靶向敲除Yes激酶相关蛋白1对纳美芬治疗急性颅脑损伤大鼠的影响

目的探讨靶向敲除Yes激酶相关蛋白1(YAP1)对纳美芬治疗急性颅脑损伤疗效的影响。方法选取113只雄性SD大鼠随机分为假手术组9只、模型组31只、对照组36只和实验组37只。用自由落体法建立大鼠颅脑创伤模型。假手术组只开颅不撞击;模型组只进行颅脑创伤处理;实验组和对照组经颅脑创伤处理后,分别给予YAP1-shRNA重组慢病毒液(浓度1.0×10^8 TU·mL^-1,100μL,一次性腹腔注射)和shRNA慢病毒空载液(100μL,一次性腹腔注射),后再给予0.1 mg·kg^-1盐酸纳美芬溶液(腹腔注射,bid,共治疗2周)。治疗前,用蛋白质印迹法检测4组大鼠YAP1蛋白含量;治疗后,用流式细胞仪和免疫组化法分别检测4组大鼠神经细胞凋亡情况和内源性阿片肽[β-内啡肽(β-EP)和强啡肽(DynA1-13)]含量。结果治疗前,实验组、假手术组、对照组和模型组的YAP1蛋白水平分别为(0.13±0.04),(0.32±0.05),(0.83±0.16)和(0.85±0.14),其中实验组显著低于假手术组、对照组和模型组(均P<0.05),假手术组显著低于模型组和对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。治疗后第14天,实验组、对照组和模型组的神经细胞凋亡率分别为(7.56±1.16)%,(11.78±2.17)%和(15.23±1.98)%,β-EP分别为(0.24±0.12),(0.15±0.08)和(0.31±0.17),DynA1-13分别为(0.37±0.15),(0.18±0.05)和(0.44±0.13),实验组的上述指标与对照组和模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 YAP1蛋白在急性颅脑损伤中高表达,靶向敲除其可明显提高纳美芬治疗急性颅脑损伤的效果。

姜黄素调控Yes相关蛋白1对子宫内膜癌Warburg效应及生物学行为的影响

目的:观察姜黄素调控Yes相关蛋白1 (YAP1)对子宫内膜癌糖酵解Warburg效应及生物学行为的影响。方法:将HEC-1B细胞分为对照组、NC-YAP1组、si-YAP1组及低、中、高剂量组。对照组不做任何处理,NC-YAP1组转染NC-YAP1质粒,si-YAP1组转染si-YAP1质粒,低、中、高剂量组细胞分别用20、40、80μmol/L的姜黄素处理。试剂盒检测各组细胞葡萄糖消耗量及乳酸含量;CCK-8法检测各组细胞增殖能力;流式细胞术检测各组细胞周期与凋亡;划痕法检测各组细胞迁移能力;Transwell法检测各组细胞侵袭能力。蛋白质印迹(Western blot)法检测YAP1、乳酸脱氢酶-A (LDH-A)、己糖激酶2 (HK2)、丙酮酸激酶2 (PKM2)蛋白表达。结果:与对照组比较,NC-YAP1组YAP1蛋白相对表达水平、乳酸含量及葡萄糖消耗量、LDH-A、HK2、PKM2蛋白水平、细胞增殖抑制率、G0/G1期比例及S期比例、细胞凋亡率、划痕愈合率、细胞侵袭抑制率差异均无统计学意义(P>0.05),si-YAP1组及低、中、高剂量组YAP1蛋白相对表达水平、葡萄糖消耗量及乳酸含量、LDH-A、HK2、PKM2蛋白水平、S期比例、划痕愈合率均降低(P<0.05),细胞增殖抑制率、G0/G1期比例、细胞凋亡率、细胞侵袭抑制率均升高(P<0.05)。与NC-YAP1组比较,siYAP1组及低、中、高剂量组细胞YAP1蛋白相对表达水平、葡萄糖消耗量及乳酸含量、LDH-A、HK2、PKM2蛋白水平、S期比例、划痕愈合率均降低(P<0.05),细胞增殖抑制率、G0/G1期比例、细胞凋亡率细胞侵袭抑制率均升高(P<0.05),且低、中、高剂量组上述指标均呈剂量依赖性(P<0.05)。与si-YAP1组比较,低、中剂量组细胞中YAP1蛋白相对表达水平均增加(P<0.05),而高剂量组差异无统计学意义(P>0.05);低剂量组葡萄糖消耗量及乳酸分泌量、LDH-A、HK2、PKM2蛋白水平、S期比例、划痕愈合率均增加(P<0.05),细胞增殖抑制率、G0/G1期比例、细胞凋亡率、细胞侵袭抑制率均降低(P<0.05),高剂量组葡萄糖消耗量及乳酸分泌量、LDH-A、HK2、PKM2蛋白水平、S期比例、划痕愈合率均降低(P<0.05),细胞增殖抑制率、G0/G1期比例、细胞凋亡率、细胞侵袭抑制率增加(P<0.05),而中剂量组乳酸含量及葡萄糖消耗量、LDH-A、HK2、PKM2蛋白水平、细胞增殖抑制率、G0/G1期比例及S期比例、细胞凋亡率、划痕愈合率、细胞侵袭抑制率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:姜黄素可能通过抑制YAP1表达抑制子宫内膜癌细胞的Warburg效应、增殖、迁移及侵袭等恶性行为。

