基于网络药理学和基因表达数据库探讨银杏叶-葶苈子延缓心肌纤维化的作用机制

目的:借助网络药理学分析,联合分子对接及基因表达芯片分析验证,探讨银杏叶-葶苈子延缓心肌纤维化的作用机制。方法:利用中药系统药理学数据库与分析平台筛选银杏叶-葶苈子的有效成分和靶点,通过人类基因数据库(GeneCards)、人类孟德尔遗传数据库(OMIM)获取心肌纤维化的靶点。将有效成分靶点与心肌纤维化靶点分别导入Cytoscape 3.8.0软件构建药物-成分-靶点网络、STRING平台构建蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络,再利用Cytoscape自带的网络分析工具计算网络拓扑参数,分析获取关键靶点。将交集靶点通过R软件进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。最后利用基因表达数据库(GEO)的芯片数据进行数据分析,并利用AutoDock软件进行有效成分与核心靶点分子对接,Pymol软件绘制分子对接模式图验证核心靶点。结果:通过相关数据库,获得药物有效成分39个,筛选出有效成分作用靶点116个,心肌纤维化靶点3322个。网络拓扑图分析获得转录因子P65(RELA)、雄性激素受体(AR)、前列腺素G/H合酶1(PTGS1)、肿瘤蛋白质P53(TP53)、核因子-κB(NF-κB)抑制剂α(NFKBIA)等关键靶点。GO分析主要涉及对化学应激的细胞反应、对类固醇激素反应、DNA结合转录因子结合、核受体活动、泛素蛋白连接酶等过程,KEGG富集分析主要有脂质和动脉粥样硬化、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶信号通路(MAPK)等信号通路。基因表达数据库分析验证表明,前6个核心靶点中,AR、RELA、TP53、NFKBIA、PTGS1差异有统计学意义(P<0.05)。分子对接结果显示主要活性成分与靶点均能自发结合且大部分结合能力良好。结论:银杏叶-葶苈子可能通过NF-κB、MAPK、PI3K/AKT信号通路等发挥抗炎、抗氧化应激作用,抑制成纤维细胞相关增殖和活化过程,减少细胞外基质沉积,从而发挥延缓心肌纤维化作用。

银杏叶多糖提取工艺优化及其活性研究

目的:比较不同方法提取银杏叶中多糖的差异并优化提取工艺条件,研究银杏叶多糖相关活性。方法:采用热水浸提法、闪式提取法、纤维素酶解辅助法制备银杏叶多糖,并使用响应面法优化银杏叶多糖提取工艺,同时通过测定银杏叶多糖清除DPPH自由基和亚硝酸盐的能力及小鼠免疫活性试验,对银杏叶多糖活性进行评价。结果:热水浸提法、闪式提取法、酶解辅助法提取银杏叶多糖的提取率分别为(7.38±1.47)mg/g、(14.53±1.35)mg/g、(21.99±2.64)mg/g,存在明显差异。经优化,酶解辅助法提取银杏叶多糖的最佳提取条件为:液料比32 mL/g、酶用量1.9%、酶解温度51℃、酶解时间90 min、酶解pH=5.0,在此条件下,提取率为(25.08±0.33)mg/g。当银杏叶多糖浓度范围为0.1~1.0 mg/mL时,其DPPH自由基清除率最高为92.76%,亚硝酸盐清除率最高为90.03%。银杏叶多糖具有免疫增强作用,且存在浓度依赖性;银杏叶多糖高剂量组小鼠各免疫指标均优于模型组。结论:纤维素酶解辅助法能够有效提升银杏叶多糖的提取率,其响应面法优化的最佳提取工艺条件稳定、可靠;银杏叶多糖具有较强的抗氧化、清除亚硝酸盐及增强免疫的活性。

