薏苡附子败酱散通过抗三结构域蛋白21-Toll样受体4-t-核因子-κB信号通路对类风湿关节炎MH7A细胞的影响

目的观察不同浓度薏苡附子败酱散对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的类风湿关节炎成纤维细胞(MH7A)增殖、凋亡及炎症反应的影响,探究其作用机制。方法2022年2―8月,大鼠用不同浓度薏苡附子败酱散及蒸馏水灌胃制备含药血清;20μg/L的TNF-α处理的MH7A细胞记为TNF-α组,TNF-α+含药血清处理的MH7A细胞记为薏苡附子败酱散低浓度组、薏苡附子败酱散中浓度组、薏苡附子败酱散高浓度组,正常培养的MH7A细胞标记为对照组。细胞计数试剂盒(CCK8)、流式细胞术、酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞的存活、凋亡及白细胞介素(IL)-1β、干扰素(IFN)-γ;蛋白质印迹法(WB)检测基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-9、抗三结构域蛋白21(TRIM21)、Toll样受体4(TLR4)、t-核因子(NF)-κB p65、磷酸化(p)-NF-κB p65、p-NF-κB抑制因子(IκB)-α和t-IκB-α蛋白表达。pcDNA 3.1组(转染空载体)、pcDNA+TRIM21组(转染pcDNA 3.1+TRIM21)、薏苡附子败酱散中浓度+si-con组(转染si-con+4.70 g/kg含药血清)、薏苡附子败酱散中浓度+si-TRIM21组(转染si-TRIM21+4.70 g/kg含药血清)。结果与对照组相比,TNF-α组细胞存活率(105.07±1.90比185.67±3.06)、TRIM21(0.56±0.02比0.68±0.04)、MMP-3(0.18±0.00比0.63±0.02)、MMP-9(0.39±0.01比0.82±0.01)、TLR4(0.25±0.02比0.68±0.07)、p-NF-κB p65(0.24±0.01比0.68±0.06)、p-IκB-α(0.22±0.01比0.55±0.04)蛋白表达和IL-1β(31.65±0.66比101.93±0.60)、IFN-γ(8.53±0.16比63.76±1.35)含量均显著升高,凋亡率(6.54±0.06比1.17±0.08)均显著降低;与TNF-α组相比,薏苡附子败酱散低浓度组(185.67±3.06比153.77±3.09;0.68±0.04比0.37±0.02;0.63±0.02比0.47±0.02;0.82±0.01比0.73±0.01;103.2±0.7比92.93±0.85;66.3±1.45比54.47±1.46;0.68±0.07比0.53±0.05;0.68±0.06比0.53±0.06;0.55±0.04比0.47±0.01;1.84±0.07比6.67±0.28)、薏苡附子败酱散中浓度组(185.67±3.06比136.23±1.57;0.68±0.04比0.57±0.02;0.63±0.02比0.37±0.02;0.82±0.01比0.57±0.00;103.2±0.7比86.4±0.75;66.3±1.45比38.1±0.92;0.68±0.07比0.43±0.07;0.68±0.06比0.59±0.01;0.55±0.04比0.40±0.03;1.84±0.07比9.59±0.29)、薏苡附子败酱散高浓度组(185.67±3.06比143.47±1.50;0.68±0.04比0.47±0.02;0.63±0.02比0.41±0.05;0.82±0.01比0.62±0.00;103.2±0.7比89.63±0.42;66.3±1.45比40.17±0.90;0.68±0.07比0.51±0.06;0.68±0.06比0.69±0.07;0.55±0.04比0.41±0.02;1.84±0.07比8.89±0.08)细胞存活率、TRIM21、MMP-3、MMP-9蛋白和IL-1β、IFN-γ含量及TLR4、p-NF-κB p65、p-IκB-α蛋白表达均显著降低,凋亡率均显著升高(P<0.05);与pcDNA组相比,pcDNA+TRIM21组细胞TRIM21蛋白表达(0.24±0.03比0.51±0.04)、细胞凋亡率(1.61±0.11比12.43±0.61)均显著升高,MMP-3(0.64±0.02比0.41±0.04)、MMP-9(0.82±0.03比0.45±0.02)、IL-1β(110.63±0.55比90.93±0.60)、IFN-γ(64.5±0.82比48.1±1.25)及细胞存活率(179.03±0.74比120.07±0.60)均显著降低;敲减TRIM21显著抑制薏苡附子败酱散中浓度对损伤细胞的治疗作用且显著升高TLR4(0.45±0.06比0.61±0.02)、p-NF-κB p65(0.49±0.02比0.56±0.02)、p-IκB-α(0.38±0.01比0.62±0.01)的蛋白表达。结论薏苡附子败酱散增强TNF-α诱导的MH7A细胞的生存能力,其作用机制与上调TRIM21抑制TLR4-NF-κB信号通路活性有关。

