基于BMSCs淫羊藿-仙茅-巴戟天角药抗骨质疏松药效物质提取工艺研究

目的筛选淫羊藿-仙茅-巴戟天角药抗骨质疏松药效物质的最佳提取工艺。方法采用正交设计,选取提取时间、料液比、乙醇浓度为考察因素,以BMSCs细胞增殖率结合淫羊藿苷、总黄酮含量为考察指标,筛选淫羊藿-仙茅-巴戟天角药抗骨质疏松药效物质的最佳提取工艺,并对最佳提取条件进行验证。结果兼顾生产效率和节约能源,优选出淫羊藿-仙茅-巴戟天角药药效物质的最佳提取条件为提取时间1.5 h,乙醇浓度55%,溶剂用量10倍。验证实验结果BMSCs细胞增殖率、淫羊藿苷及总黄酮含量与工艺考察结果非常接近。结论该方法在保证淫羊藿-仙茅-巴戟天角药治疗骨质疏松的药效基础上,结合淫羊藿苷及总黄酮含量进行综合评价,优化提取工艺,使得实验结果更科学合理。

淫羊藿治疗骨不连机制研究

淫羊藿是我国传统中医药药材之一,一般指小檗科植物淫羊藿、箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿或朝鲜淫羊藿的干燥叶,淫羊藿苷(icariin,ICA)是其主要成分,具有免疫调节、抗炎、抗衰老、抗肿瘤等活性,对骨不连、骨质疏松等多种骨科疾病具有治疗作用,而骨不连是目前骨科学界的难题之一,针对骨不连的病理因素,该文从炎症改善、促进血管生成、促进干细胞生成和信号级联改变几个方面对近年来淫羊藿治疗骨不连的研究进行了汇总,供广大学者参考。

基于网络药理学和分子对接技术探究黄芪-淫羊藿治疗甲状腺功能减退症的机理

目的基于网络药理学和分子对接技术探究黄芪-淫羊藿治疗甲状腺功能减退症的可能机制。方法使用中药系统药理数据库(TCMSP)获取药物有效成分,并且预测靶点。获取2D结构图,并录入Phrammarpper数据库获得成分靶点。使用PharmGKb数据库、GeneCard数据库、DrugBank数据库、Therapeutic Target Database数据库预测疾病靶点。使用R 4.3.3获取药物疾病交集靶点。使用String数据库构建靶点蛋白互作网络(protein-protein interaction netuorks,PPI)。使用R 4.3.3和Cytoscape软件中Citispace获取核心靶点。通过R 4.3.3中BiocManager包和OrgDb包等和R Studio软件进行基因百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)和基因本体(gene ontology,GO)富集分析。使用Cytoscape软件,建立“药物-成分-靶点-通路”网络关系图。结果获得药物核心成分10个,为槲皮素(quercetin)、山柰酚(kaempferol)、木犀草素(luteolin)、白桦脂酸(betulinic acid)等10个核心成分;PPI蛋白互作网络分析得到RAC-α丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(RAC-alphaserine/threonine-proteinkinase,AKT1)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor,TNF)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、细胞肿瘤抗原p53(cellular tumor antigen p 53,TP53)等16个淫羊藿-黄芪与甲减的关键靶点。GO富集主要是于质膜外侧、囊泡腔等组分上进行的细胞凋亡与增殖、对氧化应激的反应等过程。KEGG富集主要包括脂质和动脉粥样硬化通路、糖尿病并发症中的糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGE)-糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)-蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路等前30个信号通路。通过药物-成分-靶点-通路网络得到了槲皮素、AKT1、脂质与动脉粥样硬化通路3个关键节点。结论黄芪-淫羊藿可能通过多种成分共同作用于多个靶点形成多条信号通路来发挥对甲减的治疗作用,其中槲皮素-PI3K/AKT信号通路可能是其关键途径之一。

