乙醇诱导大鼠肝损伤的代谢组学和茵陈蒿汤的干预研究

目的通过乙醇诱导大鼠肝损伤的代谢组学研究,确定能够表征酒精性肝损伤发生、发展和恢复状态的生物标记物,并基于此标记物的代谢轨迹变化阐明茵陈蒿汤的保肝作用。方法基于代谢组学理论,以UPLC-ESI-Qtof/MS为核心技术,以主成分分析方法为数据解析手段,研究空白大鼠、乙醇诱导肝损伤大鼠和茵陈蒿汤干预大鼠尿液中代谢物组时量的轨迹变化和对应关系。结果初步确定表征4个能够表征酒精性肝损伤发生、发展和恢复状态的生物标记物内源性生物标记物,且茵陈蒿汤对4个内源性生物标记物代谢轨迹的扰动具明显的回调作用。结论代谢组学方法成功用于乙醇诱导的大鼠肝损伤研究,并且从生物体内代谢组层面确定茵陈蒿汤具有较好的保肝作用。

茵陈蒿汤对ANIT诱导的急性肝损伤的保护作用

目的:探讨茵陈蒿汤对ANIT急性肝损伤模型的保护作用,并初步探讨其对肝细胞摄取、转化、排泄胆红素的影响,揭示利胆退黄的作用机理,为后续实验建立中医阳黄证黄疸动物模型奠定基础。方法:采用α-异硫氰酸萘酯(ANIT)灌胃诱导大鼠急性肝损伤,观察大鼠ALP,ALT,AST,γ-GT活性及T-BIL,D-BIL,β-G和MDA含量,评价茵陈蒿汤保肝作用。结果:茵陈蒿汤低剂量组能使肝损伤生化指标明显改善,具有显著的保肝作用,而高、中剂量组保肝作用不明显。结论:茵陈蒿汤具有保肝利胆退黄的作用,其机理可能与降低肝细胞β-G、MDA含量,促进胆红素代谢,降低脂质过氧化物含量有关。

CCL_4诱导大鼠肝损伤模型的代谢组学及茵陈蒿汤的干预作用研究

基于代谢组学的系统化理论,以UPLC/QTOF分析系统为核心手段,结合生物样品分析制备方法,研究CCL_4诱导肝损伤大鼠的代谢组变化,以及茵陈蒿汤干预后的肝损伤大鼠代谢组的回调趋势。同时,借助MS解析理论和主成分分析软件,明晰表征大鼠肝损伤的5个内源性特征生物标记物,并结合系统生物学的理论还原肝损伤的机理与实质,以及茵陈蒿汤的肝损伤防治机理,从药物代谢组学角度对经典方剂防治肝损伤给出全新解释。

急性实验性胰腺炎时胰腺组织学的变化及茵陈蒿汤的影响

本实验以大鼠为实验对象，用去氧胆酸钠诱发急性胰腺炎，观察了急性胰腺炎时胰腺的组织学变化及茵陈蒿汤的影响。结果显示：大鼠于诱发急性胰腺炎早期，胰腺组织出现严重的出血、坏死及大量的炎细胞浸润，胰腺细胞的线粒体肿胀，嵴消失，初级溶酶体增多，内质网排列不整齐，囊泡状扩张，脱颗粒，酶原颗粒少而小。用茵陈蒿汤治疗后其组织学观察胰腺病变很轻，表明茵陈蒿汤对胰腺本身的结构具有保护作用。