Yes激酶相关蛋白1在大鼠颅脑损伤中的高表达

目的探讨Hippo信号通路关键蛋白Yes激酶相关蛋白1(yes-associated protein 1,YAP1)在大鼠颅脑损伤中的表达情况,为后期进一步研究奠定基础。方法选取18只雄性Sprague Dawley(SD)大鼠,随机分配为对照组、假手术组、颅脑损伤组,每组8只。采用免疫组织化学、荧光定量聚合酶链反应、蛋白质印迹法检测YAP1在大鼠颅脑损伤后的表达情况。结果大鼠颅脑损伤72 h后,与对照组和假手术组相比,颅脑损伤组YAP1蛋白在基因以及蛋白水平表达增加(P<0.05)。结论 Hippo信号通路关键蛋白YAP1在大鼠颅脑损伤中表达增加,YAP1可能成为新的治疗靶点。

基于非靶向代谢组学技术探讨Yes相关蛋白1改善马兜铃酸I诱导小鼠肝损伤的机制

目的基于非靶向代谢组学技术探讨Yes相关蛋白1(YAP1)改善马兜铃酸I(Aristolochic acid I,AAI)诱导小鼠肝损伤的机制。方法随机选取8只3周龄雄性肝细胞特异性Yap1基因敲除(基因型为Yap1^(Flox/Flox),Albumin-Cre,简称Yap1^(LKO))小鼠作为Yap1^(LKO)+AAI组,8只Yap1Flox对照小鼠作为Yap1^(Flox)+AAI组。2组小鼠均按照2.5 mg·kg^(-1)·d^(-1)剂量腹腔注射AAI,连续14 d。采用鼠尾PCR法鉴定基因型;微板法测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性;HE染色法观察肝脏组织病理变化;免疫组织化学法测定肝组织中YAP1蛋白表达情况。采用非靶向代谢组学方法分析肝脏组织差异代谢物,利用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用技术分析样品,通过主成分分析(PCA)、偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)筛选差异代谢物,利用HMDB数据库、METLIN数据库对代谢物进行鉴定,通过KEGG数据库对差异代谢物进行通路富集分析。结果(1)AAI诱导14 d,Yap1^(LKO)小鼠的体质量增长低于Yap1^(Flox)小鼠,但差异无统计学意义(P>0.05)。在第14天,与Yap1^(Flox)+AAI组比较,Yap1^(LKO)+AAI组小鼠血清中的ALT、AST酶活性明显升高(P<0.05),肝脏组织病理损伤明显加重。Yap1^(Flox)小鼠肝脏有YAP1蛋白阳性表达,而Yap1^(LKO)小鼠无YAP1蛋白阳性表达。(2)通过代谢组学分析共筛选出139种显著变化(VIP>1且P<0.05)的差异代谢物,与Yap1^(LKO)+AAI组小鼠相比,Yap1Flox+AAI组小鼠的62种肝脏代谢物上调,包括胆碱、牛磺酸、亚牛磺酸、α-亚麻酸、桐油酸、鹅去氧胆酸等;77种代谢物下调,包括甘油磷酸胆碱、L-磷脂酰胆碱、L-谷氨酰胺、L-丝氨酸、L-谷胱甘肽、5-甲硫腺、苯丙氨酸、6-磷酸葡萄糖、乳酸、尿酸苷等。KEGG富集通路主要有胆碱代谢、甘油磷脂代谢、胰岛素抵抗、谷胱甘肽代谢等。结论肝细胞特异性Yap1基因敲除加重了AAI诱导的小鼠肝脏损伤,YAP1通过上调胆碱、牛磺酸等不饱和脂肪酸,参与调控胆碱代谢、甘油磷脂代谢等,从而改善AAI诱导的小鼠肝损伤。

