Sensititre YeastOne显色药敏板与微量肉汤稀释法检测阿萨希毛孢子菌体外药物敏感性比较研究

目的以CLSI微量肉汤稀释法为参考方法,探讨商品化显色药敏板(Sensititre YeastOne)检测阿萨希毛孢子菌体外药物敏感性的临床应用价值。方法分别用微量肉汤稀释法和Sensititre YeastOne同时检测62株阿萨希毛孢子菌对临床常用7种抗真菌药物的体外敏感性,MIC值读取时间分别为24h和48h。结果微量肉汤稀释法结果显示卡泊芬净和米卡芬净对阿萨希毛孢子菌无体外活性,二者MIC90均为16μg/mL;唑类药物对阿萨希毛孢子菌体外活性较好,培养24h MIC90分别为氟康唑8μg/mL、伏立康唑0.125μg/mL、伊曲康唑0.5μg/mL;4.8%(3/62)阿萨希毛孢子菌对两性霉素B有高MIC值(4μg/mL);经24h培养,Sensititre YeastOne与微量肉汤稀释法检测阿萨希毛孢子菌对7种抗真菌药物的体外MIC一致率(essential agreement,EA)分别为氟康唑93.5%,伏立康唑98.4%,伊曲康唑98.4%,两性霉素B 98.4%,5-氟胞嘧啶88.7%,卡泊芬净100%,米卡芬净100%;培养48h后,二者检测两性霉素B和5-氟胞嘧啶MIC一致率有所下降,分别为83.9%和67.7%;对微量肉汤稀释法而言,培养时间对两性霉素B和5-氟胞嘧啶MIC值影响较大,24h和48hMIC一致率分别为69.4%和53.2%,对Sensititre YeastOne,MIC值明显受培养时间影响的药物仅见于5-氟胞嘧啶,24h和48h MIC一致率为11.3%,其余药物不同MIC读取时间一致率非常好。结论唑类药物对阿萨希毛孢子菌体外抗菌活性较好,Sensititre YeastOne和微量肉汤稀释法检测阿萨希毛孢子菌体外MIC值一致率较高,用于临床阿萨希毛孢子菌体外药物敏感性检测具有一定的实用价值。

基于16SrDNA方法鉴定水生动物细菌性病原微生物及96孔板药敏分析技术的建立

建立基于16SrDNA快速鉴定水生动物体内细菌性病原微生物的PCR方法及96孔板药敏分析技术。通过该项技术分离检测水生动物生存环境中的细菌性病原微生物,对其生存地区疫病进行合理防控;96孔板耐药性分析技术,找出安全高效的药物,为科学地选择治疗药物提供重要的参考,避免渔用药物的滥用或误用。实验通过细菌的分离培养、PCR扩增、16SrDNA基因测序鉴定,筛选出致病微生物,并通过96孔板耐药性分析技术,筛选出敏感性药物。

奶牛乳房炎大肠杆菌刃天青微量板快速诊断及药敏试验

为了建立奶牛乳房炎大肠杆菌快速诊断与药敏试验方法,用刃天青钠取代大肠杆菌选择培养基MQQ中的酚红指示剂,通过对刃天青的工作浓度、大肠杆菌接种量和培养时间等参数的研究,建立了奶牛乳房炎大肠杆菌刃天青微量板快速诊断方法。将不同细菌及其感染模拟奶样进行刃天青微量板快速培养结果显示,此刃天青微量板对大肠杆菌具有很强的选择培养特性,能在10h内获得明确诊断结果,并能反映奶牛乳腺大肠杆菌感染强度。对89份临床奶样进行大肠杆菌刃天青微量板快速诊断敏感性和特异性检测,结果显示,此刃天青微量板法诊断大肠杆菌阳性奶样敏感性高达100%,诊断大肠杆菌阴性奶样特异性高达94.9%,总符合率高达95.5%。在此基础上用矫正浓度10种抗生素包被微量板,分别用10株大肠杆菌纯培养菌株及其感染模拟奶样和10份大肠杆菌阳性奶样进行快速药敏试验,所获结果与标准纸片扩散法完全一致。这些研究结果表明,本研究建立的刃天青微量板法可以取代常规方法用于奶样大肠杆菌的快速诊断及药敏试验。