薏苡附子败酱散联合电针治疗对AOM/DSS小鼠炎症相关性结直肠癌的防治作用及机制

目的:探究薏苡附子败酱散(Yiyi Fuzi Baijiang San,YYFZBJS)联合电针(electroacupuncture,EA)对AOM/DSS模型小鼠炎症相关性结直肠癌(colitis-associated colorectal cancer,CAC)的防治作用及对结直肠癌上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白表达情况的影响。方法:建立AOM/DSS诱导的CAC小鼠模型,将40只小鼠随机分为模型组、针药结合组、薏苡附子败酱散组、电针组和阿司匹林组,于实验第2周开始干预治疗,治疗过程中记录各组小鼠一般情况,统计体质量变化、疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分及生存情况,于实验末比较各组小鼠结直肠长度、成瘤数量及肿瘤大小,通过HE染色观察结直肠组织及肿瘤组织的病理变化,免疫组织化学染色观察结直肠肿瘤Ki-67、PCNA、p-NF-κB、NF-κB、E-cadherin、ZO-1、Occludin、Vimentin和N-cadherin蛋白的表达。结果:与模型组相比,针药结合组小鼠体质量显著升高(P<0.05),DAI分值降低(P<0.05),生存率为87.5%,结直肠长度显著增加(P<0.01),直径小于2 mm的肿瘤数量减少(P<0.05),直径介于2~4 mm之间和大于4 mm的肿瘤数量显著减少(P<0.01),总成瘤数量明显下降(P<0.01),结直肠形态明显改善;肿瘤组织病理评分降低(P<0.01),肿瘤组织中Ki-67、PCNA、p-NF-κB、NF-κB、Vimentin和N-cadherin蛋白表达量降低(P<0.01),E-cadherin、ZO-1和Occludin蛋白表达量升高(P<0.05)。结论:薏苡附子败酱散联合电针对AOM/DSS模型小鼠的CAC发生发展有防治作用,其机制可能与下调NF-κB信号通路,减缓EMT进程有关。

薏苡附子败酱散治疗盆腔炎性疾病的潜在药理学作用机制及实验验证

目的:采用网络药理学方法探索薏苡附子败酱散治疗盆腔炎性疾病(PID)潜在作用机制,并通过动物实验对相关炎症指标进行验证。方法:通过“中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)”检索薏苡附子败酱散成分和靶点,人类基因数据库(GeneCard)及在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)检索PID靶基因。可视化工具绘制“疾病-药物”蛋白互作用网络图,行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,通过动物实验对相关炎症指标进行验证。结果:薏苡附子败酱散治疗PID有21个有效成分及197个靶基因,“疾病-药物”有47个交集基因。GO富集有77个条目,主要与氧化应激反应、上皮细胞增殖等有关,KEGG富集分析有125条通路,主要涉及糖基化终产物受体配体通路、液体剪切应力和动脉粥样硬化、促分裂素原活化蛋白激酶信号通路等。这些通路与炎症反应相关。故由此推测薏苡附子败酱散可能通过抗炎治疗PID。动物实验证明:薏苡附子败酱散可降低PID大鼠血清及子宫组织中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及提高白细胞介素-10(IL-10)水平及表达,改善结果呈剂量依赖性关系。结论:薏苡附子败酱散可通过调节IL-6、IL-10、TNF-α水平及其蛋白表达情况而发挥治疗PID的作用。