茵陈蒿汤对乙醇诱导的大鼠急性肝损伤的保护作用研究

目的:系统评价茵陈蒿汤对乙醇诱导的大鼠急性肝损伤的保护作用。方法:75只Wistar大鼠随机分为5组,模型组给予生理盐水,给药组按体重分别给予茵陈蒿汤冻干粉,连续给药14天,于第10日起模型组和给药组同时灌胃给予乙醇50%(v/v)连续5天(5g/kg),空白组给予生理盐水;于第15日处死大鼠,分离血清及肝组织匀浆液,检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、乙醇脱氢酶(ADH)、γ-L-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)的活性和效价,观察肝脏组织学情况。结果:模型组血清ALT、AST、ADH、γ-GT及TG活性明显高于正常对照组,有显著性差异(P<0.01),表明模型复制成功;与正常对照组相比,治疗组上述指标仅轻度升高,与模型组比较有显著性差异(P<0.01);模型组MDA含量明显高于正常对照组,具有显著性差异,治疗组低剂量和中剂量也明显升高,与模型组比较差异无显著性意义(P<0.05);治疗组高剂量轻微升高,与模型组比较有显著性差异(P<0.01);模型组GSH含量明显低于正常对照组,有显著性差异(P<0.01),其在治疗组低剂量和中剂量中也明显降低,与模型组比较无显著性差异,而在治疗组高剂量中轻微降低,与模型组比较有显著性差异(P<0.01),同时,组织病理学也得出上述相同的结论。结论:茵陈蒿汤对乙醇诱导的大鼠急性肝损伤具有良好的保护作用。

实验性急性胰腺炎时胰腺细胞膜流动性的变化及茵陈蒿汤的影响

本文以去氧胆酸钠诱发大鼠急性胰腺炎，就茵陈蒿汤及其组分对胰腺炎时胰腺细胞膜流动性的影响进行了观察。结果表明：急性胰腺炎早期，大鼠胰腺细胞总膜、线粒体膜和溶酶体膜流动性明显降低；茵陈蒿汤及其组分大黄和栀子可使其流动性接近正常。表现为大黄和栀子分别可提高总膜、溶酶体和线粒体膜的流动性；而茵陈蒿汤则主要提高溶酶体膜的流动性。

基于高效液相指纹图谱及化学模式识别分析茵陈蒿汤有效成分研究

目的:建立茵陈蒿汤高效液相(HPLC)指纹图谱并结合化学模式识别,对茵陈蒿汤整体质量控制进行评价。方法:采用超声纯甲醇浸泡法提取成分,“中药指纹图谱相似度评价系统”(2012版)对多批茵陈蒿汤药材进行共有峰指认。SPSS 20.0统计学软件进行聚类分析,SIMCA 14.0软件进行主成分分析和正交偏最小二乘法判别分析,筛选影响茵陈蒿汤质量的差异性成分。结果:11个有效成分可实现完全分离,RSD相对保留时间均<1.0%,相对峰面积均<2%,相似度0.90。聚类分析和主成分分析结果显示,8批茵陈蒿汤可聚为4类,S3聚为一类,S4聚为一类,S2、S5、S7聚为一类,S1、S6及S8聚为一类;正交偏最小二乘判别分析中芦荟大黄素、咖啡酸和绿原酸对区分产地的贡献较大。结论:HPLC指纹图谱法操作简便,结果准确,稳定性良好,重复性高,结合化学模式识别可用于茵陈蒿汤的质量控制。

茵陈蒿汤对急性胰腺炎胰腺泡溶酶体膜稳定性的影响

用ＤＣＡ—Ｎａ，诱发大鼠急性胰腺炎（ＡｃｕｔｅＰａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ），探讨ＡＰ的发病机制；对比茵陈蒿汤及其组分对胰腺腺泡溶酶体膜稳定性的影响。按析因法设计实验。用差速离心技术，以２５０００ｇ３０分钟分离溶酶体。测上清及沉淀中溶酶体标记酶—酸性磷酸酶（ＡＣＰ）的活性，以总酶活比作为溶酶体膜稳定性的主要指标。结果显示：各中药治疗组沉淀溶酶体ＡＣＰ活性较盐水组高，而总酶活比显著降低，接近正常组。提示：ＡＰ时胰腺腺泡溶酶体膜稳定性降低，而茵陈蒿汤及其组分对溶酶体膜有保护作用。