奶牛乳房炎链球菌的刃天青微量板快速诊断与药敏试验

本研究以刃天青钠取代链球菌选择培养基EN的溴甲酚紫指示剂,建立了奶牛乳房炎链球菌快速诊断与药敏试验用微量板。将不含指示剂EN的培养基分装到96孔板,接种不同细菌或其感染模拟奶样,培养2h加入优化浓度的刃天青指示剂,结果表明能显示无乳链球菌、停乳链球菌和乳房链球菌生长,不能显示大肠杆菌和葡萄球菌生长;检测三种奶牛乳房炎链球菌总敏感性达105cfu/m L,能在10h内获得诊断结果。60份临床奶样诊断结果显示,刃天青微量板法检测链球菌阴性奶样特异性达100%,检测链球菌单阳性奶样敏感性为100%,检测链球菌混合阳性奶样敏感性达97.1%。用矫正浓度的10种抗生素包被微量板,分别用10株链球菌纯培养、感染模拟奶样和9份链球菌阳性奶样进行刃天青微量板法快速药敏试验,所获结果与标准纸片扩散法完全一致。试验结果表明,本研究建立的刃天青微量板法可取代标准方法用于奶牛乳房炎链球菌的快速诊断及药敏试验。

新型国产商业化链球菌药敏板的体外药敏检测性能评估

目的通过考察国产商业化链球菌药敏板与微量肉汤稀释法对327株链球菌进行基本一致性(EA)和分类一致性(CA)的测定结果,评估该药敏板的检测性能。方法收集2018-2019年来源于郑州市中心医院、郑州市人民医院、南阳市中心医院和河南省人民医院的327株链球菌属不同种类的临床菌株,采用国产商业化链球菌药敏板与微量肉汤稀释法同时测定药敏试验结果的EA和CA等。结果新型国产商业化链球菌药敏板的EA为99.53%,其中头孢曲松等16种抗菌药物的EA均为100.00%;氨苄西林、美罗培南、复方磺胺甲噁唑的EA分别为97.86%、96.94%、97.55%;红霉素/克林霉素诱导试验的EA为98.17%;在CA方面,两种方法的CA为97.40%,非常重大误差为0.09%,重大误差为0.59%,微小误差为1.92%。结论新型国产商业化链球菌药敏板与微量肉汤稀释法比较,EA和CA均大于94.00%,非常重大误差小于1.50%,重大误差小于3.00%,体外药敏试验检测性能良好。

应用Sensititre breakpoint药敏板快速检测β-内酰胺酶

目的 了解Sensititrez BC药敏板对产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株的检出率。方法采用Sensititrez BC药敏板与国内外常用的双纸片协同扩散法(DDS)进行比较。结果TAZ、AZT、AXO三种抗生素筛选检测ESBLs菌株总检出率30.33％,肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌产ESBLs率分别为33.64％和24.79％,与双纸片协同扩散法符合率分别为97.33％和93.97％。结论TAZ、AZT、AXO三种抗生素,增加检出ESBLs的敏感性,避免ESBLs菌株漏检,该法操作简单,结果快速准确,特别适合常规应用。

两种细菌药敏板药敏检测性能验证临床研究

目的:验证新型革兰阳性细菌药敏板BD Phoenix™PMIC-92(简称PMIC-92)和革兰阴性细菌药敏板BD Phoenix™NMIC-413(简称NMIC-413)的药敏检测和耐药机制的准确性。方法:选取国内4家三级甲等医院的1535株临床细菌菌株进行PMIC-92和NMIC-413药敏检测性能验证,其中革兰阳性菌933株,革兰阴性菌602株,参照统一的临床药理试验方案,以旧款Phoenix™细菌鉴定+药敏板、微量肉汤稀释法和琼脂稀释法为对照,与新型药敏板药敏检测结果进行对比;分析各种检测方法药敏检测结果和耐药机制的完全一致率(EA)、类别一致率(CA)、非常重大错误(VME)、重大错误(ME)和微小错误(MIE)。结果:在革兰阳性细菌药敏板检测的933株菌株中,肠球菌472株(占50.6%),葡萄球菌461株(占49.4%);所评价24种抗菌药物,葡萄球菌检测结果中20种药物的EA和22种药物的CA>90%;肠球菌检测结果,19种药物的EA和17种药物的CA>90%;5种耐药机制的阳性一致率和阴性一致率均>95%。在革兰阴性细菌药敏板检测的602株菌株中,肠杆菌科细菌323株(占53.7%),非发酵革兰阴性杆菌279株(占46.3%);所评价29种抗菌药物,肠杆菌科菌结果中,28种药物的EA和25种药物的CA>90%;非发酵革兰阴性杆菌结果中所有29种药物的EA和CA均>90%;对超广谱β-内酰胺酶(ESBL)检测的阳性一致率和阴性一致率均>95%。结论:新型PMIC-92和NMIC-413与对照方法旧款Phoenix™细菌鉴定+药敏板、微量肉汤稀释法和琼脂稀释法相比,在细菌药敏检测结果和耐药机制的判读上具有较高的一致率。