薏苡附子败酱散水煎液高效液相指纹图谱的建立及8种成分含量测定

目的采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)建立薏苡附子败酱散水煎液的指纹图谱,并对绿原酸、咖啡酸、芦丁、异绿原酸B、异绿原酸A、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、槲皮素8种成分进行含量测定。方法使用Agilent ZORBOX Extend-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.05%磷酸水溶液(p H2.5)为流动相进行梯度洗脱;流速1.0 m L/min;检测波长230 nm;柱温30℃;进样量10μL。结果10批样品指纹图谱的相似度在0.996以上。共标定了51个共有色谱峰,并指认其中8个峰,分别为绿原酸、咖啡酸、芦丁、异绿原酸B、异绿原酸A、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、槲皮素。上述8种成分在线性范围内呈良好的线性关系,相关系数均≥0.9993;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均<5.0%;加样回收率为97.27%~102.81%,RSD≤3.93%。结论应用HPLC建立的指纹图谱反应了薏苡附子败酱散水煎液中的成分,可作为薏苡附子败酱散水煎液的质量控制方法。

薏苡附子败酱散治疗过敏性皮肤病验案二则

薏苡附子败酱散本为治疗肠痈脓已成而未溃,方中薏苡仁十分利湿排脓,附子二分温阳散结,败酱五分排脓解毒,共奏散痈解毒,振奋阳气之效;病程越长,附子剂量越大,灵活变化,不偏离散寒祛湿,可广泛应用于临床各科,如湿疹、慢性荨麻疹等过敏性皮肤病,在振奋阳气基础上解毒利湿,恰中慢性过敏性皮肤病正虚邪恋之病机,内谙"病痰饮者,当以温药和之"大法,发挥独特优势,缩短治疗时间,降低复发几率,疗效显著。

当归芍药散合薏苡附子败酱散加减治疗中重度痤疮湿热瘀结证的临床作用

目的:观察当归芍药散合薏苡附子败酱散加减治疗中、重度痤疮湿热瘀结证的临床疗效作用及对血清白细胞介素-1α(IL-1α),白细胞介素8(IL-8),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),胰岛素样生长因子-1(IGF-1)水平的影响。方法:将符合要求的152例患者按就诊先后采用随机数字表法分为对照组75例和联合组77例。20例受试者作为健康对照组。对照组Ⅱ级患者使用他扎罗汀倍他米松乳膏,适量外涂,2次/d;Ⅲ级患者在使用外涂的同时,口服盐酸多西环素片,100 mg/次,2次/d;Ⅳ级患者,在此基础上给予阿维A胶囊,20 mg/次,2次/d,服用4周。联合组在对照组治疗的基础上加用当归芍药散和薏苡附子败酱散加减治疗。两组疗程均为8周。进行治疗前后皮损严重程度评分(GAGS)和中医证候评分,进行治疗前后痤疮患者特异性生活质量量表(Acne-QOL)评分;检测治疗前后IL-1α,IL-8,TNF-α,IGF-1水平。结果:联合组总有效率为90.91%,高于对照组的78.67%(P<0.05);治疗后联合组GAGS评分和中医证候评分均低于对照组(P<0.01);治疗后联合组Acne-QOL量表4个维度(自我感知、情感功能、痤疮症状、社会功能)评分和总分均高于对照组(P<0.01);与健康对照组比较,两组患者血清IL-1α,IL-8,TNF-α和IGF-1水平均明显升高(P<0.01);治疗后两组IL-1α,IL-8,TNF-α和IGF-1水平均较治疗前下降(P<0.01),治疗后联合组IL-1α,IL-8,TNF-α和IGF-1水平低于对照组(P<0.01),但仍高于健康对照组(P<0.01)。结论:在常规西医分级治疗的基础上加服当归芍药散合薏苡附子败酱散加减治疗中、重度痤疮患者,能减轻患者皮损程度,改善中医症状,提高疾病的临床疗效和生活质量,其作用机制可能与下调血清IL-1α,IL-8,TNF-α和IGF-1水平有关。