RP-HPLC法同时测定茵陈蒿汤中14个成分

目的:建立反相高效液相色谱法同时测定茵陈蒿汤(茵陈、栀子、大黄)中滨蒿内酯、儿茶素、绿原酸、东莨菪内酯、金丝桃苷、秦皮乙素、京尼平苷、槲皮素、京尼平、大黄酸、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素、大黄素甲醚的含量。方法:采用Eclipse Plus C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0mL·min^(-1),柱温30℃,检测波长210 nm(儿茶素、绿原酸、秦皮乙素、京尼平、东莨菪内酯、滨蒿内酯、槲皮素)、238 nm(京尼平苷、金丝桃苷)、254 nm(芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚),进样量25μL。结果:14个成分可实现完全分离,在一定的线性范围内呈良好的线性关系(r>0.999 8)、精密度(RSD≤2.0%)、稳定性(RSD≤1.9%)和重复性(RSD≤1.8%)良好,平均回收率(n=6)在94.4%~98.0%范围内,RSD在0.86%~2.8%范围内。3批茵陈蒿汤中滨蒿内酯、儿茶素、绿原酸、东莨菪内酯、金丝桃苷、秦皮乙素、京尼平苷、槲皮素、京尼平、大黄酸、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素、大黄素甲醚14个成分的含量测定结果分别为0.136~0.168、0.080~0.104、0.403~0.470、0.008~0.009、0.061~0.068、0.020~0.027、0.269~0.306、0.036~0.048、0.005~0.006、0.122~0.164、0.037~0.044、0.030~0.037、0.011~0.014、0.007~0.010 mg·g^(-1)。结论:该方法经方法学验证,可用于茵陈蒿汤中14个化学成分的含量测定。

基于药物代谢组学的中药及方剂中组分间协同增效作用

针对中药及方剂中多组分间配伍协同作用的特点,提出了利用药物代谢组学解析多组分间协同增效作用的机制的假说,并介绍了作者近期利用药物代谢组学研究方剂及组成药物相互关系的成果。

茵陈蒿汤对大鼠胰腺炎时胰腺及肝脏环核苷酸的影响

按L_2(8)~7正交设计观察茵陈蒿汤及其组分对胰腺及肝脏环核苷酸的影响。结果表明:SD大鼠在诱发实验性急性胰腺炎的翌日,胰腺和肝脏cAMP的含量在各组问无明显差异;cGMP的含量及cAMP/cGMP比值在各组间有明显差异。生理盐水组cGMP的含量显著高于各中药组,因而其比值显然降低。正交分析显示:恢复胰腺cAMP/cGMP比值的作用以大黄最佳,升高其cAMP和降低cGMP含量的药效则分别以栀子和茵陈为优。用各种含茵陈的组方处理的动物,其肝脏cGMP含量均显著低于生理盐水组;而调整肝脏cAMP/cGMP比值的作用则以单味茵陈居首位。

茵陈蒿汤在梗阻性黄疸大鼠模型中的保肝作用及对G蛋白耦联受体5、法尼酯衍生物X受体表达水平的影响

目的观察中药茵陈蒿汤(YCHT)对梗阻性黄疸大鼠模型中G蛋白耦联受体5(TGR5)、法尼酯衍生物X受体(FXR)变化并探讨其机制。方法24只大鼠随机分为假手术组(Sham)、胆总管结扎组(BDL)、菌陈蒿汤组(BDL+YCHT)并建模,检测肝功能相关指标;酶联免疫吸附法检测白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;免疫组织化学法检测肝组织TGR5蛋白的变化;实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Westernblot测定肝组织TGR5、FXRmRNA及蛋白表达水平。结果BDL组大鼠谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)、总胆汁酸(TBA)等明显增高(P均=0.000)且血清IL-1、IL-6和TNF-α也显著增高(P=0.002、0.000、0.004);与BDL组比较,BDL+YCHT组各项肝功能指标均明显降低(P=0.005、0.000、0.028、0.009、0.029)且IL-1、IL-6和TNF-α也显著降低(P=0.021、0.042、0.037);BDL组TGR5表达明显增高(P=0.030),BDL+YCHT组的表达也明显高于BDL组(P=0.042);BDL组TGR5mRNA及蛋白表达明显增加(P均=0.000)而FXRmRNA和蛋白表达却明显降低(P均=0.000);BDL+YCHT组较BDL组TGR5、FXRmRNA及蛋白的表达均显著升高(P=0.007、0.032、0.007、0.000)。结论梗阻性黄疸时肝组织TGR5表达增高而FXR的表达降低。YCHT治疗梗阻性黄疸大鼠模型有明显疗效,可能通过促进TGR5、FXR的表达减轻肝脏损伤。