基于下丘脑-垂体-性腺轴功能研究淫羊藿女贞子配伍对自然衰老骨质疏松大鼠的影响

目的 结合体内、体外实验,研究淫羊藿女贞子配伍影响下丘脑-垂体-性腺轴(hypothalamic-pituitary-gonadal axis, HPGA)功能防治老年性骨质疏松(senile osteoporosis, SOP)的作用机制。方法 15月龄雄性SD大鼠,随机分为4组,包括SOP组,淫羊藿组(2 g·kg)、女贞子组(1.5 g·kg)、淫羊藿女贞子配伍组(3.5 g·kg),每组8只,以3月龄雄性大鼠为青年对照组(青年组)。青年组适应性饲养1周后处死,其余组灌胃给予相应药物至17月龄,然后处死大鼠。取血清,酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone, GnRH)、促黄体生成激素(luteinizing hormone, LH)、促卵泡激素(follicle stimulating hormone, FSH)、睾酮(testosterone, T)及雌二醇(estradiol, E)的含量。对成骨细胞(osteoblast, OB)进行正常培养、10 ng/mL转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)刺激和50 ng/mL肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激,并分别给予2.5%正常大鼠血清、5.0%淫羊藿含药血清、5.0%女贞子含药血清、2.5%淫羊藿女贞子含药血清,干预48 h后,采用蛋白免疫印迹法(western blot, WB)结合荧光实时定量PCR法(quantitative real time PCR,qRT-PCR)检测细胞雌激素受体(estrogen receptor, ER)ERα、ERβ和雄激素受体(androgen receptor, AR)的蛋白及mRNA表达。结果 与青年组比较,SOP组大鼠血清GnRH、T及E的含量均显著降低,FSH的含量显著升高(P<0.05或P<0.01)。与SOP组比较,配伍组大鼠血清GnRH、T及E的含量均显著升高,LH及FSH的含量均显著降低(P<0.05或P<0.01)。淫羊藿女贞子含药血清可显著上调正常培养和TNF-α刺激的OB细胞ERα、ERβ表达,及三种状态下OB细胞的AR表达,抑制TGF-β1刺激下OB细胞ERα、ERβ表达(P<0.05或P<0.01)。结论 淫羊藿女贞子配伍防治SOP的作用机制可能与改善HPGA功能有关。

基于星点设计-效应面法的巫山淫羊藿油炙炮制工艺优化研究

目的采用星点设计-效应面法优选巫山淫羊藿油炙炮制工艺。方法选取炮制温度、炮制时间、占锅体积作为主要考察因素,以朝藿定A、朝藿定B、淫羊藿苷、朝藿定C的含量作为考察指标,采用星点设计-效应面法优选巫山淫羊藿的炮制工艺。结果炮制温度115℃,炮制时间10 min,占锅体积25%(约12.5 g)时的工艺最佳。结论采用星点设计-效应面法优选所得的巫山淫羊藿油炙炮制工艺合理。

淫羊藿苷药理作用及应用研究进展

淫羊藿(Epimedium brevicornum Maxim)是一种中药材,广泛用于各种现代中成药产品和传统中药制剂。淫羊藿属植物中化学成分丰富,现已发现黄酮、多糖、植物甾醇等260多种化学成分,其中淫羊藿苷(Icariin,ICA)含量最丰富。淫羊藿苷不仅具有广泛的药理作用,如生殖功能、骨保护作用、神经保护作用、心血管保护作用,还有一定的抗病效果,如抗肿瘤作用、抗炎作用、提高免疫力等,并能用于治疗多种疾病。结合近年来国内外研究现状,对淫羊藿苷的药理作用及在相关疾病预防治疗的应用进行综述,以期为其未来的产品开发和相关疾病的预防治疗提供参考依据。

淫羊藿治疗男性不育症的作用机制研究进展

目前,我国已经进入低生育率社会,其中男性生育能力低下是重要原因之一。淫羊藿作为补肾中药,用于治疗男性不育症由来已久,但是相关综述较少。文章通过检索近15年来运用淫羊藿治疗男性不育症的国内外文献并对其相关作用机制进行综述,为进一步研究淫羊藿的药理作用及临床运用淫羊藿提供依据,为中药淫羊藿的进一步开发利用提供参考。