基于网络药理学和分子对接技术探讨白果抗氧化作用机制

目的:基于网络药理学及分子对接技术初步探讨白果抗氧化的作用机制。方法:通过TCMSP数据库收集白果活性成分及靶点;利用GeneCards、OMIM和NCBI数据库对抗氧化靶点进行收集;利用STRING数据平台对药物和疾病靶标进行蛋白质-蛋白质相互作用分析(PPI),并将结果导入Cytoscape 3.9.1软件,拓扑分析得到核心靶点;基于核心靶点通过DAVID数据库进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析,建立“活性成分-核心靶点-通路”网络图并进行拓扑分析,筛选得到核心成分和核心靶点。利用AutoDock Vina进行分子对接对核心成分和核心靶点的相互作用进行验证。结果:共获得白果活性成分15个,对应靶点142个,疾病靶点11255个,共有靶点139个。经过蛋白互作及拓扑分析,得到核心靶点13个,核心靶点涉及139个基因功能条目和71条通路(P<0.05)。将“活性成分-核心靶点-通路”网络图进行拓扑分析,共筛选出表没食子儿茶素没食子酸酯、槲皮素、β-胡萝卜素、山柰酚、芒柄花素、异鼠李素、β-谷甾醇和(+)-儿茶素共8个核心成分,以及CASP3、CCND1、MYC、CTNNB1、MAPK8、FOS、EGFR、VEGFA、IL6、ESR1共10个核心靶点。结论:白果抗氧化具有多成分、多靶点和多通路的作用特点,白果活性成分可能通过上调VEGFA、ESR1蛋白的表达,下调CASP3、CCND1、MYC、CTNNB1、MAPK8、EGFR、IL6蛋白的表达,激活癌症、传染病、信号传导、内分泌代谢等相关通路来实现抗氧化作用。

白果中脂肪酸的GC-MS分析

将萃取所得白果油进行皂化、甲酯化后 ,进行GC-MS定性及相对含量分析 ,取得了满意的结果。实验检出30种脂肪酸 ,其中亚油酸和油酸占71.8%,不饱和脂肪酸占87.86%。

白果仁萜类内酯成分的指纹图谱研究

目的建立白果仁萜类内酯成分指纹图谱的测定方法,探索其炮制前后的变化。方法采用色谱柱AlltimaTM C18(5μm,4.6 mm×250 mm);蒸发光散射检测器;柱温30℃;甲醇-0.1%甲酸为流动相,体积流量1 mL/min梯度洗脱,对白果仁进行指纹图谱测定。并采用中药指纹图谱计算软件进行计算,建立白果仁中萜类内酯成分的共有指纹图谱。结果白果仁萜类内酯成分的HPLC-ELSD指纹图谱有12个共有峰,精密度、重复性、稳定性试验中各共有峰的相对ln(峰面积)及相对保留时间的RSD均小于4%。不同来源的白果仁相似度较好,炒制后的白果仁有一定的差异。结论方法重现性好,可用于白果的质量控制,为白果及其炮制品研究提供研究基础。

白果不同部位及不同炮制品中4种萜内酯类成分含量比较

目的：建立白果中白果内酯和银杏内酯A、B、C的含量测定方法,比较白果不同部位及不同炮制品中4种萜内酯类成分的含量差异。方法：采用甲醇索氏回流-乙酸乙酯萃取法提取白果中萜内酯类成分,HPLCELSD法同时测定4种萜内酯类成分含量。结果：白果内酯和银杏内酯A、B、C的线性范围依次为1.01~50.50μg,2.34~117μg,1.59~79.50μg,1.57~78.50μg,平均回收率在97.34%~98.67%。4种内酯类成分总量（μg·g-1）顺序为：胚（1600.14）〉中种皮（1592.93）〉胚乳（767.57）〉内种皮（654.78）〉去皮白果仁（650.74）〉白果仁（642.76）〉全白果（417.43）〉去皮蒸白果仁（286.61）〉去皮煮白果仁（269.57）〉去皮炒白果仁（261.30）。结论：本文建立的检测方法操作简便,可靠易行,可用于白果不同部位及不同炮制品中白果内酯和银杏内酯A、B、C的含量测定。白果不同部位中均含有4种内酯类成分,以胚中4种内酯成分总量最高。加热炒、蒸、煮制可降低白果中白果内酯和银杏内酯A、B、C的含量。

HPLC-ELSD法同时测定不同产地白果药材中4种萜内酯类成分

目的建立HPLC-ELSD法同时测定白果药材中白果内酯和银杏内酯A、B、C。方法白果乙酸乙酯萃取物的分析采用Kromasil C_（18）色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相为甲醇-0.1%甲酸水（38∶62）;柱温30℃,体积流量0.8 m L/min。结果白果内酯和银杏内酯A、B、C分别在1.01~40.40μg、1.03~41.20μg、2.37~94.80μg、1.51~60.40μg范围内线性关系良好（r〉0.999 5）,平均回收率在97.3%~99.2%之间。5个不同产地（山东济南、临沂、泰安,广西桂林和江苏泰兴）白果药材中四者的含有量分别为75.55~219.73、54.79~135.88、200.37~853.39、119.31~498.06μg/g。结论白果中4种萜内酯类成分的总含有量以江苏省泰兴市产者为最高。

