Yeast基因下游二级结构与多聚腺苷作用信号

形成真核生物mRNA 3′末端的多聚腺苷 (poly (A) )作用涉及前体mRNA下游的三个元件 :效率元件(EE)、定位元件 (PE)以及实际的剪切和 poly (A)作用位点 ,实验研究提出了一些EE和PE的碱基序列组成 .对 180个Yeast基因下游 (终止密码子后 2 0 0个碱基 )二级结构进行的详细分析显示 ,约 86 %的EE、 89%的PE与二级结构中碱基非配对的环 (发夹环、膨胀环、内环或多分支环 )区或连接单链区有关 .这个结果提示 ,反式因子对EE和PE的识别和作用在一定程度上有赖于EE和PE的二级结构特征 .

Yeast基因组编码区特征参数的研究

以碱基成分偏移量D值[1]为基本参数定义参数d ,以d为Yeast编码区的特征参数 ,对Yeast的第1、2、3类ORF(openreadingframe)进行了统计 ,得到d的特征参数区间。并且 ,以此区间为标准对Yeast的6类ORF ,以及5′帽、3′尾、内含子、组分随机序列等非编码序列进行了检验。结果表明 ,用d作编码区的特征参数是可行的 ,它可以很好地区分编码序列和非编码序列。另外 ,又讨论了参数d与基因表达水平 (用CAI值来衡量 )的关系。发现 ,参数d与基因表达水平成很好的正相关关系 ;发现密码子的第1位点和第2位点的某些碱基分布与基因表达水平有关。

恢复connexin26表达联合载酵母菌胞嘧啶脱氨酶自杀基因纳泡杀灭膀胱癌细胞

目的分析载双基因的阳离子纳泡联合超声靶向微泡破坏技术进行基因转染的有效性,探索恢复或上调膀胱癌细胞的缝隙连接蛋白connexin26(Cx26)表达,能否增强自杀基因系统(yeast cytosine deaminase/5-fluorocytosine,YCD/5-FC)的旁观者效应,提高杀灭肿瘤细胞的效率。方法阳离子纳泡结合超声辐照(US)转染人膀胱癌T24细胞,荧光显微镜及流式细胞仪观测转染效率;qRT-PCR和Western blot检测质粒转染后的mRNA或蛋白相对表达量。将实验分为无处理空白对照、载pc DNA3.1-EGFP纳泡组、载Cx26纳泡组、载YCD纳泡组、载YCD+Cx26纳泡组;通过流式细胞术观察恢复Cx26表达后对膀胱癌细胞凋亡的影响。结果 qRT-PCR、Western blot显示纳泡结合超声辐照成功将目的基因转染并有效表达。恢复Cx26表达后,载YCD+Cx26纳泡组的细胞凋亡率为(60.68±2.61)%,明显高于单载YCD纳泡组的(46.42±2.13)%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论恢复缝隙连接蛋白Cx26表达,可改善细胞间通讯连接,加强自杀基因系统YCD/5-FC的旁观者效应,促进肿瘤细胞凋亡,提高杀灭膀胱癌细胞的效率。

人LNα4LG4-5在毕赤酵母中的表达研究

为实现人层粘连蛋白α4链LG4-5组件(Human Laminin Alpha4Chain LG4-5Module,hLNα4LG4-5)蛋白的分泌表达,采用DNA重组技术将hLNα4LG4-5cDNA片段插入分泌型酵母表达载体pPICZαA中,构建了相应的重组表达质粒pPICZαA-LG45并在GS115毕赤酵母菌株中表达,纯化蛋白后进行细胞学实验证明,hLNα4LG4-5有明显促进肿瘤细胞粘附和扩展的作用,为深入研究LG4-5组件结构与功能奠定了基础。