逆转慢性萎缩性胃炎(CAG)病变的作用机制。方法 选取GEO数据库中的CAG单细胞转录组测序数据,绘制数据的表达矩阵。采用R语言的Seurat 4.3.0包进行处理后分群绘制UMAP可视化图谱。将MC细胞分为养阴活胃合剂组(YYHWM组)、AQP3低表达慢病毒转染组(AQP3低表达组)、养阴活胃合剂+AQP3高表达慢病毒转染组(YYHWM+AQP3高表达组)并以MC细胞和正常人胃黏膜上皮细胞GES-1分别作为模型组(MC组)和空白对照组(Control组)。采用平板克隆、划痕实验、Transwell及流式细胞术检测细胞表型变化情况,采用ELISA检测细胞培养上清IL-10表达水平,Western blot检测酪氨酸激酶1(JAK1)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)蛋白表达水平。结果 单细胞测序数据集分析显示AQP3在CAG样本及上皮细胞群中表达升高,AQP3可能通过IL-10抗炎性信号通路影响胃癌前病变病理进程。与MC组相比,AQP3低表达组和YYHWM组细胞侵袭、迁移、增殖能力减弱,凋亡率增加,细胞培养上清中的IL-10水平降低,细胞中JAK1、STAT3蛋白表达下调(P<0.05或P<0.01),YYHWM+AQP3高表达组差异均不显著(P>0.05)。结论 养阴活胃合剂可通过下调AQP3表达抑制IL-10/JAK1/STAT3信号通路激活进而减弱MC细胞侵袭、迁移及增殖能力,促进细胞凋亡进而阻断或逆转CAG病理进程。

基于网络药理学及实验验证探讨养阴活胃合剂治疗慢性萎缩性胃炎的作用机制

目的基于网络药理学预测养阴活胃合剂治疗慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)的活性成分及潜在靶点,通过动物实验进行验证PI3K-Akt、信号通路,为临床应用提供科学依据。方法通过中医药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)、SymMap数据库筛选得到中药的有效活性成分,同时从GeneCard、OMIM和DisGeNET数据库对CAG的靶点进行检索及筛选;预测其活性成分与疾病靶点,使用Cytoscape 3.7.1软件构建网络图,对该网络进行拓扑分析筛选节点,利用STRING数据库分析核心靶点蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,利用DAVID数据库对核心靶点基因进行GO和KEGG富集分析,探讨养阴活胃合剂治疗CAG的作用机制。实验验证:选用SPF级SD雄性大鼠,采用随机分配法分为空白组及造模组,利用N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG)及饥饱失常法等方法进行造模,造模成功后随机分为模型组、维酶素组以及养阴活胃合剂低、中、高剂量组,每组10只,连续干预56 d;通过HE染色观察各组SD大鼠胃黏膜病理组织的变化,IHC检测各组大鼠胃黏膜PI3K、AKT1、mTOR中蛋白的表达含量。结果从养阴活胃合剂中筛选出309个化学成分,涉及治疗CAG的靶点378个;筛选疾病靶点698个,共同靶点130个,根据节点自由度≥平均自由度,筛选核心靶点38个;通过GO、KEGG富集分析得到,养阴活胃合剂可以影响PI3K-Akt、TNF信号通路、MAPK信号通路、癌症相关等多个信号通路。养阴活胃合剂能够有效降低CAG模型大鼠胃组织中PI3K、AKT1、mTOR中蛋白表达情况(P<0.05)。结论养阴活胃合剂通过多通路、多靶点治疗CAG,可以有效改善CAG模型大鼠胃黏膜细胞的增殖、凋亡及炎症反应等,有效调控PI3K/Akt信号通路,能够有效改善CAG大鼠胃黏膜的损伤。