情志应激激素受体调控Yes相关蛋白1影响乳腺癌细胞上皮间充质转化进程研究

目的:探究情志应激激素受体(GR)与Yes相关蛋白1(YAP1)对乳腺癌MCF-7细胞转移的调控机制,以期为乳腺癌的治疗提供新思路。方法:通过免疫组化实验分析乳腺癌组织和癌旁组织GR和YAP1的表达;将MCF-7细胞分为:si NC组、si GR组和si YAP1组,分别通过MTT实验、Transwell实验、细胞划痕实验和流式细胞术分析MCF-7细胞的增殖、侵袭、迁移能力及凋亡率,通过蛋白免疫印迹实验分析细胞GR和YAP1的表达水平。结果:与癌旁正常组织比较,乳腺癌组织YAP1与GR的表达水平升高。与si NC组比较,si GR组和si YAP1组的MCF-7细胞增殖能力、侵袭能力、迁移能力显著降低,凋亡率增加(P<0.05)。与si NC组比较,si GR组的MCF-7细胞的YAP1和GR表达水平降低(P<0.05),si YAP1组的MCF-7细胞的YAP1表达水平降低(P<0.05)。结论:乳腺癌患者的癌组织中YAP1与GR的表达水平升高。GR被激活后,通过调控细胞内的YAP1通路影响MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭能力以及凋亡率,进而导致乳腺癌MCF-7细胞转移,靶向调节YAP1抑制乳腺癌上皮间充质转化(EMT)发生可为乳腺癌患者提供新的治疗策略。

Yes相关蛋白、哺乳动物不育系20样激酶1、细胞周期蛋白D1在鼻咽癌中的表达及临床意义

目的探讨Yes相关蛋白(YAP)、哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)及细胞周期蛋白D1(CyclinD1)在鼻咽癌中的表达及与鼻咽癌临床病理特征的关系。方法应用免疫组织化学染色方法检测YAP、MST1、CyclinD1在鼻咽黏膜慢性炎组织和鼻咽癌组织中的表达。结果 YAP及CyclinD1在鼻咽癌组织中的表达均高于鼻咽黏膜慢性炎组织(P <0.05),MST1在鼻咽癌组织中的表达低于鼻咽黏膜慢性炎组织(P <0.05)。YAP、CyclinD1与病理分型相关(P <0.05),而MST1与病理分型无相关性(P>0.05);三者与患者的性别、年龄、生存时间、淋巴结转移、临床分期、远处转移、复发及生存状态无相关性(P>0.05)。在鼻咽癌组织内,YAP与CyclinD1、MST1与CyclinD1呈正相关(P <0.05),YAP与MST1无相关性(P>0.05)。结论 YAP和CyclinD1蛋白的高表达、MST1蛋白的低表达可能与鼻咽癌的发生、发展有关,三者有望成为治疗鼻咽癌的新靶点。

蛋白激酶Cι/Yes相关蛋白1与人乳头瘤病毒在肿瘤微环境中的作用研究进展

宫颈癌是女性最常见恶性肿瘤之一,有研究已证实人乳头瘤病毒(HPV)感染特别是高危型HPV,是引起宫颈癌的主要原因,但仅1%HPV感染者转变为宫颈癌,研究认为免疫抑制是其协同因子之一。蛋白激酶Cι(PKCι)是一种非经典型蛋白激酶C,PKCι通过下游效应因子Yes相关蛋白1(YAP1)促进免疫抑制,而YAP1则通过募集骨髓来源的抑制性细胞和CD8^+T细胞来促进肿瘤的免疫抑制;调节PKCι/YAP1为宫颈癌免疫治疗提供可能的靶点。本文对PKCι/YAP1与HPV在肿瘤微环境中的作用研究进展进行综述。