分枝杆菌液体培养和微孔板法分枝杆菌药敏实验在结核感染中的应用

目的:探究分枝杆菌液体培养和微孔板法分枝杆菌药敏实验在结核感染中的应用价值。方法:选取医院2021年6~8月肺结核门诊疑似和确诊后复发结核感染患者痰标本共60例,所有标本分别予以分枝杆菌液体培养与传统固体罗氏培养法,并采用微孔板法进行分枝杆菌药敏实验,对比分枝杆菌培养报阳时间、阳性符合率,并分析微孔板法药敏结果检测效能。结果:分枝杆菌液体培养法对疑似新发病例、复诊患者报阳天数均短于传统固体罗氏培养法;疑似新发患者及复诊患者分枝杆菌液体培养阳性率高于传统固体罗氏培养法,差异有统计学意义(P<0.05);微孔板法药敏结果显示,利福平耐药16个,异烟肼耐药14个,阿米卡星耐药1个,左氧沙星耐药2个。微孔板法药敏法对阿米卡星耐药检测特异性高于传统比例法药敏法,差异显著(P<0.05)。结论:分枝杆菌液体培养能够缩短检测周期,提高阳性检出率,微孔板法分枝杆菌药敏试验灵敏度、特异性高。微孔板法分枝杆菌药物试验可以提供多种药物敏感试验,且能检测到最小抑菌浓度,可以为临床监测药物疗效以及精准治疗提供客观依据,助力结核病耐药防控。

96孔板药敏试验自动判读系统设计

目的探讨96孔板药敏试验自动判读系统的设计与开发。方法选用数字相机对96孔板进行图像采集,运用机器视觉技术进行图像识别,从而得到药敏试验判读结果。采用图像拼接技术,将96孔板分为8个区域,运用二维运动平台进行多次采集,既提高了图像的分辨率,也克服了图像畸变带来的判读误差。结果制作了96孔板药敏试验自动判读系统,判读准确率达到100%,判读用时为人工的1/4~1/3h,且实现判读结果自动统计存储。结论自动判读系统能提高96孔板药敏试验的精度和效率。

Sensititre YeastOne显色药敏板检测念珠菌属体外药物敏感性临床应用研究

目的以微量肉汤稀释法为参考方法,评估商品化Sensititre YeastOne显色药敏板条检测念珠菌属体外药物敏感性的临床应用价值。方法分别用微量肉汤稀释法和YeastOne显色药敏板条同时检测111株念珠菌属对临床常用7种抗真菌药物的体外敏感性,孵育时间为24h;以微量肉汤稀释法作为参考方法,YeastOne为试验方法进行对照分析。结果 YeastOne与微量肉汤稀释法的MIC值一致率高低与所检测的念珠菌属及抗真菌药物种类有关;总一致率：氟康唑77.3%～100.0%、伏立康唑77.3%～100.0%、伊曲康唑45.5%～95.5%、两性霉素B 95.5%～100.0%、氟胞嘧啶98.2%～100.0%、卡泊芬净61.1%～100.0%、米卡芬净72.7%～100.0%;对于伊曲康唑,YeastOne方法检测白色念珠菌和近平滑念珠菌体外敏感性时,与微量肉汤稀释法比较存在较大差异;对卡泊芬净,YeastOne方法检测白色念珠菌和热带念珠菌时与微量肉汤稀释法比较存在差异;其他药物两种方法一致性较好;YeastOne方法和微量肉汤稀释法相比,未发现极严重错误（VME）和差异有本质区别（SD）。结论相对于微量肉汤稀释法,Sensititre YeastOne检测念珠菌属体外药物敏感性操作简便,结果判读客观,易于推广应用,作为临床微生物实验室抗真菌药物敏感性试验的检测方法具有较好的实用价值。