微波炮制白果对APP/PS1转基因老年痴呆小鼠学习记忆能力的影响

目的研究微波炮制白果对APP/PS1转基因老年痴呆小鼠学习记忆能力的影响。方法比较炒制法、煮制法、微波法3种炮制方式对白果中化学成分的影响。小鼠从4月龄开始分别给予含有生白果及微波炮制熟白果的特殊饲料8个月,采用开场实验、新物体识别实验、Morris水迷宫实验等行为学实验评价小鼠学习记忆能力。行为学实验结束后,测定小鼠血清及脑组织中超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)水平,以及小鼠脑组织中Na+/K+ATPase水平,并观察海马组织病理形态。结果微波炮制是较好的白果炮制工艺。与模型组相比,微波炮制白果组T-SOD、CAT活力上调,MDA含有量下调,Na+/K+ATPase活力增加;生白果组无显著性差异。结论与生白果不同,微波炮制白果能显著改善老年痴呆小鼠受损的学习记忆能力,其机制可能与其提高机体抗氧化能力和激活细胞能量代谢有关。

基于网络药理学探讨白果治疗哮喘作用机制

目的基于网络药理学探讨白果治疗哮喘作用机制。方法基于TCMSP数据库获取白果化学成分及其对应靶点,基于OMIM、Gene Cards数据库获取哮喘相关靶点,利用Venny2.1绘制白果靶点与哮喘疾病靶点的韦恩图,利用Cytoscape3.6.1软件构建中药-靶点网络及应用STRING平台构建蛋白相互作用网络(PPI),最后,应用R语言软件对关键靶点进行GO富集分析和KEGG通路富集分析。结果共获得14个化合物,199个药物与哮喘相关靶点,有效成分中度值较高的为紫草酮(Shikodonin),奎尼辛(Quinicine)及芒柄花黄素(formononetin)等。PPI网络中核心基因为AKT丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT1)、白细胞介素-6(IL-6)、丝裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)等;GO富集分析显示DNA结合转录激活活性,RNA聚合酶Ⅱ特异性(DNA-bindingtranscription activator activity,RNA polymeraseⅡ-specific)为显著性最高的通路,其次是受体配体活性(receptor ligand activity)等;KEGG富集通路分析显示人巨细胞病毒感染为显著性最高的通路,其次是PI3K-Akt信号通路等。结论该研究系统地探讨了白果治疗哮喘的作用机制,为今后进一步实验验证提供了依据。

薄层色谱法鉴别银菊口服液中药材研究

目的:建立银菊口服液的薄层鉴别方法。方法:采用薄层色谱法对银菊口服液中的山茱萸、决明子、银杏叶进行定性鉴别。结果:薄层色谱中能明显检出山茱萸、决明子和银杏叶。结论:所建鉴别方法准确、可靠,可用于银菊口服液的质量控制。

白果不同部位及不同炮制品中白果酸和总银杏酸定量比较

目的定量比较白果不同部位及不同炮制品中白果酸和总银杏酸。方法采用甲醇回流-乙酸乙酯萃取法提取总银杏酸,用HPLC法测定白果不同部位(中种皮、内种皮、胚乳、胚)及不同炮制品(全白果、白果仁、去皮白果仁、炒白果仁、蒸白果仁、煮白果仁)中白果酸和总银杏酸。结果白果的被测部位均含有白果酸、白果新酸、十七烷二烯银杏酸、氢化白果酸和十七烷一烯银杏酸,白果酸和总银杏酸的含有量顺序为:胚>内种皮>中种皮>胚乳。白果不同炮制品中白果酸和总银杏酸含有量顺序为:全白果>白果仁>去皮白果仁>煮白果仁>炒白果仁、蒸白果仁。结论通过去皮及加热炒、蒸、煮制可明显降低白果中白果酸和总银杏酸的量。

中药超声雾化吸入治疗支气管哮喘临床观察

本文报道采用中药麻白合剂雾化吸入治疗42例支气管哮喘急性发作患者,与西药雾化吸入治疗35例对比,结果显示治疗组临床控制及显效率66.7%,总有效率92.9%;对照组临床控制及显效率42.9%,总有效率为74.3%,经统计学处理,两者均有显著性差异(p<0.05).治疗后治疗组患者EOS显著下降(p<0.05),与对照组相比差异明显(p<0.05).临床观察结果提示本方法能使药物直接作用于气道,标本兼治,有良好的祛痰止咳平喘功效,具有抗炎、抗变态反应的作用.