基于网络药理学研究淫羊藿改善心肌重塑的有效成分和作用机制

目的运用网络药理学方法研究淫羊藿改善心肌重塑的有效成分和作用机制。方法利用中药系统药理学技术平台TCMSP数据库筛选出淫羊藿口服生物利用度≥30%和类药性≥0.18的主要活性成分及其靶点基因,通过GeneCards、OMIM等数据库获取心肌重塑靶点基因。将成分靶点与疾病靶点上传至String数据库,构建中药成分靶蛋白-疾病靶蛋白互作网络,并根据其度值筛选出关键靶点。借助DAVID分析平台对关键靶标进行基因本体(GO)分析和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果共获取淫羊藿活性成分23个,与心肌重塑交集的关键靶标78个,包括白介素6(IL-6)、半胱氨酸蛋白酶(CASP)3、血管内皮生长因子A(VEGFA)、表皮生长因子受体(EGFR)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)8等基因,主要富集在恶性肿瘤途径(Pathways in cancer)、肿瘤坏死因子信号通路(TNF signaling pathway)、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路(PI3K-Akt signaling pathway)、缺氧诱导因子1信号通路(HIF-1 signaling pathway)、促乳素信号通路(Prolactin signaling pathway)等。结论本研究结果初步验证和预测了淫羊藿改善心肌重塑的作用机制,为进一步深入揭示其分子机制提供了理论基础。

淫羊藿、黄芪、葛根治疗阿尔茨海默病分子机制的网络药理学及分子对接研究

目的:通过网络药理学及分子对接技术探讨淫羊藿、黄芪、葛根治疗阿尔茨海默病的作用机制。方法:利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、BATMAN-TCM生物信息学分析工具收集3味中药主要成分及潜在的作用靶点,并将其与阿尔茨海默病(AD)相关基因进行映射,得出3味中药治疗AD的作用靶标,构建蛋白-蛋白相互作用网络并进行可视化。利用DAVID数据库进行KEGG通路富集并构建“重要活性成分-靶标-作用通路”图。将蛋白-蛋白相互作用网络图中排名前5位的靶标及目前已知与AD发病密切相关的四个基因(淀粉样前体蛋白、Tau蛋白、乙酰胆碱酯酶、糖原合成酶激酶-3β)与3味中药主要有效成分进行分子对接,以验证其治疗作用。结果:研究得到77个有效成分,428个靶基因及56个信号通路。分子对接表明3味中药有效成分和靶基因的结合效果与西药去铁胺、盐酸多奈哌齐和靶基因的结合效果相似。系统对接显示中药有效成分与靶基因结合性较好。结论:淫羊藿、黄芪、葛根均有直接治疗AD的作用,且效果与西药类似;治疗的分子机制与钙信号通路、Toll样受体信号通路、mTOR信号通路等相关。

甘肃地区淫羊藿指纹图谱建立及主成分分析

目的建立甘肃地区淫羊藿药材HPLC指纹图谱,对主要的黄酮类成分进行定量分析,结合主成分分析,评价不同产地药材质量的优劣。方法采用HPLC建立适合甘肃地区淫羊藿药材的指纹图谱。运用标准曲线法对黄酮类成分定量分析。通过SPSS软件对共有峰峰面积进行主成分分析,得出质量评价模型,评价药材质量。结果建立了甘肃地区21批淫羊藿药材HPLC指纹图谱。确定了8个共有色谱峰,指认了其中6个。相似度评价在0.497-0.980,表明甘肃地区淫羊藿药材质量差异较大。黄酮类成分定量分析结果显示,除了13号样品,其余20个样品的含量总和在1.5%之上。主成分分析提取的3个主成分累积方差贡献率达到80.064%。根据综合质量评价模型显示陇南西和县、陇南宕昌县、兰州榆中县、甘南迭部县和陇南成县等地的药材质量优于其他地方。结论建立的淫羊藿HPLC指纹图谱,方法学考察符合规定,信息丰富。结合主成分分析建立质量评价模型,为科学评价甘肃地区淫羊藿药材质量提供参考。