分枝杆菌液体培养与微孔板法分枝杆菌药敏试验对结核感染的检测效果分析

目的:分枝杆菌液体培养与微孔板法分枝杆菌药敏试验对结核感染的检测效果。方法:选取2022年5月—2023年5月贵阳市公共卫生救治中心收治的结核感染患者痰标本52例为观察对象,对所有标本均采取分枝杆菌液体培养与传统固体罗氏培养法,采用微孔板法完成分枝杆菌药敏试验,分析微孔板法药敏结果检测效能。结果:微孔板法药敏法对乙胺丁醇特异性高于传统比例法药敏法,差异有统计学意义(P=0.022);两种药敏试验方法对利福平、异烟肼及链霉素的敏感性、特异性、准确性,对乙胺丁醇的敏感性、准确性比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:微孔板法分枝杆菌药敏试验可为多种药物进行药敏试验,为临床药物疗效提供重要参考依据,有助于结核病防控。

常用化疗药物对不同组织类型非小细胞肺癌体外药敏实验

目的探讨三种组织类型的非小细胞肺癌(NSCLC)对5种临床常用化疗药物的敏感性。方法28例临床肺部肿瘤标本制备成组织细胞悬液,在体外(96孔细胞培养板内)培养,24 h后加入化疗药物。应用四氮唑蓝比色(MTT)法检测各孔的吸光度值并计算出肿瘤细胞对所试药物的敏感率。结果肺腺癌对异环磷酰胺、丝裂霉素、顺铂的敏感率分别为75%、83%和75%;鳞癌对异环磷酰胺、丝裂霉素、顺铂的敏感率均达到80%。肺腺癌、鳞癌对紫杉醇的敏感率不高,而腺鳞癌对该药的敏感率可达100%。肺腺癌对阿霉素的敏感率仅为33%,肺鳞癌对该药也无明显反应性。结论不同组织类型非小细胞肺癌对5种化疗药物的敏感性存在显著差异。

山羊支原体(PG-3)体外药敏试验

本试验测定了环丙沙星,氧氟沙星,单诺沙星,红霉素,罗红霉素,泰勒菌素,泰妙菌素,四环素等8种药物对山羊肺炎支原体PG-3株体外抑菌浓度以及环丙沙星与四环素、红霉素PG-3的联合药物作用。山羊支原体的单向药敏试验结果表明红霉素单药抑菌浓度(MIC)为0.078ug/mL,效果最好。联合药敏试验结果表明红霉素和四环素、环丙沙星联合作用均呈相加作用,环丙沙星和四环素为无关作用。

刃天青微量板法对沙门氏菌的抗菌敏感性试验

采用刃天青微量板法检测多株沙门氏菌对抗生素的耐药性,得到最小抑菌浓度(MIC)。通过肉眼观察和荧光检测都可判定沙门氏菌的耐药性,判定时间仅需5 h,刃天青法与微量肉汤稀释法检测得到的耐药性结果一致。其中用颜色观察能更清晰明确地分辨出耐药折点,荧光检测可以动态地反映细菌随时间变化的生长情况。刃天青微量板法具有简便、快速、灵敏度高的特点,能确定抗生素的耐药性和精确耐药MIC值。

用微量板ATP生物发光法检测肿瘤细胞对化疗药物的敏感性

目的 探讨 ATP生物发光法作为化疗药物敏感性预测方法的可行性。方法 参照 Sevin等 [1 ] 的 2 4孔培养板培养、手工操作检测的方法 ,改进成 96孔微量培养板全自动检测法。通过检测 K 5 6 2细胞对 11种常见抗癌药物的敏感性 ,并与 MTT比色法比较。结果 两者有良好的相关性 (r= 0 .885 ) ,但 ATP法所测得的变异系数明显小于 MTT法(前者为 1.4%～ 13.6 % ,后者为 0～ 2 4.2 % ,P=0 .0 11)。以 ATP标准品作标准曲线 ,当 ATP的浓度在 10 - 6～ 10 - 1 2范围内时 ,ATP的浓度的对数与发光测定值的对数之间有较好的线性关系。ATP测定值与 K5 6 2细胞实际数之间相关性亦很好 (r=0 .994)。结论 ATP生物发光法是一种敏感、可靠的药敏实验方法 。

