温州市食源性小肠结肠炎耶尔森氏菌毒力基因分布及遗传多样性研究

目的了解温州市食源性小肠结肠炎耶尔森氏菌的毒力基因分布及遗传多样性特征。方法对温州市食品及食源性疾病腹泻病人中分离得到的小肠结肠炎耶尔森氏菌进行生物型、血清型和耐药性分析,并基于全基因组测序进行菌株的毒力基因、多位点序列分型(MLST)、核心基因组多位点序列分型(cgMLST)分析。结果71株食源性小肠结肠炎耶尔森氏菌,94.4%(67/71)的分离株为生物1A型,生物血清型以1A/O∶5占比最高(29.6%,21/71)。分离株对14种抗菌药物的敏感率达到95.8%以上。共获得了16种126个毒力基因,其中2株菌株携带pYV质粒和染色体相关毒力基因。分离株以ST3型最常见(31.6%,12/38),cgMLST分析显示除具有相同ST型的菌株外,菌株无明显基因型簇形成。结论温州市食源性小肠结肠炎耶尔森氏菌存在致病性菌株,菌株呈高度遗传多态性,需加强此类菌株的监测,以预防其引起食源性疾病的暴发。

O∶3和O∶9小肠结肠炎耶尔森菌主要毒力基因分布调查

目的 了解我国常见致病性血清型毒力基因的分布情况。方法 参照国外发展成熟的聚合酶链反应(PCR)技术进行毒力基因检测。结果 实验证实在我国分离到的主要流行血清型O∶3和O∶9小肠结肠炎耶尔森菌毒力基因分布特征为 :ail+ 、ystA+ 、ystB-、yadA+ 、virF+ 占 5 6.2 % ;ail+ 、ystA+ 、ystB-、yadA-、virF-占 2 5 .6% ;其他型占18.2 %。结论 通过实验证实在我国引起感染暴发和流行的血清型O∶3和O∶9小肠结肠炎耶尔森菌毒力基因的分布主要为 :ail +、ystA+ 、yadA+ 、ystB-、virF+ 型 ,很少部分的ail+ 、ystA+ 、ystB-、yadA-、virF-根据以前的资料被认为是毒力质粒丢失的结果 ,其他型很有可能是非致病的菌株。

河南省2011-2013年小肠结肠炎耶尔森菌监测结果分析

目的了解河南省小肠结肠炎耶尔森菌的宿主分布、血清学及毒力基因情况。方法于2011—2013年采集腹泻病人粪便、各类家禽家畜粪便、苍蝇以及生熟肉制品涂抹标本,共6 057份,采用冷增菌方法进行目的菌分离。对不同宿主样本中分离到的小肠结肠炎耶尔森菌进行系统生化鉴定、血清学分型和毒力基因PCR检测。结果 6 057份样本中共分离出288株小肠结肠炎耶尔森菌,检出率为4.75%。所分离的小肠结肠炎耶尔森菌主要血清型是O∶8和O∶5,生物分型以1A为主。O∶3血清型多具有致病性,其中以猪分离株最多。结论河南省小肠结肠炎耶尔森菌在人群和各类动物中均有存在,猪是小肠结肠炎耶尔森菌致病性菌株的主要宿主。

2004-2005年我国部分地区小肠结肠炎耶尔森菌宿主分布调查

目的了解2004-2005年小肠结肠炎耶尔森菌宿主分布情况。方法对从不同宿主样品中分离到的小肠结肠炎耶尔森菌进行生物化学鉴定、血清学分型、毒力基因PCR检测。结果2004-2005年从8种常见动物宿主及食品中共分离到230株小肠结肠炎耶尔森菌,35.65%分离自猪,致病性菌株中51.52%来自猪,所占比例最高,而分离自腹泻病人、兔的菌株均为致病性菌株。结论我国小肠结肠炎耶尔森菌宿主分布广泛,猪是最主要的宿主动物。