养阴活胃合剂对CAG大鼠胃黏膜细胞TLRs及相关信号转导通路的影响

目的:观察养阴活胃合剂对CAG大鼠胃黏膜细胞TLRs及其信号转导通路的影响,揭示养阴活胃合剂治疗CAG的治疗途径与作用靶点,分别从分子水平、蛋白水平阐述养阴活胃合剂治疗CAG的作用机制,并通过测定炎症因子的变化情况观察养阴活胃合剂在抗炎方面的作用。方法:将实验动物随机分为6组:空白对照组、模型组、阳性药物对照组及中药低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组16只。除空白对照组常规饲养、自由进食水之外,其余5组将2 g水杨酸钠加入100 m L的30%乙醇溶液中,给大鼠灌胃,1次/d,3 m L/次,配合隔日喂食不禁水法建立大鼠萎缩性胃炎模型,模型复制成功后中药治疗低、中、高剂量组分别喂饲养阴活胃合剂水煎剂0.74 g/kg·d、1.48 g/kg·d和2.22 g/kg·d。12周后测定血清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-β(IFN-β)诱导型一氧化氮合成酶(NOS2)四种炎症因子含量,测定TLRs及其下游转导元件m RNA及蛋白的含量。结果:养阴活胃合剂能够改善大鼠胃黏膜病理状态,使病变胃黏膜趋于正常。与空白对照组比较,各组炎症因子及TLRs及其下游信号转导元件蛋白及m RNA含量均明显升高(P<0.05),证明模型复制成功。与模型组相比,中药高剂量组TNF-α、IL-6、NOS2含量均明显降低,阳性药物对照组及各中药剂量组对TLRs及其下游信号转导元件蛋白及m RNA含量均有不同程度的降低,差异有统计学意义(P<0.05)。而各养阴活胃剂量组之间比较,中药中剂量组IFN-β降低,中药高剂量组TLRs及其下游信号转导元件蛋白及m RNA含量均有不同程度下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1)养阴活胃合剂可以通过调控TLR样受体及其下游转导元件基因及蛋白水平,降低因TLRs通路激活所释放的炎症因子对胃黏膜的损伤,从而达到治疗慢性萎缩性胃炎的目的。2)养阴活胃合剂可降低慢性萎缩性胃炎大鼠血清中炎症因子水平,而抑制炎性反应可能有助于慢性萎缩性胃炎病情的改善。

养阴活胃合剂对慢性萎缩性胃炎模型大鼠胃黏膜淋巴细胞瘤-2基因和三叶因子1表达的影响

目的探讨养阴活胃合剂对慢性萎缩性胃炎模型大鼠B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和三叶因子1(trefoil factor 1,TFF1)基因蛋白表达的影响及机制。方法将实验大鼠随机分为空白对照组、模型组、中药低、中、高剂量组及阳性药物对照组,每组16只。除空白对照组常规饲养、自由进食水外,均采用2 g水杨酸钠加入100 m L的30%乙醇溶液中给大鼠灌胃,每天1次,每次3 m L,配合隔日喂食不禁水法造成慢性萎缩性胃炎模型,模型复制成功后分别运用中药低、中、高剂量及维酶素治疗,采用免疫组化法检测大鼠胃黏膜Bcl-2及TFF1表达阳性细胞数,光镜观察胃黏膜病理组织学变化。结果采用单因素方差分析法,组间比较采用方差分析中的LSD法。与空白对照组(18.08%)比较,各组Bcl-2蛋白阳性表达率均明显升高(P<0.05);与模型组(43.41%)比较,应用养阴活胃合剂治疗后,中药高、中剂量组Bcl-2蛋白阳性表达率均明显降低(P<0.05)。与空白对照组(95.66%)比较,各组TFF1蛋白阳性表达率均明显降低(P<0.05),除中药高剂量组TFF1蛋白阳性表达率接近于空白对照组外(P>0.05);与模型组(84%)比较,中药高、中剂量组TFF1蛋白阳性表达率均明显升高(P<0.05)。结论养阴活胃合剂对CAG大鼠模型有良好的治疗作用,能够改善慢性萎缩性胃炎大鼠胃黏膜病理形态,提示养阴活胃合剂可能通过下调Bcl-2的表达,上调TFF1表达起到治疗效果。

养阴活胃合剂治疗慢性萎缩性胃炎的临床效果观察

目的探讨养阴活胃合剂治疗慢性萎缩性胃炎的临床效果。方法选取本院2012年10月~2013年11月收治的87例慢性萎缩性胃炎患者作为研究对象,随机分为研究组（43例）和对照组（44例）。研究组给予养阴活胃合剂治疗,对照组给予西医常规疗法治疗,两组治疗周期均为8周。治疗前后均进行胃镜和病理检查,比较两组的临床症状和体征的改善情况及总有效率。结果治疗后,研究组的总有效率分别为93.02%,显著高于对照组的68.18%,差异有统计学意义（P〈0.05）。研究组上腹胀痛、嘈杂、嗳气和纳呆食少等不适症状改善情况显著优于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论养阴活胃合剂治疗慢性萎缩性胃炎效果显著,可有效改善症状,值得临床推广应用。