PMIC-92和NMIC-413对分离自住院患者标本的细菌药敏检测性能

目的评估革兰阳性细菌药敏板PMIC-92和革兰阴性细菌药敏板NMIC-413对临床常见细菌的药敏检测性能。方法选取从临床送检标本中分离的菌株40株(革兰阳性菌17株、革兰阴性菌23株)及实验室保存的标准株4株(大肠埃希菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853、金黄色葡萄球菌ATCC29213、粪肠球菌ATCC29212),分别采用PMIC-92(革兰阳性菌)和NMIC-413(革兰阴性菌)药敏板进行药敏测定,测定结果与实验室现有的VITEK2 Compact AST-GP639(革兰阳性球菌)、AST-GN13(肠杆菌科细菌)、AST-GN335(非发酵菌)检测结果进行比较,部分Vitek 2 Compact无法检测的药物则与K-B纸片扩散法结果进行对照,临床菌株每株检测1次,标准菌株每日检测3次,连续5 d,各测15次。结果PMIC-92药敏板共比对了14种抗菌药物,总分类一致性(CA)为99.08%,小误差(MIE)率为0.37%,重大差异(MD)率为0.55%,无极重大差异(VMD);NMIC-413药敏板共比对了17种抗菌药物,总CA为97.65%,MIE率为1.03%,MD率为1.17%,VMD率为0.15%。结论药敏板PMIC-92和NMIC-413能分别对临床分离的革兰阳性菌和革兰阴性菌的药物敏感性进行快速、准确的测定,可应用于临床实验室进行药敏检测。

1600例西宁市肺结核患者的药敏试验结果分析

目的 调查青海省西宁市肺结核患者的药敏试验情况,为临床诊断及治疗耐药结核病提供依据。方法 选取我院2008年10月~2013年10月在结核科住院的1600例肺结核患者,采用微孔板杂交法检查8种抗结核药物的药敏情况。结果在1600例痰液标本中,1200例分离得到人结核分枝杆菌,400例为牛结核分枝杆菌。药敏试验结果显示,人结核杆菌的耐药率为34.3%,牛结核杆菌的耐药率为27.5%,两者耐多药率分别为3.8%、2.3%,对比差异无统计学意义（P〉0.05）。在1200例人结核分枝杆菌中,异烟肼的耐药率为32.7%,利福平的耐药率为33.4%,链霉素的耐药率为33.3%,乙胺丁醇的耐药率为33.8%。多因素Logistic回归分析结果显示,年龄、居住地、吸烟史和诊断延误对肺结核患者耐药率有明显影响（P〈0.05）。结论 青海省西宁市肺结核患者病原菌多为人结核分枝杆菌,耐药率比较高,年龄、居住地、吸烟史和诊断延误为主要的危险因素。

微孔板培养法对结核分枝杆菌一线药物耐药性分析及应用

目的评价结核分枝杆菌微孔板药敏检测法(简称微孔板培养法)对4种一线抗结核药物的耐药性分析及临床应用价值。方法收集2018年6月至2019年12月云南省昆明市第三人民医院微生物结核病实验室经BACTEC MGIT-960(简称MGIT-960)液体培养阳性且经鉴定为结核分枝杆菌的分离株180株,结核分枝杆菌临床分离株用微孔板培养法分别检测4种抗结核一线药物链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇的耐药性,其结果与MGIT-960药敏结果进行比较分析,评价两者的总符合率、灵敏度、特异性、阳性预测值及阴性预测值。结果①MGIT-960药敏结果:链霉素耐药为63例,敏感为117例;异烟肼耐药为47例,敏感为133例;利福平耐药为42例,敏感为138例;乙胺丁醇耐药为31例,敏感为149例。②微孔板培养法药敏结果:链霉素耐药为58例,敏感为122例;异烟肼耐药为48例,敏感为132例;利福平耐药为43例,敏感为137例;乙胺丁醇耐药为30例,敏感为150例。③微孔板培养法和MGIT-960药敏结果进行对比,两者在检测4种一线抗结核药物的符合率具有高度一致性,有较好的灵敏度和特异性,其总符合率分别达95%、97.2%、96%、97.2%。结论微孔板培养法检测结核分枝杆菌对一线抗结核药物灵敏度的检测结果与MGIT-960检测的药敏结果呈现出较高的一致性,同时具备检测快速,符合当前结核病的临床诊断需求。