河南省2007-2010年小肠结肠炎耶尔森菌监测分析

目的监测河南省小肠结肠炎耶尔森菌在腹泻病人和宿主动物中带菌情况,分析其血清学分布及毒力基因情况,探索疾病发生的原因。方法对2007-2010年河南省监测点的标本进行初步鉴定,鉴定后菌株送中国疾病预防控制中心传染病所进行最后鉴定,对部分菌株进行血清分型,并进行ail、ystA、ystB、yadA、verF、rfbC毒力基因检测。结果河南省2007-2010年共监测各类标本8 561份,检出小肠结肠炎耶尔森菌株273株,检出率为3.19%;各年份菌株检出率之间有统计学差异。血清分型中O∶5血清型占比最高(31.63%),其次为O∶8(17.35%),O∶3型占比也较高(11.22%),O∶9则未发现。猪的血清型分布最广,共涉及9个血清型,人的血清型主要为O∶3,O∶8,O∶10。毒力基因测定在病人、猪、牛、犬中检出致病菌株。结论河南省小肠结肠炎耶尔森菌在人群和各类动物中均有存在。人群中流行的血清型与全国流行情况一致。河南省最重要的动物宿主是猪、牛、犬,其在人类感染该病中可能会起到比较重要的作用。

2008-2013年宁夏小肠结肠炎耶尔森菌分布特征分析

目的了解宁夏小肠结肠炎耶尔森菌的分布特征。方法按照《全国小肠结肠炎耶尔森菌病监测方案》对宁夏2008-2013年采集的各类样本进行分离培养,将分离株送中国疾病预防控制中心传染病所进行血清分型、毒力基因检测和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型。结果采集各类样本9 643份,检出173株小肠结肠炎耶尔森氏菌,总检出率1.79%;各年度和各样本检出率差异均有统计学意义(P<0.01)。血清型O∶3和O∶9均携带ail和ystA基因,全部从猪和腹泻病人样本中检出;血清型O∶5、O∶8和未分型菌株均没有携带ail和ystA基因,在猪、牛、羊、鸡和狗样本中都有检出。结论小肠结肠炎耶尔森菌在宁夏分布较为广泛,猪是主要宿主,流行的致病性血清型以O∶3为主,O∶9为辅,且在我区的分布没有时间、地域上差异。

小肠结肠炎耶尔森氏菌主要毒力基因分析

目的了解南京地区从不同来源分离的小肠结肠炎耶尔森氏菌毒力基因的分布情况。方法聚合酶链反应(PCR)技术进行不同血清生物型菌株的毒力基因检测。结果从血清型来看,分离到的9株血清型O:3菌株有7株的基因型分布为ail+,ystA+,ystB-,virF+,yadA+。从生物型来看,共分离到致病生物型(3,4)菌株12株,其中9株毒力基因分布特征为ail+,ystA+,ystB-,virF+,yadA+。结论本市小肠结肠炎耶尔森氏菌血清型O:3菌均包含毒力基因,毒力基因主要分布特征为ail+,ystA+,ystB-,virF+,yadA+。所有的致病生物型(3,4)菌株,均包含染色体上的毒力基因ail,毒力基因主要分布特征亦为ail+,ystA+,ystB-,virF+,yadA+。ail与致病生物型之间存在明显关联。

徐州地区小肠结肠炎耶尔森菌病原学初步研究

目的了解徐州地区小肠结肠炎耶尔森菌分布及病原学特征。方法对本地区分离到的菌株进行血清学分型、生化、药敏试验,并使用聚合酶链反应(PCR)技术检测毒力基因,同时对致病性血清型(O∶3和O∶9型)菌株进行脉冲场凝胶电泳分析。结果2014份标本中共检出32株(分布17个血清型)小肠结肠炎耶尔森菌,总检出率为1.59%。致病菌株占18.75%,携带ystB基因的占21.87%。32株小肠结肠炎耶尔森菌分为3个生物型别,其中1A型占78.12%,3型18.75%,2型为3.12%。本地区分离的3株O∶3血清型菌株的PFGE带型相同。结论该地区存在致病性小肠结肠炎耶尔森菌以及由此引起的腹泻疾病,尤其O∶3型菌株属于我国O∶3血清型小肠结肠炎耶尔森菌的主要克隆系,本地区应当进一步加强该菌的监测工作。