养阴活胃合剂对慢性萎缩性胃炎大鼠血清胃蛋白酶原和胃组织水通道蛋白的影响

目的探究养阴活胃合剂治疗慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)的作用机制。方法将66只SD大鼠随机分为正常组,模型组,胃复春组,养阴活胃合剂高、中、低剂量组。采用综合法(氨水+脱氧胆酸钠+不同浓度乙醇+饥饱失常法)复制CAG模型,连续12周。采用ELISA法检测大鼠血清胃蛋白酶原Ⅰ(pepsinogenⅠ,PGⅠ)、胃蛋白酶原Ⅱ(pepsinogenⅡ,PGⅡ)水平及胃蛋白酶原比值(pepsinogen ratio,PGR)。采用RT-qPCR法检测胃组织水通道蛋白(aquaporin,AQP)1、AQP3和AQP4 mRNA表达水平。结果与模型组比较,养阴活胃合剂高、中、低剂量及胃复春可以提高大鼠胃液总酸度,改善胃液pH值(P<0.05);各给药组大鼠血清PGⅠ水平和PGR升高,PGⅡ水平降低;各给药组大鼠AQP1 mRNA表达水平降低,养阴活胃合剂中、低剂量组与胃复春组大鼠AQP3 mRNA表达水平明显升高(P<0.05),养阴活胃合剂高、中剂量组和胃复春组AQP4 mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。结论养阴活胃合剂通过升高血清PGⅠ水平和PGR,上调AQP3、AQP4 mRNA表达水平,降低PGⅡ水平和下调AQP1 mRNA表达水平改善CAG大鼠的胃酸分泌。

养阴活胃合剂对CAG大鼠胃内菌群组成及物种差异性分析

目的研究养阴活胃合剂对慢性萎缩性胃炎(Chronic atrophic gastritis,CAG)大鼠胃内菌群组成及物种差异的影响,探究养阴活胃合剂治疗CAG的作用机制。方法取SPF级雄性SD大鼠60只按随机数字表法分为空白组(10只)、CAG造模组(50只)。CAG造模组采用五因素复合造模法:单功能烷化剂甲基硝基亚硝基胍(N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG)+3%雷尼替丁大鼠饲料+饥饱失常法+30%乙醇灌胃+NaCl灌胃,持续10周,进行病理切片染色,以确定CAG模型造模成功;将造模组大鼠随机分为模型组、养阴活胃合剂低、中、高剂量组(养阴活胃合剂免煎颗粒剂,0.25 mL/100 g、0.5 mL/100 g、1 mL/100 g)及维酶素组(维酶素片0.2 g×2加入25 mL蒸馏水配制,0.5 mL/100 g),每组10只,持续干预8周后,观察并比较各组大鼠大体表征、HE染色观察胃窦组织病理学改变、16 s测序技术检测胃内菌群组成及物种差异性。结果与模型组大鼠比较,养阴活胃合剂低、中、高剂量组大鼠精神状态、胃黏膜损伤、腺体萎缩明显改善。在门、纲、目、科、属5种等级水平,与空白组比较,模型组有益菌拟杆菌门丰度显著降低,致病菌放线菌门、梭状芽胞杆菌纲丰度均显著升高(P<0.05);与模型组比较,养阴活胃合剂高剂量组有益菌振螺目丰度显著升高,养阴活胃合剂高剂量组致病菌放线菌门丰度均显著降低(P<0.05)。结论养阴活胃合剂治疗CAG的作用机制可能与其调节有益菌与致病菌丰度水平,并维持胃内微生物菌群稳态,促进胃肠道正常生理功能相关。

养阴活胃合剂治疗慢性萎缩性胃炎的临床疗效观察

目的探讨养阴活胃合剂对慢性萎缩性胃炎治疗的临床效果分析。方法选择我院2013年2月—2014年5月收治的75例慢性萎缩性胃炎患者为研究对象,随机分为对照组37例,实施常规西医疗法治疗,观察组38例使用养阴活胃合剂治疗,对两组患者治疗后效果进行分析。结果观察组治疗后的总有效率为94.74%,明显较对照组75.68%高,差异存在统计学意义(P<0.05);对照组不良反应发生率为24.32%,显著高于观察组5.26%(P<0.05);治疗后观察组复发率为5.26%,与对照组18.42%相比,差异存在统计学意义(P<0.05)。结论慢性萎缩性胃炎实施养阴活胃合剂治疗的效果显著,可有效控制不良反应发生,降低复发率,利于患者预后,值得推广。