薏苡仁 莲子等7种药食同源类药材商品电子交易规格等级标准

目的:本文介绍了薏苡仁、莲子、山楂、荷叶、白扁豆、草果、白果等7种药食同源类药材的电子交易规格等级标准。

银杏外种皮多糖研究进展

银杏是我国古老的树种,其果实具有保健、药用价值,而银杏外种皮由于其具有特殊的臭味常在生产中被丢弃,因而对其利用甚少。研究表明,银杏外种皮中含有酚酸、挥发油和多糖等成分,银杏外种皮多糖具有抗氧化、抗癌、抗衰老等生物活性。笔者等对银杏外种皮多糖目前的研究进行归纳综述,以为相关研究工作者提供参考。

白果饮片质量标准修订研究

目的建立并完善白果饮片的质量标准。方法参照《中国药典》(2015年版)第一增补本相关方法对29批白果仁饮片及12批炒白果仁饮片进行性状鉴别,并测定水分含量。结果不同批次的白果仁饮片及炒白果仁饮片性状较一致;白果仁饮片水分含量为8.8%~12.2%,平均为10.5%;炒白果仁饮片水分含量为5.4%~12.3%,平均为8.9%。鉴于白果饮片存储较久,易虫蛀发霉,规定白果饮片水分含量不超过10.0%。结论与《中国药典》(2015年版)第一增补本相比,增加了白果仁及炒白果仁饮片的性状鉴别,完善了白果饮片的质量标准;白果仁及炒白果仁饮片水分含量需严格控制,不超过10.0%,以防止饮片发霉及虫蛀。

白果现代药理学研究概况

白果甘、苦、涩,性平,有小毒,具有敛肺止咳、止带缩尿的功效,临床应用以炮制品为主,多用于治疗咳嗽、痰多、气喘、带下白浊等病症。现代药理学研究,白果具有多种活性成分,具有改善血液循环、抗肿瘤、保护神经、抗氧化、抗神经毒性、抗菌、抗病毒、杀虫等作用。目前,由于白果潜在的毒性成分,致使其深加工产品匮乏,大多数白果的加工停留在鲜果仁、干果制品等,对功能性产品的开发较欠缺,商品附加值较低。今后应加大对白果活性成分的研究,探究其主要活性成分的药理、生理学作用,明确其功效,从分子机制进行阐述,为白果的深入开发提供循证学依据。此外,白果作为药食两用之品,有潜在的开发应用价值,应深入研究白果的药用价值,不断改进生产工艺、更新产品类型,为白果的开发提供新思路。

“肺与大肠相表里”视角下探索肠道菌群与肺癌因果关联及潜在干预中药预测

目的在“肺与大肠相表里”理论指导下采用孟德尔随机化(Mendelian randomization,MR)明确与肺癌发生具遗传因果效应的肠道菌群,并预测能通过调控肠道菌群干预肺癌的潜在中药。方法从IEU OpenGWAS数据库获取肠道菌群与肺癌的全基因组关联研究汇总数据。使用R语言TwoSampleMR软件包进行MR分析,以逆方差加权法为主要的遗传因果效应评估方法。对工具变量邻近基因进行功能富集分析以探析相关微生物介导肺癌发生的信号通路。结合CTD和Coremine数据库预测对工具变量邻近基因具有潜在调控作用的中药,统计其性味归经及功效信息。结果MR分析发现了10个与肺癌发生具遗传因果效应的肠道菌群,其中变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、毛螺菌科(Lachnospiraceae)、Marvinbryantia、瘤胃球菌科(Ruminococcaceae UCG004)和粪居拟杆菌Bacteroides coprocola菌群与肺癌发生风险降低相关,草酸杆菌科(Oxalobacteraceae)、普氏菌属7(Prevotella 7)、黑臭杆菌属(Odoribacter)和大肠杆菌Escherichia coli菌群与肺癌发生风险升高相关。工具变量邻近基因主要富集在Janus激酶(Janus kinase,JAK)/信号转导和转录激活因子(signal transducer and activator of transcription,STAT)、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator activated receptor,PPAR)和磷脂酰肌醇-3-羟激酶(phosphatidylinositol-3-hydroxykinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)等信号通路。潜在调控中药四气以温为主,寒、平次之,五味以苦味为主,甘、辛次之,归经以肝为主,肺、脾、胃和肾次之,功效以清热为主,补虚次之,还包含活血、理气、祛风湿、化痰止咳平喘和利水渗湿等。其中映射频率靠前的代表中药包括人参、马齿苋、生姜、姜黄、郁金、白果、五味子和丹参等。结论基于“肺与大肠相表里”中医经典理论,采用MR分析发现以厚壁菌门、Marvinbryantia和变形菌门为代表的10种肠道菌群可能通过JAK/STAT、MAPK、PPAR和PI3K/Akt等信号通路介导肺癌发生发展。潜在调控中药主要包括清热药、补虚药、活血药和理气药等。丰富了“肺与大肠相表里”的生物学内涵,将为从“肠道菌群”视角探索肺癌的中医药防治策略提供参考。