小肠结肠炎耶尔森菌的分离鉴定及毒力基因检测

目的了解昆明市腹泻患者粪便标本中分离出的少见致病性小肠结肠炎耶尔森菌与其他地区该菌生物特性的差异。方法采集腹泻患者新鲜粪便标本,用磷酸盐缓冲液(PSB)4℃增菌21 d后,接种CIN培养基平板,25℃培养48 h,分离获得纯培养菌,采用肠杆菌科细菌微量生化编码管(GYZ-11e系统)进行鉴定,API-20E生化鉴定编码系列进行复核,使用小肠结肠炎耶尔森菌诊断血清进行血清分型,PCR检测菌株携带的毒力基因,采用K-B法测定小肠结肠炎耶尔森菌的毒力。结果分离到7株小肠结肠炎耶尔森菌,经鉴定为O∶8血清型小肠结肠炎耶尔森菌。毒力试验结果显示,小白鼠48 h内均发病死亡。PCR检测结果表明,有6株携带的毒力基因为ail-,yst A-、yst B+、yad A-、vir F-,1株为ail-、yst A+、yst B-、yad A-、vir F-。药敏试验显示,该菌对20种常见抗生素敏感率为80%。结论本研究分离得到7株O∶8型小肠结肠炎耶尔森菌,具有潜在的致病性和较强的毒力,是国内不多见的致病性菌型。

江西省猪和啮齿动物宿主小肠结肠炎耶尔森菌病原学研究

目的了解江西省不同宿主动物中小肠结肠炎耶尔森菌的分布以及病原特征,为该菌防控提供科学依据。方法采集江西省不同年份的屠宰猪与鼠类标本,对foxA筛检阳性的标本进行分离培养,对分离到的小肠结肠炎耶尔森菌进行血清型、生物型、毒力基因与脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析。结果从1018份标本中分离到79株小肠结肠炎耶尔森菌,阳性率为7.76%(79/1018)。猪的阳性率为20.86%(63/302),均为O∶3血清型;鼠的阳性率为2.24%(16/716),血清型为O∶5、O∶8和未分型,生物型均为1A型。79株小肠结肠炎耶尔森菌中,致病性菌株均来自猪,占总分离菌株数的79.75%(63/79),其中59株(ystA^+、ystB^-、yadA^+、virF^+、ail^+、rfbc^+),4株(ystA^+、ystB^-、yadA^-、virF^-、ail^+、rfbc^+);非致病性菌株均来自鼠,占总分离菌株数的20.25%(16/79),其中12株(ystA^-、ystB^+、yadA^-、virF^-、ail^-、rfbc^-)、4株(ystA^-、ystB^-、yadA^-、virF^-、ail^-、rfbc^-)。致病性菌株可分为6种带型,以K6GN11C30021为主要型别,占比80.95%(51/63)。结论在江西省的不同宿主动物中,致病性小肠结肠炎耶尔森菌的主要携带者为生猪。应加强江西地区以生猪为宿主的小肠结肠炎耶尔森菌的监测。

宁夏鼠疫菌质粒生物学特征研究

目的 研究宁夏 12 6株鼠疫菌的质粒、毒力决定因子与毒力的关系 ,预测动物鼠疫的流行。方法 质粒凝胶电泳、毒力因子测定和半数致死量 (L D50 )试验。结果 被试菌株多数含有 6 ,13,4 5 ,6 5 MD质粒 ,具有 4种毒力因子 ;在流行末期分离的菌株毒力较弱。

中国小肠结肠炎耶尔森菌流行现状及其研究进展

小肠结肠炎耶尔森菌在我国分布广泛,存在一定的地域、人群、时间等流行病学差异。随着我国分子流行病学的发展,许多基于分子、核酸水平的新技术及新方法不断被运用在小肠结肠炎耶尔森菌的病原生物学研究中。本文针对目前我国小肠结肠炎耶尔森菌的人群间、动物间及不同时间、地区间的流行病学差异、病原生物学研究、主要分子分型及毒力基因研究进行综述。