Yes相关蛋白(YAP)通过激活PI3K/AKT通路促进皮肤鳞状细胞癌细胞侵袭和迁移

目的探讨Yes相关蛋白(YAP)在皮肤鳞状细胞癌(cSCC)中表达及与cSCC侵袭和迁移中的作用。方法通过免疫组织化学染色法检测cSCC、鲍温病(BD)、癌旁正常皮肤组织中YAP的表达水平,并分析与临床病理参数之间的关系;利用慢病毒转染构建YAP基因敲低的A431稳定细胞株,利用四甲基罗丹明标记的鬼笔环肽检测A431细胞微丝分布和数量,Transwell TM实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测A431细胞的迁移能力;免疫荧光细胞化学染色法观察敲低YAP后上皮间质转化(EMT)相关标志物上皮钙黏素(E-cadherin)、锌指转录因子Snail的表达;Western blot法检测E-cadherin、Snail、β-catenin、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)、核糖体蛋白S6(S6)、磷酸化S6(p-S6)、4E结合蛋白1(4EBP1)、磷酸化的4EBP1(p-4EBP1)的表达。结果YAP在cSCC和BD中表达显著高于癌旁正常皮肤组织;cSCC中YAP高表达与肿瘤大小、分化程度、侵袭程度密切相关,与患者的性别、年龄、发病部位、形态类型、是否神经脉管侵犯不相关;敲低A431细胞中YAP后,肿瘤细胞的侵袭、迁移能力降低,细胞微丝变细、伪足变少;E-cadherin表达增加,Snail和β-catenin蛋白表达降低,p-AKT、p-S6及p-4EBP1蛋白表达降低。结论YAP在cSCC中高表达,YAP激活PI3K/AKT信号通路促进cSCC的侵袭、迁移及EMT过程。

沉默Yes相关蛋白1对人非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的研究Yes相关蛋白1(YAP1)在非小细胞肺癌细胞增殖、细胞周期、迁移、侵袭中的作用。方法通过慢病毒介导的小干扰RNA靶向抑制人非小细胞肺癌细胞株A549中YAP1基因的表达,采用CCK-8法、流式细胞术分别检测沉默YAP1对A549细胞增殖及凋亡周期的影响,Transwell实验观察沉默YAP1对A549细胞迁移、侵袭能力的影响。结果沉默YAP1后,A549细胞YAP1mRNA和蛋白表达均下调(P<0.01),CCK-8实验结果显示沉默YAP1抑制A549的增殖、增加G0/G1期的细胞比例(P<0.01),Transwell实验结果示沉默YAP1抑制A549细胞的迁移、侵袭(P<0.01)。结论沉默YAP1基因对非小细胞肺癌细胞的恶性生物学特征具有抑制作用,YAP1可能成为肺癌治疗的潜在靶标。

黄瓜S期激酶相关蛋白Skp1的原核表达及其多克隆抗体的制备

S期激酶相关蛋白1(Skp1)是SCF型E3泛素连接酶途径的核心蛋白,在真核生物的细胞周期、转录调控、信号传导等细胞进程中发挥关键作用。为了深入研究Skp1的基因功能,通过反转录PCR扩增黄瓜Skp1基因的全长阅读框,Skp1基因全长阅读框由468个核苷酸组成,共编码155个氨基酸,将其通过酶切连接的方式克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a中,获得重组载体pETSkp1,PCR验证及克隆测序确定开放阅读框的正确性。将重组质粒pETSkp1转化大肠杆菌BL21菌株,通过IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表明,在37℃条件下,经IPTG(1 mmol/L)分别诱导3,6,9 h,Skp1基因在大肠杆菌BL21中均得到高效表达,6,9 h对表达量的影响不明显,因此,可用3 h作为后期诱导表达蛋白的时间。将纯化的蛋白作为抗原,免疫新西兰大耳白兔,采集第5次后血清用ELISA测定效价范围为1∶128000~512 000。提取黄瓜叶片的总蛋白,利用获得的抗血清进一步通过Western Blot检测特异性,结果表明,抗血清在500倍和1 000倍稀释时均能特异性地检测到黄瓜叶片中的Skp1蛋白,条带大小在20 k Da左右,与预期的Skp1蛋白大小一致。