基于化学指纹-细胞代谢组学相关性分析淫羊藿及巫山淫羊藿促成骨分化的药效物质基础

目的:确定淫羊藿及巫山淫羊藿促进成骨分化的药效物质基础,并建立一种基于化学指纹与细胞代谢组学相关性分析中药药效物质基础的方法。方法:采用超高效液相-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS)分析4种基原15批淫羊藿和3批巫山淫羊藿药材的化学指纹,通过偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)对不同基原淫羊藿及巫山淫羊藿化学指纹峰面积进行统计学分析;运用细胞增殖与活性检测法(CCK-8)和酶联免疫吸附测定法(ELISA)分别检测淫羊藿及巫山淫羊藿对MC3T3-E1成骨前体细胞增殖活力及成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性的影响,采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱法(UPLC-Q-TOF-MS/MS)分析不同基原淫羊藿及巫山淫羊藿对MC3T3-E1细胞代谢组学的影响。构建细胞代谢组峰表,并引入平均药效作用指标mean Y0,采用PLS及Pearson相关性分析计算各组mean Y0和化学指纹的相关性,依据变量重要性投影(VIP)值>1筛选淫羊藿促成骨分化的药效成分,依据各组的mean Y0评价淫羊藿及巫山淫羊藿的药效作用。结果:各基原淫羊藿及巫山淫羊藿化学指纹可完全分离。与空白组比较,不同基原淫羊藿及巫山淫羊藿组MC3T3-E1细胞活力均明显增加,淫羊藿(甘肃)、朝鲜淫羊藿、柔毛淫羊藿组均可明显增强MC3T3-E1细胞ALP活性(P<0.05)。细胞代谢组学结果显示,空白组与模型组有明显的分离趋势,不同基原淫羊藿及巫山淫羊藿与模型组距离有差异,表明不同基原淫羊藿及巫山淫羊藿促成骨分化作用具有差异。化学指纹-细胞代谢组学整合分析筛选出9个成分与药效关系密切,包括双藿苷B、朝藿定C、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ、yinyanghuo B、β-脱水淫羊藿素、木兰花碱、隐绿原酸和槲皮素,以朝鲜淫羊藿促成骨分化的药效作用最强。结论:该研究确定了不同基原淫羊藿及巫山淫羊藿促成骨分化的药效物质基础多为黄酮类、生物碱类和有机酸类成分,为中药药效相关成分筛选及中药疗效预测提供思路与方法。

不同炮制方法巫山淫羊藿中3个黄酮类成分油水分配系数的比较

目的:比较巫山淫羊藿不同炮制品水煎液中朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅱ3个黄酮类成分的油水分配系数。方法:采用摇瓶法测定不同炮制品中3个成分在正辛醇-水/缓冲盐溶液中的油水分配系数,采用HPLC方法同时测定3个成分的浓度。结果:3个成分在不同pH下油水分配系数,在pH 1.2、pH 7.4、pH 7.8等条件下,油炙品中的油水分配系数均高于生品。结论:单体成分与其在饮片中的油水分配系数不同,羊脂油炙后有利于3个黄酮类成分的分布吸收,可能是巫山淫羊藿油炙后增效的作用机制之一。

五味子-淫羊藿混合提取物对D-半乳糖致脑衰老小鼠学习记忆能力的改善作用

目的:研究五味子与淫羊藿混合提取物(SEE)对D-半乳糖诱导脑衰老小鼠学习记忆的影响,并探讨其相关机制。方法:将ICR小鼠随机分为5组,即空白组(蒸馏水灌胃,生理盐水皮下注射),衰老模型组(蒸馏水灌胃,D-半乳糖220 mg·kg^(-1)皮下注射),150,300,600 mg·kg^(-1)SEE组(SEE灌胃,D-半乳糖皮下注射)连续给药7周。通过避暗实验及跳台实验观察SEE对小鼠学习记忆能力的影响。应用水溶性四氮唑-1(water soluble tetrazolium-1,WST-1)法及硫代巴比妥酸法检测小鼠脑组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力与丙二醛(malonic dialdehyde,MDA)含量;通过实时荧光定量PCR检测小鼠脑组织p19,p53,p21 mRNA表达情况。通过亚油酸-硫氰酸铁法及Oyaizu法对SEE体外抗氧化能力进行检测。结果:避暗实验及跳台实验结果显示300,600 mg·kg^(-1)SEE可明显提高D-半乳糖诱导的脑衰老小鼠的学习记忆能力(P<0.05,P<0.01);同时,300,600 mg·kg^(-1)SEE组小鼠脑组织中SOD的活力明显增加(P<0.05,P<0.01),MDA含量明显减少(P<0.05,P<0.01),脑组织中p19,p53,p21 mRNA表达量明显降低(P<0.05,P<0.01)。亚油酸-硫氰酸铁法实验结果显示,反应体系建立36 h后,SEE对亚油酸的氧化抑制强于维生素E;Oyaizu实验结果显示,SEE对Fe3+的还原能力优于维生素E,吸光度达到0.711。结论:本研究明确了SEE能够改善D-半乳糖致脑衰老小鼠的学习记忆能力,该作用可能与其提高小鼠抗氧化能力以及降低小鼠脑组织中p19,p53,p21基因表达水平有关。