从生猪中分离小肠结肠炎耶尔森菌病原学研究

目的了解河南省登封市生猪中小肠结肠炎耶尔森菌的病原学特征。方法以采集的1 346份猪咽拭子所分离的331株小肠结肠炎耶尔森菌为研究对象,进行系统生化鉴定、血清学分型和毒力基因PCR检测。结果采集的1 346份猪咽拭子中共筛查、分离出小肠结肠炎耶尔森菌331株,分离率为24.59%(331/1 346);鉴定出O∶3、O∶5、O∶83种血清型(84.6%,2.1%和1.8%)和1A、3、4共3个生物型;毒力基因分布特征为ail+、ystA+、ystB-、yadA+、virF+占80.67%(267/331),ail+、ystA+、ystB-、yadA-、virF-占3.32%(11/331)且均为血清型O∶3;其它型的为16.01%(53/331)。结论生猪为携带小肠结肠炎耶尔森菌的主要宿主,且多携带致病性菌株,提示在今后疫情控制中应加强生猪的监测、检疫和管理。

小肠结肠炎耶尔森氏菌对黄颡鱼的致病性及毒力基因检测

为研究小肠结肠炎耶尔森氏菌菌株GM2402对黄颡鱼的致病性及毒力基因分布,采用动物回归感染试验方法探讨菌株对黄颡鱼的致病性,利用PCR技术扩增毒力基因,通过药物敏感试验检测该菌株对抗生素的敏感性。在动物回归感染试验中,试验处理组鱼7d内的死亡率达100%,从感染后的试验鱼体中再次分离到小肠结肠炎耶尔森氏菌,证实了该菌株具较强致病性;成功扩增到粘附侵袭位点、耐热肠毒素、粘附素、毒力活化因子和强毒力岛上P4样噬菌体整合酶5种毒力基因,揭示毒力基因与致病性密切相关。菌株GM2402对卡拉霉素、恩诺沙星、磺胺异恶唑等9种药物高度敏感,对氟苯尼考、先锋霉素V中度敏感,而对链霉素、洁霉素等5种药物表现为耐药,这将为鱼类小肠结肠炎耶尔森菌病的有效防治提供参考。

浙江省部分地区小肠结肠炎耶尔森菌(动物株)分子生物学特征初探

目的：了解浙江省部分地区小肠结肠炎耶尔森菌的血清型别、毒力基因分布等情况。方法：利用常规细菌分离方法从家禽、家畜和鼠类粪便标本中分离小肠结肠炎耶尔森菌，并进行毒力基因检测，同时对血清型O：3、O：5和O：8的菌株进行脉冲场凝胶电泳分析。结果：2004～2005年，从全省各点采集的动物标本中共分离到22株小肠结肠炎耶尔森菌，分布于11个血清型，并以O：8和O：3为主。PCR检测将分离到的22株小肠结肠炎耶尔森菌毒力携带情况分为4型：Ⅰ型（ail^＋、ystA^＋、ystB^-、yadA^＋、virF^＋），Ⅱ型（ail^＋、ystA^＋、ystB^-、yadA^-、virF^-），Ⅲ型（ail^-、ystA^-、ystB^＋、yadA^-、virF^-），Ⅳ型（ail^-、ystA^-、ystB^-、yadA^-、virF^-）。脉冲场凝胶电泳分析，O：3型菌株显示有2种带型，O：5型菌株的带型完全相同，O：8型菌株的带型则存在明显差异。结论：浙江省的从动物分离的小肠结肠炎耶尔森菌以非致病性菌株居多，且存在一定的地区差异。猪是致病性小肠结肠炎耶尔森菌的重要携带者，应警惕致病性小肠结肠炎耶尔森菌通过猪感染人和其它动物以及环境的危险。