脂肪分化相关蛋白通过蛋白激酶C和酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶1促进THP-1巨噬细胞蓄积脂质

目的:探讨脂肪分化相关蛋白促进THP-1巨噬细胞蓄积脂质的机制。方法:使用高胆固醇饲料喂养新西兰兔12周,复制动脉粥样硬化动物模型。然后用Western blotting和免疫组织化学染色观察兔主动脉脂肪分化相关蛋白及蛋白激酶C的表达。THP-1巨噬细胞与氧化低密度脂蛋白孵育不同的时间,使细胞负荷胆固醇酯后,用RT-PCR的方法观察脂肪分化相关蛋白及酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1的表达,用PepTag assay琼脂糖凝胶电泳及分光光度法观察蛋白激酶C的活性。在负荷胆固醇酯的THP-1巨噬细胞中分别加入蛋白激酶C的激动剂佛波酯和抑制剂钙磷酸结合蛋白,观察脂肪分化相关蛋白的表达,同时使用油红O染色和高效液相色谱法测定细胞内脂质的变化。瞬时转染pcDNA3.1-HA-adi表达载体到THP-1巨噬细胞,复制高表达脂肪分化相关蛋白的细胞模型。在负荷、不负荷胆固醇酯或ACAT抑制剂存在的状态下,观察酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达及细胞内胆固醇酯的改变。结果:与对照组相比,兔主动脉病变处脂肪分化相关蛋白及蛋白激酶C表达均显著增加。负荷胆固醇酯的THP-1巨噬细胞中脂肪分化相关蛋白及酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达上调,蛋白激酶C的活性升高。荷脂细胞与蛋白激酶C激动剂共孵育后,可以协同增强上调脂肪分化相关蛋白的效应,细胞内脂质增多;如果荷脂细胞同时与蛋白激酶C抑制剂共孵育,可以有效抑制荷脂所致的脂肪分化相关蛋白高表达,细胞内脂质减少。高表达脂肪分化相关蛋白的THP-1巨噬细胞能够使酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达增加,促进细胞内胆固醇酯蓄积。加入酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶抑制剂后,这些作用被减弱。结论:脂肪分化相关蛋白可能是通过蛋白激酶C活性的改变影响酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1的活性,从而影响细胞内脂质的蓄积。

miR-153-3p靶向下调Rho相关螺旋蛋白激酶1(ROCK1)基因抑制乳腺癌细胞增殖及迁移

目的探究miR-153-3p调节乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭的分子机制。方法利用生物信息学软件检索预测miR-153-3p的候选靶基因;采用双荧光素酶报告实验分析miR-153-3p与候选基因的靶向关系;应用实时荧光定量PCR和Western blot法检测miR-153-3p对MDA-MB-231细胞mRNA和蛋白质表达水平的影响;通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,并以TranswellTM检测细胞的迁移和侵袭能力。结果软件预测显示miR-153-3p与Rho相关螺旋蛋白激酶1(ROCK1)有连续的结合区域;共转染miR-153-3p模拟物(miR-153-3p mimics)与ROCK1野生型报告载体的细胞相对荧光素酶活性降低;转染hsa-miR-153-3p-mimics后,MDA-MB-231细胞的miR-153-3p表达水平显著增高,且ROCK1蛋白的表达量明显降低。与对照组相比,转染组MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力均减弱。结论miR-153-3p通过靶向下调ROCK1的表达来抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