基于Nrf_(2)通路薏苡附子败酱散联合西药对葡聚糖硫酸钠盐诱导小鼠结肠炎黏膜修复的影响

目的:研究薏苡附子败酱散联合美沙拉嗪对葡聚糖硫酸钠盐(DSS)诱导的小鼠实验性结肠炎的疗效及肠黏膜损伤修复机制。方法:50只BALB/c雄性小鼠完全随机分为空白组、模型组、西药组、中药组、中西药组,每组10只。DSS诱导慢性实验性结肠炎小鼠模型,西药组给予DSS 7 d后,每天分别给予0.4 g/kg美沙拉嗪灌胃治疗;中药组给予DSS 7 d后,每天分别给予5.24 g/kg薏苡附子败酱散灌胃治疗;中西药组给予DSS 7 d后,每天分别给予5.24 g/kg薏苡附子败酱散和0.4 g/kg美沙拉嗪联合灌胃治疗。30 d后处死全部小鼠,观察记录疾病活动指数(DAI)评分,苏木精-伊红染色法观察组织病理学改变及记录结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分,采用ELISA法测定肠组织中髓过氧化物酶(MPO)的活性,采用Western Blot法检测肠组织中红系衍生核因子相关因子2(Nrf_2)和紧密连接蛋白-1(claudin-1)、紧密连接蛋白-2(claudin-2)蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组DAI和CMDI评分、MPO活性显著性升高(P<0.05),claudin-2、Nrf_2蛋白表达均显著性上调(P<0.05),claudin-1蛋白表达均显著性下调(P<0.05);与模型组比较,各给药组对以上指标均有不同程度的改善和调控,尤以中西药组最为明显,其明显降低CMDI评分和claudin-2蛋白的过度表达(P<0.05),改善性上调claudin-1蛋白、Nrf_2蛋白(P<0.05)。结论:薏苡仁附子败酱散联合美沙拉嗪对DSS诱导的小鼠慢性实验性结肠炎及结肠病变具有明显的抑制作用,效应明显优于单独薏苡仁附子败酱散组和美沙拉嗪灌胃组。二药联合通过上调Nrf_2蛋白的表达而有效改善抗氧化应激的防御机制。另一方面,其调控病变结肠组织claudin-1/claudin-2蛋白表达,改善慢性溃疡性结肠炎(UC)小鼠结肠黏膜的通透性。这可能是薏苡仁附子败酱散联合美沙拉嗪治疗UC黏膜损伤修复的主要机制。

薏苡附子败酱散加减保留灌肠治疗溃疡性结肠炎的疗效及对血清SOD、TNF-α、IL-1β表达的影响

为观察薏苡附子败酱散加减保留灌肠治疗溃疡性结肠炎(UC)的疗效及对血清SOD、TNF-α、IL-1β表达的影响,将80例活动期UC患者随机分为观察组和对照组,每组40例。观察组给予薏苡附子败酱散加减保留灌肠,对照组给予美沙拉嗪肠溶片口服,15d为1个疗程,共治疗2疗程。比较2组患者治疗前、治疗后15d时血清中超氧化物歧化酶(SOD)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)表达水平,以及治疗1个月后2组患者临床总体疗效及疾病活动度(Mayo评分)。结果显示,1)治疗15d后,2组患者血清SOD较治疗前均升高(P<0.05),TNF-α、IL-1β较治疗前均降低(P<0.05),且观察组SOD升高幅度、TNF-α和IL-1β降低幅度均大于对照组;治疗后2组间比较,观察组患者血清SOD水平明显高于对照组(P<0.05),TNF-α、IL-1β水平均明显低于对照组(P<0.05)。2)治疗1个月后,观察组总有效率(92.5%)明显高于对照组(80.0%),P<0.05。3)治疗1个月后,2组患者Mayo评分均较治疗前降低(P<0.05),且观察组Mayo评分较对照组降低更明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结果表明,薏苡附子败酱散加减保留灌肠治疗UC患者的疗效优于美沙拉嗪肠溶片口服,其作用机制可能与上调SOD和下调TNF-α、IL-1β水平有关。