HPLC-ELSD法测定白果中银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C

目的建立HPLC-ELSD法同时测定白果药材中银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C 3个萜杏内酯成分。方法采用Agilent 5TC C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,以甲醇–四氢呋喃–水（25∶10∶65）为流动相,体积流量1 m L/min,柱温30℃,蒸发光散射检测器检测,对照品进样量为10、20μL,供试品溶液进样量为5~20μL。结果银杏内酯A在0.37~5.92μg、银杏内酯B在2.8~44.8μg、银杏内酯C在0.65~10.4μg时线性关系良好。银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C平均回收率分别为92.40%、95.03%、91.29%,RSD值分别为2.75%、2.06%、2.88%。结论本法操作简单,重复性好,为白果药材的质量控制提供了依据。

超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱测定银杏叶片中5种微量银杏酸含量研究

目的建立了利用超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱测定银杏叶片中银杏酸的分析方法。方法样品经体积分数80%甲醇超声提取后,采用waters Acquity UPLC BEH C_(18)(2.1 mm×5 mm,1.7μm),以甲醇-0.1%甲酸为流动相,流速为0.4 mL·min^(-1),柱温为30℃;采用电喷雾离子源,负离子模式下,以多反应监测方式(MRM)检测。结果银杏酸C13∶0、C15∶1、C17∶1、C17∶2及C15∶0在1~200 ng·mL^(-1)范围内呈良好的线性关系,相关系数均大于0.9985。在4、40、80 ng·mL^(-1)加标水平下的平均加样回收率为81.57%~101.45%,相对标准偏差为4.66%~11.39%,检出限为0.40~0.44 pg,定量限为1.00~1.11 pg。结论建立的检测方法可应用于银杏叶片中银杏酸的测定。73批银杏叶片中有1批超出限度要求,整体风险较低。

白果中止咳化合物GK-A在大鼠尿液和胆汁中的排泄行为分析

目的:研究白果中有止咳作用的新化合物GK-A在大鼠尿液和胆汁中的排泄行为。方法:利用UPLC-MS/MS测定大鼠尿液和胆汁中GK-A的含量,色谱分离采用C18色谱柱,流动相0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0~1 min,95%A;1~3 min,95%~85%A;3~7.5 min,85%~40%A;7.5~8 min,40%A),流速0.2 mL·min-1,柱温35℃,进样量0.5μL;质谱采用电喷雾离子源,在正离子模式下采用多重反应监测(MRM)方式测定,GK-A和GK-2(内标)的定量离子对分别为m/z 453.1~291.1,467.0~305.1。大鼠灌胃给予GK-A后,收集不同时间段尿液和胆汁,测定样品中GK-A的含量,计算其累积排泄量和累积排泄率。结果:给药72 h后GK-A在大鼠尿液中的累积排泄量(12.35±2.69)μg,累积排泄率(0.58±0.13)%;给药24 h后GK-A在大鼠胆汁中的累积排泄量(55.16±29.22)μg,累积排泄率(1.57±0.83)%。GK-A原型经大鼠尿液和胆汁排泄的量较少,且排泄速度慢。结论:灌胃给药后,GK-A原型经大鼠尿液和胆汁的排泄不是其主要的消除途径。