蛋白激酶Cα对人正常肝和肝癌细胞周期及G_1期相关调控因子cyclinD1、cyclinE的影响

目的 探讨蛋白激酶Cα(PKCα)对人正常肝和肝癌细胞周期的作用和对G1 期相关调控因子的影响。 方法 通过细胞转染技术将PKCαcDNA正向插入的真核表达质粒PXJ4 1 PKCα导入正常肝细胞 (L 0 2 ) ,并利用本室已构建的表达反义PKCα的BEL 74 0 2细胞 (HT6 )检测细胞的生长曲线 ,细胞周期以及细胞对G1 期相关调控因子cylinD1和cyclinE的影响。 结果 构建了稳定过表达PKCα的人正常肝细胞模型 (LT3) ,过表达PKCα可促进L 0 2细胞增殖 ,促进细胞由G1 期向S期的过渡 ;cyclinD1和cyclinE的蛋白水平上升 ,反之表达反义PKCα的BEL 74 0 2细胞 (HT6 )增殖被抑制 ,阻抑细胞由G1 期向S期的过渡 ,cyclinD1和cyclinE的蛋白水平下降。 结论 从正反两个方面表明 ,PKCα可通过作用于G1 期相关周期蛋白的水平影响G1 S期的进程。

死亡相关蛋白激酶1基因启动子甲基化在宫颈癌中的临床意义

目的研究死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)基因启动子甲基化在宫颈癌中的临床意义。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)检测宫颈癌癌组织和癌旁正常组织中DAPK1基因启动子甲基化,比较在二者间的差异及其与临床病理因素之间的关系。结果宫颈癌组织中DAPK1基因启动子甲基化率为62.5%,癌旁组织中甲基化率为5.0%,宫颈癌组织中DAPK1基因启动子甲基化率显著高于宫颈癌癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌癌组织DAPK1基因启动子甲基化率在组织学分级、肿瘤最大径、淋巴结转移、器官转移、FIGO分期中的差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DAPK1基因启动子在宫颈癌中呈高甲基化状态,可作为宫颈癌的病情和预后评估的生物学标志物。

膜型基质金属蛋白酶-1在黏着斑激酶相关非激酶调控肝星状细胞胶原代谢中的作用

目的:探讨黏着斑激酶相关非激酶(FRNK)对纤维连接蛋白(FN)刺激的肝星状细胞(HSC)膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)表达的影响并探讨MT1-MMP在FRNK调控HSC胶原代谢中的作用。方法:应用体外细胞培养技术,脂质体介导法进行FRNK质粒瞬时转染;采用Western blotting法测定FRNK蛋白在瞬时转染时相应的表达,鉴定转染效果;分别应用Western blotting和RT-PCR方法测定MT1-MMP在HSC中的相应表达。结果:FRNK质粒成功转染HSC,于转染48h时,FRNK蛋白表达最强,P<0·05;FRNK转染后在基因水平上:MT1-MMP mRNA表达明显增加;翻译蛋白水平上:FRNK质粒转染HSC48h后,MT1-MMP蛋白表达量显著升高。结论:脂质体介导下FRNK质粒转染,可使外源性FRNK在HSC内大量表达,FRNK可能通过上调MT1-MMP值来抑制HSC胶原合成。

死亡相关蛋白激酶1、KLF4、6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶甲基化状态检测及与宫颈癌人乳头瘤病毒16感染的关系

目的检测宫颈癌组织死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)、KLF4、6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)启动子区域甲基化状态,初步探讨其甲基化状态与宫颈癌人乳头瘤病毒16(HPV16)感染的关系。方法选取宫颈癌患者103例为宫颈癌组,另选取同期年龄相匹配的慢性子宫颈炎患者110例为对照组。检测2组宫颈脱落组织DAPK1、KLF4、MGMT基因甲基化状态。通过人乳头瘤病毒检测HPV16感染情况,分析宫颈癌组织DAPK1、KLF4、MGMT基因甲基化与HPV16感染相关性。结果与对照组相比,宫颈癌组患者HPV16感染阳性率升高,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,宫颈癌组DAPK1、KLF4、MGMT基因异常甲基化率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。分化程度低、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移及有远处转移患者宫颈癌组织DAPK1、KLF4、MGMT甲基化率高于分化程度高、中及TNM分期Ⅰ~Ⅱ、无淋巴结转移、无远处转移患者,差异有统计学意义(P<0.05)。与HPV16感染阴性相比,HPV16感染阳性患者中APK1、KLF4、MGMT甲基化比例升高,差异有统计学意义(P<0.05)。HPV16感染情况与APK1、KLF4、MGMT甲基化相关(r=0.454,0.497,0.307,P<0.05)。结论HPV16感染可能与APK1、KLF4、MGMT甲基化有关,HPV16感染可能通过影响APK1、RAR-β、MGMT基因甲基化促进宫颈癌的发展。