国内首次发现携带耶尔森菌HPI毒力岛irp^(-2)基因的阴沟肠杆菌

目的研究感染性腹泻患者粪便中分离的阴沟肠杆菌携带的小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛irp-2基因,并评价其菌株的毒力和耐药情况。方法PCR扩增法检测毒力岛irp-2基因,小白鼠腹腔注射法检测毒力,药敏试验采用K-B纸片扩散法。结果从感染性腹泻患者粪便中分离的9株阴沟肠杆菌均扩增出irp-2基因片段,其相对分子量与对照菌株小肠结肠炎耶尔森菌WA株(O8型)的相应PCR片段一致,并具有较强的毒力。结论检出的阴沟肠杆菌含有小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛irp-2基因且为具有毒力的菌株,与致病性密切相关。

小肠结肠炎耶尔森氏菌的质粒图谱及REAP的分析

本文对福建、浙江两地分离的小肠结肠炎耶尔森氏菌进行了血清型鉴定及毒力质粒的研究，用ＥｃｏＲＩ对不同血清型菌株进行了ＲＥＡＰ（质粒的限制性内切酶图谱分析）比较。结果表明，小肠结肠炎耶氏菌的毒力质粒不仅在不同血清型菌株之间有差异，而且在０∶３血清型的菌株之间也有一定差异，这些差异可以反映出一定的地区特点。

鼠疫耶尔森氏菌质粒上重要毒力相关基因的克隆与表达

鼠疫耶尔森氏菌含有3种质粒pMT1、pPCP1和pCD1,这3种质粒编码鼠疫耶尔森氏菌的多种重要毒力因子。首先通过生物信息学技术选定了18种可能重要的毒力相关基因作为拟克隆和表达的目的基因。通过PCR技术、TA克隆技术、双酶切技术获得目的片段。这些目的片段再分别克隆入原核表达载体pET32a中,构建了一系列重组表达质粒,其中12个重要的毒力相关基因在原核表达载体pET32a中有稳定的高效表达,表达量占细菌总蛋白的20％～40％。实验结果为进一步研究质粒编码的毒力因子的结构与功能,及其作为新型疫苗选择的可能性奠定了基础,

温州地区鼠类携带耶尔森菌检测研究

目的:了解温州地区鼠类携带耶尔森菌的类型、其抗生素敏感试验以及小肠结肠炎耶尔森菌毒力基因分布等情况。方法:利用常规细菌分离方法从鼠类肠道内容物中分离耶尔森菌,同时进行抗生素敏感试验,并对小肠结肠炎耶尔森菌进行5种毒力基因检测。结果:2008年从温州地区采集的331份鼠类标本中共分离到18株小肠结肠炎耶尔森菌,9株中间型耶尔森菌、1株假结核耶尔森菌、1株弗氏耶尔森菌、1株克氏耶尔森菌。对18株小肠结肠炎耶尔森菌利用PCR方法检测毒力基因,只有一株仅携带ail毒力基因,其它菌株ail、ystA、ystB、yadA、virF毒力基因全部阴性。除对头孢唑啉、呋喃唑酮、阿莫西林有比较高的耐药性外,其他常用抗生素敏感率在73.7%～100.0%。结论:温州地区分离到的耶尔森菌以非致病性菌株居多且存在一定的地区差异。鼠类中小肠结肠炎耶尔森菌检出率最高为5.44%,应警惕小肠结肠炎耶尔森菌通过鼠类感染人和其它动物以及水、食品的危险。

pYV质粒对小肠结肠炎耶尔森氏菌粘附侵袭上皮细胞及细胞毒性作用的影响

小肠结肠炎耶尔森氏菌是一个重要的肠道致病菌，对其毒力质粒的研究已引起广泛关注。本文研究了含质粒和不含质粒菌株对上皮细胞（Ｈｅｐ－Ⅱ）粘附、侵袭、细胞毒性作用的差别。结果表明，质粒在该菌对上皮细胞的侵袭性方面没有明显影响，对粘附和细胞毒性作用却有较为明显的影响。