Yes相关蛋白1在乳腺癌中的表达及临床意义

目的探讨yes相关蛋白1(YAP1)在正常乳腺组织及乳腺癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学Envision法检测133例乳腺浸润性导管癌,37例乳腺导管原位癌及47例癌旁组织中YAP1的表达。结果 (1)YAP1在乳腺癌旁组织中的阳性率(81%)明显高于乳腺癌组织中的阳性率(46%)(P<0.05);(2)YAP1在乳腺导管原位癌中的阳性率为43%,与乳腺浸润性导管癌之间的差异无统计学意义(P=0.925);(3)YAP1阳性表达与患者年龄、肿瘤大小及淋巴结转移转移无关,而与乳腺癌的分子分型有关(P<0.05)。结论在乳腺癌中YAP1可能作为抑癌基因发挥作用,YAP1的表达对乳腺癌的治疗有一定意义。

死亡相关蛋白激酶1在慢性淋巴细胞白血病中的表达

目的:研究死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)在慢性淋巴细胞白血病中的表达水平。方法:用慢性淋巴细胞白血病MEC1细胞系及慢性淋巴细胞白血病患者血液标本提取的B淋巴细胞以研究DAPK1基因表达水平,应用mRNA定量检测和免疫蛋白印迹方法检测mRNA的转录和蛋白的表达情况。结果:mRNA定量和免疫蛋白印迹方法结果表明,慢性淋巴细胞白血病患者体内的DAPK1基因沉默。因此,无论细胞有或没有进行INF-γ处理,MEC1细胞系中DAPK1和自噬相关基因蛋白表达均无明显差异。结论:慢性淋巴细胞白血病中DAPK1基因沉默性表达,使得自噬行为异常。

蛋白激酶C-核因子相关因子2调节大鼠气道上皮细胞血红素加氧酶-1的表达

目的:探讨蛋白激酶C(PKC)-红系衍生的核因子相关因子2(Nrf2)对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的大鼠气道上皮细胞血红素加氧酶-1(HO-1)表达的影响。方法:将25只SD大鼠的气道上皮细胞随机分为对照组、CSE3h组、RO318220(PKC抑制剂)组、Nrf2 siRNA组和Nrf2 siRNA+RO318220组,每组5只。对照组用DMEM/F12正常培养,CSE3h组用10%CSE共培养3 h;RO318220组则用3μmol/L RO318220预处理0.5h,余处理同CSE3h组;Nrf2 siRNA组先用Nrf2 siRNA预处理,余处理同CSE3h组;Nrf2 siRNA+RO318220组则先用3μmol/L RO318220和Nrf2 siRNA预处理,余处理同CSE3h组。用Western印迹法分别检测HO-1,Nrf2和PKC蛋白表达,细胞免疫化学法观察HO-1蛋白表达,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HO-1mRNA表达,免疫荧光法观察Nrf2核转位,测定HO-1活性。结果:CSE明显诱导Nrf2核转位,其诱导作用可被RO318220阻断。HO-1蛋白在CSE3h组强阳性表达,在对照组、RO318220组、Nrf2 siRNA组和Nrf2siRNA+RO318220组均弱阳性表达。CSE3h组PKC蛋白、HO-1 mRNA和蛋白表达较对照组显著升高,HO-1活性较对照组明显增强(P<0.05)。PKC蛋白表达水平在Nrf2 siRNA组和CSE3h组无明显差异(P>0.05)。结论:CSE通过PKC信号通路诱导Nrf2核转位,上调HO-1的表达水平。

细胞周期素D1、S期激酶相关蛋白2与p27^(kip1)在结直肠癌中的表达及相关性研究

细胞周期调控机制是由复杂的网络调控系统组成,其调控紊乱是肿瘤发生发展的重要分子事件。参与细胞周期调控的主要因子有：